Desenvolvimento exoeritrocítico de Plasmodium gallinaceum em cultura primária de fibroblasto de embrião de galinha

No presente estudo, avaliamos a susceptibilidade de cultura primária de fibroblastos de embrião de galinha à infecção por esporozoítas de P. gallinaceum, assim como o desenvolvimento de estágios do ciclo exoeritrocítico. Fibroblastos foram obtidos a partir da musculatura do peito de embriões de galinha e esporozoítas foram obtidos de glândulas salivares de Aedes fluviatilis experimentalmente infectados. Após períodos de 1h, 3h, 24h, 48h e 72h após a infecção, culturas de células foram fixadas e analisadas através de imunofluorescência indireta empregando-se anticorpos monoclonais contra a proteína circum-esporozoíta e microscopia eletrônica de transmissão. Proteína circum-esporozoíta foi detectada em todas as formas parasitárias. O percentual médio de fibroblastos com esporozoítas aderidos ou já penetrados não aumentou proporcionalmente com a concentração de parasitos no inóculo e independeu se o soro utilizado no cultivo celular era soro bovino fetal ou soro de galinha normal. Foi observado que, quando maior é o período de incubação, maior é a possibilidade dos esporozoítas aderirem e penetrarem nos fibroblastos. Esporozoítas foram observados penetrando em fibroblastos depois de 3h de incubação, quando 0,68% das células tinham parasitos aderidos. A diferenciação e o desenvolvimento das formas exoeritrocíticas foram observados após 24h de incubação, quando somente 0.04% dos fibroblastos achavam-se infectados. A cultura primária de fibroblastos de galinha parece ser um valioso modelo experimental para a investigação in vitro do ciclo exoeritrocítico do P. gallinaceum.In this study we assessed the susceptibility of primary fibroblast culture of chicken embryo to infection of P. gallinaceum sporozoites as well as the initial development of exoerithrocytic stages. Fibroblasts were obtained from the chest muscles of chicken embryos and sporozoites were obtained from experimentally infected Aedes fluviatilis salivary glands. After 1h, 3h, 24h, 48h and 72h periods pos-infection, cell cultures were fixed and analyzed both by indirect immunofluorescent-antibody test with anti-circumsporozoite protein monoclonal antibodies and by transmission electron microscopy. Circumsporozoite protein was detected in all parasitic forms. The mean percentage of fibroblasts with adhered or penetrated sporozoites did not significantly increase proportionately to the concentration of parasites in the inoculum, and independently if fetal calf or normal chicken sera were used in the culture medium. It was noted that the longer the incubation time, higher the possibility of the sporozoites to adhere and penetrate to fibroblats. Spozoites were observed penetrating in the fibroblast after 3h incubation when 0.68% of the cells had adhered parasites. Differentiation and development of the exoerythrocytic forms was observed after 24h incubation, when an average of 0,14% of the parasites have already invaded the cells. Developing parasites were found until 72h, when only 0.04% of fibroblasts were infected. Fibroblast cell culture seems to be a valuable experimental tool for in vitro investigation of the exoerytrocytic cycle of P. gallinaceum

A interface entre o ensino do processo de enfermagem e sua aplicação na prática assistencial

O processo de enfermagem caracteriza-se como uma tecnologia de cuidado. Este estudo objetivou refletir sobre o ensino do Processo de Enfermagem no curso de graduação em enfermagem. Considera-se que o mesmo se configura como uma tecnologia leve-dura no cuidado de enfermagem, favorável a efetividade e eficiência dos serviços de saúde. A reflexão aponta três temas de discussão: o processo de enfermagem como referencial para a prática de enfermagem; o processo de enfermagem como tecnologia do cuidado e o seu ensino do nos cursos de graduação em enfermagem. Este é entendido como uma tecnologia leve-dura, pois, em sua concepção, os saberes estruturados, associados ao diálogo e a escuta sensível, estão presentes e definem a ação da enfermeira. Possibilita a construção de uma consciência crítica para os envolvidos no cuidado, sendo a comunicação um instrumento necessário. Surgem novos modos de trabalho e tecnologias que são incorporadas continuamente às práticas dos profissionais. Isto traz um desafio para a formação e prática das Enfermeiras, no qual se considere o novo saber, pois o processo enfermagem como tecnologia exige abertura para a complexidade e um exercício crítico para o atendimento das necessidades dos seres humanos, foco do cuidado de enfermagem. Descritores: Educação em Enfermagem; Processo de Enfermagem; Tecnologia; Enfermagem

