Bovine endometrial cells as an in vitro model to address early embryo maternal cross-talk

We optimized a bovine endometrial epithelial cell (BEEC) line as a valuable research model for the study of early embryo-maternal interactions in vitro. Therefore, we aimed to characterize the BEEC monolayers along the primary culture and the first three passages with respect to the expression of cell-origin markers, by immunofluorescence, and abundance of functional key transcripts, by Real Time PCR. BEECs isolated from uteri (at early luteal phase) ex vivo were cultured and subpassed three times. Based on the markers studied, we conclude that BEEC monolayers undergo an epithelial-mesenchymal transition in vitro but preserve functional characteristics after few passages

HOTEL SPA HOLÍSTICO OM SHANTI

Os seres humanos são dotados de diversas emoções. Estas emoções, dadas por estímulos físicos e/ou mentais, quando em desequilíbrio são capazes de confundir e causar um estado profundo de desordem mental, física e espiritual, podendo transformarem-se também em doenças. Atualmente torna-se cada vez mais comum encontrar pessoas em busca de caminhos ligados à espiritualidade como uma forma tanto de autoconhecimento e cura quanto de reconexão com sua fé. Buscando esta transformação espiritual individual e coletiva que desenvolveu-se o presente anteprojeto do Hotel Spa Holístico Om Shanti, com o objetivo de proporcionar bem estar nas esferas, mental, física e energética, aos que buscarem por este espaço, tendo como público alvo pessoas que já possuem uma caminhada de autorrealização ou que estejam em busca dela. Aliado a isto, tornou-se indispensável a busca por técnicas arquitetônicas sustentáveis que valorizem e respeitem a natureza, sendo todo o projeto pensado através do conceito de permacultura e bioconstrução. Tomou-se como lócus de estudo a Universidade do Oeste de Santa Catarina (UNOESC), por representar um setor de particular interesse científico para a pesquisadora. Em relação aos procedimentos metodológicos, a pesquisa escolhida foi a qualitativa com vistas à complementação e robustez na produção das informações. Os resultados são a geração de conhecimentos aplicáveis à melhoria de qualidade de vida e de bem-estar humano, relevando importantes aspectos relacionados com uma forma mais sustentável de construir estes espaços de bem-estar nos dias de hoje. Palavras-chave: Hotel. Holismo. Espiritualidade. Permacultura

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Os seres humanos são dotados de diversas emoções, dadas por estímulos físicos e/ou mentais. Quando em desequilíbrio, são capazes de confundir e causar um estado profundo de desordem mental, física e espiritual, podendo transformarem-se em doenças. Torna-se cada vez mais comum encontrar pessoas em busca de caminhos ligados à espiritualidade como uma forma de autoconhecimento, cura e reconexão com sua fé. Buscando esta transformação espiritual desenvolveu-se o presente anteprojeto do Hotel Spa Holístico Om Shanti, com o objetivo de proporcionar bem-estar nas esferas, mental, física e energética. Aliado a isto, buscou-se por técnicas arquitetônicas sustentáveis que valorizem e respeitem a natureza, sendo todo o projeto pensado através do conceito de permacultura e bioconstrução. Em relação aos procedimentos metodológicos, a pesquisa escolhida foi à qualitativa com vistas à produção das informações. Os resultados são a geração de conhecimentos aplicáveis à melhoria de qualidade de vida e de bem-estar humano, relevando importantes aspectos relacionados com uma forma mais sustentável de construir estes espaços de bem-estar nos dias de hoje.Palavras-chave: Hotel. Holismo. Espiritualidade. Permacultura

Oral rehabilitation with removable dental prosthesis in a six-year-old patient with hypohidrotic ectodermal dysplasia

Introduction: Ectodermal dysplasia is an abnormality of the ectoderm and its derivatives, phenotypically expressed in males and genetically inherited from mothers. Objective: To report the efficacy of the prosthetics treatment of severe ectodermal dysplasia in a 6-year-old boy with hypohidrotic ectodermal dysplasia (HED). Case report: The boy had difficulty in speaking and eating and the condition also affected his self-esteem. Prosthetic treatments included the construction of acrylic custom trays, determination of the vertical dimension of occlusion (VDO), construction of upper and lower dentures, and palatal expansion procedure. Conclusion: Significant improvements in the patient’s stomatognathic functionand self-esteem were evident.Introduction: Ectodermal dysplasia is an abnormality of the ectoderm and its derivatives, phenotypically expressed in males and genetically inherited from mothers. Objective: To report the efficacy of the prosthetics treatment of severe ectodermal dysplasia in a 6-year-old boy with hypohidrotic ectodermal dysplasia (HED). Case report: The boy had difficulty in speaking and eating and the condition also affected his self-esteem. Prosthetic treatments included the construction of acrylic custom trays, determination of the vertical dimension of occlusion (VDO), construction of upper and lower dentures, and palatal expansion procedure. Conclusion: Significant improvements in the patient’s stomatognathic functionand self-esteem were evident

Size of the Ovulatory Follicle Dictates Spatial Differences in the Oviductal Transcriptome in Cattle

In cattle, molecular control of oviduct receptivity to the embryo is poorly understood. Here, we used a bovine model for receptivity based on size of the pre-ovulatory follicle to compare oviductal global and candidate gene transcript abundance on day 4 of the estrous cycle. Growth of the pre-ovulatory follicle (POF) of Nelore (Bos indicus) cows was manipulated to produce two groups: large POF large corpus luteum (CL) group (LF-LCL; greater receptivity) and small POF-small CL group (SF-SCL). Oviductal samples were collected four days after GnRH-induced ovulation. Ampulla and isthmus transcriptome was obtained by RNA-seq, regional gene expression was assessed by qPCR, and PGR and ERa protein distribution was evaluated by immunohistochemistry. There was a greater abundance of PGR and ERa in the oviduct of LF-LCL animals thus indicating a greater availability of receptors and possibly sex steroids stimulated signaling in both regions. Transcriptomic profiles indicated a series of genes associated with functional characteristics of the oviduct that are regulated by the periovulatory sex steroid milieu and that potentially affect oviductal receptivity and early embryo development. They include tissue morphology changes (extra cellular matrix remodeling), cellular changes (proliferation), and secretion changes (growth factors, ions and metal transporters), and were enriched for the genes with increased expression in the LF-LCL group. In conclusion, differences in the periovulatory sex steroid milieu lead to different oviductal gene expression profiles that could modify the oviductal environment to affect embryo survival and development

Oviductal transcriptional profiling of a bovine fertility model by next-generation sequencing

In cattle, the oviduct plays a fundamental role in the reproductive process. Oviductal functions are controlled by the ovarian sex steroids: estradiol and progesterone. Here, we tested the hypothesis that the exposure to contrasting sex steroid milieus differentially impacts the oviductal transcriptional profile. We manipulated growth of the pre-ovulatory follicle to obtain cows that ovulated a larger (LF group) or a smaller (SF group) follicle. The LF group presented greater proestrus/estrus concentrations of estradiol and metaestrus concentrations of progesterone (Gonella-Diaza et al. 2015 [1], Mesquita et al. 2014 [2]). Also, the LF group was associated with greater fertility in timed-artificial insemination programs (Pugliesi et al. 2016 [3]). Cows were slaughtered on day 4 of the estrous cycle and total RNA was extracted from ampulla and isthmus fragments and analyzed by RNAseq. The resulting reads were mapped to the bovine genome (Bos taurus UMD 3.1, NCBI). The differential expression analyses revealed that 325 and 367 genes in ampulla and 274 and 316 genes in the isthmus were up-regulated and down-regulated in LF samples, respectively. To validate the RNAseq results, transcript abundance of 23 genes was assessed by qPCR and expression patterns were consistent between the two techniques. A functional enrichment analysis was performed using Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery (DAVID) software. Processes enriched in the LF group included tissue morphology changes (extracellular matrix remodeling), cellular changes (proliferation), and secretion changes (growth factors, ions and metal transporters). An overview of the gene expression data was deposited in the NCBI's Gene Expression Omnibus (GEO) and is accessible through the accession number GSE65681. In conclusion, differences in the peri-ovulatory sex steroid milieu modify the oviductal gene expression profiles. Such differences may be associated with the greater fertility of the LF cows. This dataset is useful for further investigations of the oviductal biology and the impact of sex-steroid on the female reproductive tract

Club cell CREB regulates the goblet cell transcriptional network and pro-mucin effects of IL-1B

Introduction: Club cells are precursors for mucus-producing goblet cells. Interleukin 1β (IL-1B) is an inflammatory mediator with pro-mucin activities that increases the number of mucus-producing goblet cells. IL-1B-mediated mucin production in alveolar adenocarcinoma cells requires activation of the cAMP response element-binding protein (CREB). Whether the pro-mucin activities of IL-1B require club cell CREB is unknown.Methods: We challenged male mice with conditional loss of club cell Creb1 and wild type littermates with intra-airway IL-1B or vehicle. Secondarily, we studied human “club cell-like” H322 cells.Results: IL-1B increased whole lung mRNA of secreted (Mucin 5ac, Mucin 5b) and tethered (Mucin 1, Mucin 4) mucins independent of genotype. However, loss of club cell Creb1 increased whole lung mRNA of member RAS oncogene family (Rab3D), decreased mRNA of the muscarinic receptor 3 (M3R) and prevented IL-1B mediated increases in purinergic receptor P2Y, (P2ry2) mRNA. IL-1B increased the density of goblet cells containing neutral mucins in wildtype mice but not in mice with loss of club cell Creb1. These findings suggested that club cell Creb1 regulated mucin secretion. Loss of club cell Creb1 also prevented IL-1B-mediated impairments in airway mechanics. Four days of pharmacologic CREB inhibition in H322 cells increased mRNA abundance of forkhead box A2 (FOXA2), a repressor of goblet cell expansion, and decreased mRNA expression of SAM pointed domain containing ETS transcription factor (SPDEF), a driver of goblet cell expansion. Chromatin immunoprecipitation demonstrated that CREB directly bound to the promoter region of FOXA2, but not to the promoter region of SPDEF. Treatment of H322 cells with IL-1B increased cAMP levels, providing a direct link between IL-1B and CREB signaling.Conclusion: Our findings suggest that club cell Creb1 regulates the pro-mucin properties of IL-1B through pathways likely involving FOXA2

Periovulatory sex steroid tone controls transcription and function of the bovine uterus

O estabelecimento gestacional é determinado por interações entre o perfil endócrino e o trato reprodutivo materno. Eventos endócrinos são primariamente mediados pela ligação do hormônio a receptores específicos e subsequente transcrição de genes alvos. O endométrio bovino é um tecido dinâmico que passa por alterações espaço-temporais dirigidas pelos hormônios ovarianos, estradiol (E2) e progesterona (P4). A hipótese é que os efeitos combinados das concentrações plasmáticas de E2 e P4 à abundância tecidual de seus respectivos receptores estabelecem um “tônus de esteroides sexuais” que dirige funções do endométrio durante o período periovulatório em vacas. Os objetivos foram comparar diferentes tônus de esteroides na (1) expressão de receptores específicos e sua distribuição tecidual, (2) expressão de genes de resposta que regulam a função uterina, e (3) abundância e distribuição de mucina pelo epitélio, uma glicoproteína que indica pobre receptividade endometrial. Vacas Nelore (Bos indicus) foram farmacologicamente manipuladas para ovular um folículo pequeno (FP-CLP) ou grande (FG-CLG) e produzir, respectivamente, menores ou maiores concentrações plasmáticas de E2 no proestro e de P4 no diestro. O grupo FG-CLG representa um modelo de maior fertilidade. Tecido endometrial foi coletado através de biópsia transvaginal no dia zero (D0; FP-CLP, n=4; FG-CLG, n=5) e post mortem no D4 (n=8 por grupo; Experimento 1) ou D7 (FP-CLP, n=8; FG-CLG, n=9; Experimento 2) após indução da ovulação com GnRH. Para estudar a regulação endometrial dos receptores de esteroides, a abundância de transcritos para receptores nucleares e de membrana de esteroides foi mesurada por qPCR: receptor de estrógenos alpha (ESR1) e beta (ESR2), receptor de estrógeno acoplado a proteína G (GPER), receptor de P4 isoformas A (PGR1), B (PGR2) e C (PGR3), receptor de P4 componente de membrana 1 (PGRMC1) e 2 (PGRMC2). Genes previamente mostrados estarem envolvidos em vias de resposta ao E2 foram selecionados: GREB1, CCND1, WNT5a, FGF2 (proliferação), SERPINA14, LTF, NRIP1 (atividade secretória), MMP2 (remodelamento de matriz extracelular), AQP4 (transporte de água) e MUC1 (adesão celular). Os dados foram analisados por one-way ANOVA para efeito de tratamento. O tamanho do POF, subsequente CL, concentrações plasmáticas de E2 (D0) e P4 (D4 e D7) foram significativamente maiores no grupo FG-CLG. No D0, a abundância de mRNA para ESR1, PGR1, PGR2 e PGR3 foi significativamente maior no tecido endometrial de vacas do grupo FG-CLG. A abundância de transcritos envolvidos na proliferação e remodelamento de matriz extracelular sugeriu maior atividade proliferativa e remodelamento no endométrio do grupo FG-CLG no D0. No D4, a expressão de PGR1 e PGRMC2 foi menor no grupo FG-CLG. A abundância de mRNA para AQP4 foi maior no grupo FG-CLG e positivamente correlacionada com a concentração de E2 pré-ovulatório. No D7, a abundância de mRNA foi maior para ESR2, PGRMC1 e PGRMC2, e reduzida para PGR2 e PGR3 em vacas do grupo FG-CLG. Abundância de mRNA para OXTR e MUC1 foi menor neste grupo. Análise histológica de amostras endometriais revelaram que o sinal para mucinas anti-adesivas no epitélio do grupo FG-CLG foi consistentemente menor quando comparado ao grupo FP-CLP (33.3% vs. 62.0%) no D7. A menor expressão de mucinas transmembranas indica a condição receptiva do endométrio. Estes resultados confirmam que a complexa modulação da expressão dos receptores de esteroides pelo ambiente endócrino periovulatório altera a transcrição de genes alvos de maneira tempo-específica para regular a receptividade uterina ao embrião em desenvolvimentoEstablishment of pregnancy depends on a well-balanced interplay between the endocrine profiles and the maternal reproductive tract. Endocrine actions are primarily mediated by binding to specific receptors and subsequent transcription of responsive genes. The bovine endometrium is a dynamic tissue that undergoes spatiotemporal functional changes directed by ovarian hormones, estradiol (E2) and progesterone (P4). Hypothesis is that the combined effects of plasma concentrations of E2 and P4 and tissue abundance of their respective receptors establish a “sex steroid tone” that directs endometrial function during the periovulatory period in cattle. Therefore, the aims were to compare different sex steroid tones on (1) steroid receptors gene expression and protein distribution, (2) expression of steroid responsive genes that regulate uterine function and (3) abundance and distribution of epithelial mucin, a glycoprotein that indicates poor endometrial receptivity. Nelore (Bos indicus) cows were pharmacologically manipulated to ovulate small (SFSCL) or large (LFLCL) follicles. Consequently, LF-LCL group was associated with greater proestrus concentrations of E2 and diestrus concentrations of P4, which were previously associated with greater receptivity and fertility. Endometrial tissue was collected by transvaginal biopsy on day zero (D0; SF-SCL, n=4; LF-LCL, n=5), and post mortem on D4 (n=8 per group; Experiment 1) or D7 (SF-SCL, n=8; LF-LCL, n=9; Experiment 2) after GnRH-induced ovulation. To study the regulation of endometrial steroid receptors, abundance of the following transcripts for nuclear and membrane receptor for steroids was measure by qPCR: estrogen receptor alpha (ESR1) and beta (ESR2), G protein-coupled estrogen receptor (GPER), progesterone receptor isoforms A (PGR1), B (PGR2) and C (PGR3), progesterone receptor membrane component 1 (PGRMC1) and 2 (PGRMC2). A subset of genes previously shown to be involved with estrogen-dependent pathways was also studied: GREB1, CCND1, WNT5a, FGF2 (proliferation), SERPINA14, LTF, NRIP1 (secretory activity), MMP2 (extracellular matrix remodeling), AQP4 (aqueous transport) and MUC1 (cell-adhesion pathways). Data were analyzed by one-way ANOVA for the effect of treatment. The POF, subsequent CL size, plasmatic E2 (D0) and P4 concentrations (D4 and D7) were significantly greater in the LFLCL group. On D0, the abundance of mRNA for ESR1, PGR1, PGR2 and PGR3 genes was significantly up-regulated in the endometrial tissue from LFLCL cows compared to the SFSCL counterparts. Abundance of transcripts for growth-related and extracellular matrix remodeling-related genes suggested greater proliferative and remodeling activity on LF-LCL than SF-SCL endometrial tissue at D0. On D4, expression of PGR1 and PGRMC2 was down-regulated in the LFLCL group. The AQP4 mRNA abundance was greater in LF-LCL group and it was positively correlated with preovulatory E2 concentration. On D7, mRNA abundance was greater for ESR2, PGRMC1 and PGRMC2, while it was reduced for PGR2 and PGR3 in the LF-LCL cows. Abundance of mRNA for secretory activity-related genes was increased in LF-LCL group. Abundance of mRNA for OXTR and MUC1 was down-regulated in the LF-LCL group. Histology of endometrial samples revealed that the signal for anti-adhesive mucin at the LF-LCL epithelium was consistently lower than that of the SF-SCL tissue (33.3% vs. 62.0%) at D7. A down-regulated expression of the transmembrane mucin indicates a receptive condition of the endometrium. These results confirm that complex modulation of receptor expression by the periovulatory steroid milieu alters transcription of responsive genes in a time-specific manner to regulate uterine receptivity to the developing embry

Decifrando o interactoma materno-embrionário: Programação do funcionamento do endométrio dependente do embrião durante a gestação inicial em bovinos

A successful pregnancy is dependent on the intrinsic embryonic program, operating in conjunction with extrinsic signals emanating from the maternal reproductive tract, as well as on a coordinated interaction between the embryonic and the maternal units. Current knowledge about the pre-elongation embryo-dependent programming of endometrial function in cattle is limited. Central hypothesis is that bovine embryos are able to modulate the endometrial function as early as day 7 after estrus. In the first study, spatially defined regions of the endometrium transcriptome were interrogated for responses to a day 7 embryo in vivo. Endometrial samples were collected from the uterotubal junction, anterior, medial and posterior regions of the uterine horn ipsilateral to the corpus luteum 7 days after estrus from sham-inseminated or artificially inseminated, confirmed pregnant Nellore cows. Abundance of 12 out of 87 transcripts analyzed was modulated in the pregnant endometrium, including classic interferon-induced genes and transcripts associated to eicosanoid biosynthesis. Changes were predominantly in the most cranial portion of the uterine horn, where the embryos were located. In addition, abundance of 71 transcripts varied according to region of the reproductive tract, irrespective to the pregnancy status. Targeted mass spectrometry-based quantification of 205 metabolites in the uterine luminal fluid (ULF) recovered from the most cranial portion of the ipsilateral uterine horn showed that exposure to a day-7 embryo changes ULF composition in vivo. Embryo-induced modulation included an increase in concentrations of lipoxygenase-derived metabolites and a decrease in concentrations of amino acids, biogenic amines, acylcarnitines and phospholipids. The changed composition of the ULF could be due to secretion or depletion of specific molecules, executed by either the embryo or the endometrium, but initiated by signals coming from the embryo. In the second study, an in vitro model was used to probe embryo-induced changes on bovine endometrial epithelial cells (BEECs) transcriptome and investigate modes of inter-tissues molecular communication. In vitro-produced morulae were co-cultured in juxtaposition or without a direct contact with a BEEC monolayer. Extra groups of BEECs or embryos alone were cultured as controls. Irrespective of juxtaposition to the cell monolayer, co-culture with BEECs improved blastocyst rates on day 7.5. Physical proximity between embryos and the BEEC monolayer, nevertheless, did alter nature and intensity of embryo-induced changes on BEEC transcriptome. Embryos juxtapositioned modulated transcription of 1,797 versus 230 genes in BEECs not contacting embryos directly, in relation to cells cultured in the absence of embryos. Pathways modulated by presence of embryos included interferon-mediated immune responses, cell cycle regulation and apoptosis, prolactin signaling, and prostanoid biosynthesis. Overall, from the results obtained in the course of this thesis, we conclude that peri-hatching bovine embryos modulate the endometrial function. Herein, we provide candidate systems that might be important for conditioning the uterine environment for conceptus development. Early embryonic signaling might be necessary to guarantee optimal development and successful establishment of pregnancy in cattle.O sucesso gestacional depende do programa embrionário intrínseco, operando em conjunto com fatores extrínsecos que emanam do trato reprodutivo materno, bem como de uma coordenada interação entre as unidades materna e embrionária. Atualmente, o conhecimento sobre a programação do funcionamento do endométrio dependente do embrião pré-elongado é limitado. A hipótese central desta tese é que embriões bovinos são capazes de modular a função endometrial no dia 7 após o estro. No primeiro estudo, regiões espacialmente definidas do transcriptoma endometrial foram interrogadas quanto a respostas a um embrião no dia 7 in vivo. Amostras de endométrio foram coletadas da junção útero-tubárica, região anterior, medial e posterior do corno uterino ipsilateral ao corpo lúteo 7 dias após o estro de vacas Nelore artificialmente inseminadas e confirmadas gestantes, ou de vacas em que a inseminação foi mimetizada. A abundância de 12 dos 87 transcritos analisados foi modulada no endométrio de animais gestantes, incluindo genes estimulados por interferon (ISGs) e genes associados à biossíntese de eicosanoides. As alterações foram predominantemente nas porções mais craniais do corno uterino, onde o embrião estava localizado. Além disso, a abundância de 71 transcritos variou de acordo com a região do trato reprodutivo, independentemente da presença do embrião. Quantificação baseada em espectrometria de massa de 205 metabólitos no fluido luminal uterino (ULF) recuperado da porção mais cranial do corno uterino ipsilateral mostrou que a exposição ao embrião altera a composição do ULF no dia 7 in vivo. Modulações induzidas pelo embrião incluem aumento nas concentrações de metabólitos derivados da via das lipoxigenases e diminuição nas concentrações de aminoácidos, aminas biogênicas, acilcarnitinas e fosfolipídios. Alterações na composição do ULF podem ser devido à secreção ou depleção de moléculas específicas, executadas pelo embrião ou pelo endométrio, mas iniciadas por sinais provenientes do embrião. No segundo estudo, um modelo in vitro foi usado para estudar as alterações induzidas por embriões no transcriptoma de células epiteliais endometriais bovinas (BEEC) e investigar modos de comunicação molecular entre tecidos. Mórulas produzidas in vitro foram co-cultivadas em justaposição ou sem contato direto com BEECs. Grupos de BEECs ou embriões sozinhos foram cultivados como controles. Independentemente da justaposição à monocamada, o co-cultivo com BEECs melhorou as taxas de blastocistos no dia 7,5. A proximidade física entre embriões e a monocamada de células, no entanto, alterou a natureza e a intensidade das alterações induzidas pelos embriões no transcriptoma das células endometriais. Embriões justapostos modularam a transcrição de 1.797 versus 230 genes em BEECs não contactando diretamente os embriões, quando comparadas às células cultivadas na ausência de embriões. Vias moduladas pela presença de embriões incluíram resposta imune mediada por interferon, regulação do ciclo celular e apoptose, sinalização via prolactina e biossíntese de prostanoides. Coletivamente, a partir dos resultados obtidos nesta tese, concluímos que embriões bovinos pré-elongamento são capazes de modular a função endometrial. A presente tese fornece vias candidatas que parecem ser importantes para o condicionamento do ambiente uterino para o desenvolvimento do concepto. A sinalização embrionária precoce pode ser necessária para garantir o desenvolvimento ideal e o estabelecimento da gestação em bovinos

Decifrando o interactoma materno-embrionário: Programação do funcionamento do endométrio dependente do embrião durante a gestação inicial em bovinos

A successful pregnancy is dependent on the intrinsic embryonic program, operating in conjunction with extrinsic signals emanating from the maternal reproductive tract, as well as on a coordinated interaction between the embryonic and the maternal units. Current knowledge about the pre-elongation embryo-dependent programming of endometrial function in cattle is limited. Central hypothesis is that bovine embryos are able to modulate the endometrial function as early as day 7 after estrus. In the first study, spatially defined regions of the endometrium transcriptome were interrogated for responses to a day 7 embryo in vivo. Endometrial samples were collected from the uterotubal junction, anterior, medial and posterior regions of the uterine horn ipsilateral to the corpus luteum 7 days after estrus from sham-inseminated or artificially inseminated, confirmed pregnant Nellore cows. Abundance of 12 out of 87 transcripts analyzed was modulated in the pregnant endometrium, including classic interferon-induced genes and transcripts associated to eicosanoid biosynthesis. Changes were predominantly in the most cranial portion of the uterine horn, where the embryos were located. In addition, abundance of 71 transcripts varied according to region of the reproductive tract, irrespective to the pregnancy status. Targeted mass spectrometry-based quantification of 205 metabolites in the uterine luminal fluid (ULF) recovered from the most cranial portion of the ipsilateral uterine horn showed that exposure to a day-7 embryo changes ULF composition in vivo. Embryo-induced modulation included an increase in concentrations of lipoxygenase-derived metabolites and a decrease in concentrations of amino acids, biogenic amines, acylcarnitines and phospholipids. The changed composition of the ULF could be due to secretion or depletion of specific molecules, executed by either the embryo or the endometrium, but initiated by signals coming from the embryo. In the second study, an in vitro model was used to probe embryo-induced changes on bovine endometrial epithelial cells (BEECs) transcriptome and investigate modes of inter-tissues molecular communication. In vitro-produced morulae were co-cultured in juxtaposition or without a direct contact with a BEEC monolayer. Extra groups of BEECs or embryos alone were cultured as controls. Irrespective of juxtaposition to the cell monolayer, co-culture with BEECs improved blastocyst rates on day 7.5. Physical proximity between embryos and the BEEC monolayer, nevertheless, did alter nature and intensity of embryo-induced changes on BEEC transcriptome. Embryos juxtapositioned modulated transcription of 1,797 versus 230 genes in BEECs not contacting embryos directly, in relation to cells cultured in the absence of embryos. Pathways modulated by presence of embryos included interferon-mediated immune responses, cell cycle regulation and apoptosis, prolactin signaling, and prostanoid biosynthesis. Overall, from the results obtained in the course of this thesis, we conclude that peri-hatching bovine embryos modulate the endometrial function. Herein, we provide candidate systems that might be important for conditioning the uterine environment for conceptus development. Early embryonic signaling might be necessary to guarantee optimal development and successful establishment of pregnancy in cattle.O sucesso gestacional depende do programa embrionário intrínseco, operando em conjunto com fatores extrínsecos que emanam do trato reprodutivo materno, bem como de uma coordenada interação entre as unidades materna e embrionária. Atualmente, o conhecimento sobre a programação do funcionamento do endométrio dependente do embrião pré-elongado é limitado. A hipótese central desta tese é que embriões bovinos são capazes de modular a função endometrial no dia 7 após o estro. No primeiro estudo, regiões espacialmente definidas do transcriptoma endometrial foram interrogadas quanto a respostas a um embrião no dia 7 in vivo. Amostras de endométrio foram coletadas da junção útero-tubárica, região anterior, medial e posterior do corno uterino ipsilateral ao corpo lúteo 7 dias após o estro de vacas Nelore artificialmente inseminadas e confirmadas gestantes, ou de vacas em que a inseminação foi mimetizada. A abundância de 12 dos 87 transcritos analisados foi modulada no endométrio de animais gestantes, incluindo genes estimulados por interferon (ISGs) e genes associados à biossíntese de eicosanoides. As alterações foram predominantemente nas porções mais craniais do corno uterino, onde o embrião estava localizado. Além disso, a abundância de 71 transcritos variou de acordo com a região do trato reprodutivo, independentemente da presença do embrião. Quantificação baseada em espectrometria de massa de 205 metabólitos no fluido luminal uterino (ULF) recuperado da porção mais cranial do corno uterino ipsilateral mostrou que a exposição ao embrião altera a composição do ULF no dia 7 in vivo. Modulações induzidas pelo embrião incluem aumento nas concentrações de metabólitos derivados da via das lipoxigenases e diminuição nas concentrações de aminoácidos, aminas biogênicas, acilcarnitinas e fosfolipídios. Alterações na composição do ULF podem ser devido à secreção ou depleção de moléculas específicas, executadas pelo embrião ou pelo endométrio, mas iniciadas por sinais provenientes do embrião. No segundo estudo, um modelo in vitro foi usado para estudar as alterações induzidas por embriões no transcriptoma de células epiteliais endometriais bovinas (BEEC) e investigar modos de comunicação molecular entre tecidos. Mórulas produzidas in vitro foram co-cultivadas em justaposição ou sem contato direto com BEECs. Grupos de BEECs ou embriões sozinhos foram cultivados como controles. Independentemente da justaposição à monocamada, o co-cultivo com BEECs melhorou as taxas de blastocistos no dia 7,5. A proximidade física entre embriões e a monocamada de células, no entanto, alterou a natureza e a intensidade das alterações induzidas pelos embriões no transcriptoma das células endometriais. Embriões justapostos modularam a transcrição de 1.797 versus 230 genes em BEECs não contactando diretamente os embriões, quando comparadas às células cultivadas na ausência de embriões. Vias moduladas pela presença de embriões incluíram resposta imune mediada por interferon, regulação do ciclo celular e apoptose, sinalização via prolactina e biossíntese de prostanoides. Coletivamente, a partir dos resultados obtidos nesta tese, concluímos que embriões bovinos pré-elongamento são capazes de modular a função endometrial. A presente tese fornece vias candidatas que parecem ser importantes para o condicionamento do ambiente uterino para o desenvolvimento do concepto. A sinalização embrionária precoce pode ser necessária para garantir o desenvolvimento ideal e o estabelecimento da gestação em bovinos