Recent contributions for a better understanding of the Trypanosoma cruzi - muscle cell interaction

Submitted by Sandra Infurna ([email protected]) on 2019-10-01T17:30:53Z No. of bitstreams: 1 MariaNazareMeirelles_HeleneSBarbosa_etal_IOC_1984.pdf: 343927 bytes, checksum: 989cebcbdaa66a7e9bf83f084eed3b11 (MD5)Approved for entry into archive by Sandra Infurna ([email protected]) on 2019-10-01T17:39:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 MariaNazareMeirelles_HeleneSBarbosa_etal_IOC_1984.pdf: 343927 bytes, checksum: 989cebcbdaa66a7e9bf83f084eed3b11 (MD5)Made available in DSpace on 2019-10-01T17:39:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaNazareMeirelles_HeleneSBarbosa_etal_IOC_1984.pdf: 343927 bytes, checksum: 989cebcbdaa66a7e9bf83f084eed3b11 (MD5) Previous issue date: 1984Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Centro de Microscopia Eletrônica. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Centro de Microscopia Eletrônica. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Universidade Federal do Rio de Janeiro. Instituto de Biofísica, Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Centro de Microscopia Eletrônica. Rio de Janeiro, RJ, Brasil

Osteoblasts and Bone Marrow Mesenchymal Stromal Cells Control Hematopoietic Stem Cell Migration and Proliferation in 3D In Vitro Model

BACKGROUND: Migration, proliferation, and differentiation of hematopoietic stem cells (HSCs) are dependent upon a complex three-dimensional (3D) bone marrow microenvironment. Although osteoblasts control the HSC pool, the subendosteal niche is complex and its cellular composition and the role of each cell population in HSC fate have not been established. In vivo models are complex and involve subtle species-specific differences, while bidimensional cultures do not reflect the 3D tissue organization. The aim of this study was to investigate in vitro the role of human bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BMSC) and active osteoblasts in control of migration, lodgment, and proliferation of HSCs. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: A complex mixed multicellular spheroid in vitro model was developed with human BMSC, undifferentiated or induced for one week into osteoblasts. A clear limit between the two stromal cells was established, and deposition of extracellular matrix proteins fibronectin, collagens I and IV, laminin, and osteopontin was similar to the observed in vivo. Noninduced BMSC cultured as spheroid expressed higher levels of mRNA for the chemokine CXCL12, and the growth factors Wnt5a and Kit ligand. Cord blood and bone marrow CD34(+) cells moved in and out the spheroids, and some lodged at the interface of the two stromal cells. Myeloid colony-forming cells were maintained after seven days of coculture with mixed spheroids, and the frequency of cycling CD34(+) cells was decreased. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: Undifferentiated and one-week osteo-induced BMSC self-assembled in a 3D spheroid and formed a microenvironment that is informative for hematopoietic progenitor cells, allowing their lodgment and controlling their proliferation

Expressão e análise antigênica da proteína RTP36 recombinante da amostra São Paulo de Ehrlichia canis para testes sorológicos

Ehrlichia canis is the main etiological agent of canine monocytic ehrlichiosis (CME), a globally canine infectious disease. In Brazil, CME is considered to be endemic, and its prevalence can reach 65% in some states. The diagnosis of ehrlichiosis is important for treatment and epidemiological purposes. The E. canis TRP36 (Tandem Repeat Protein) protein elicits the earliest acute-phase antibody response observed during the course of the disease. This study aimed to generate the recombinant TRP36 protein from E. canis São Paulo strain and to evaluate its potential as a tool for the serologic diagnosis of CME. The E. canis São Paulo isolate was cultivated in DH82 lineage cells, and its genomic DNA was obtained. The bacterial DNA fragment encoding the entire ORF of TRP36 was cloned into the pBAD/Thio-TOPO vector and transformed into Escherichia coli DH10B competent cells with the trp36-bearing plasmid for protein expression. To evaluate the protein antigenicity, 16 canine serum samples were previously tested (by PCR and the commercial SNAP4Dx serological test). The results were in accordance with the SNAP4Dx test. Experiments using this recombinant protein as an antigen, targeting the development of a serologic test based on ELISA methodology, are the next step to produce a reliable, affordable and useful diagnostic tool for CME in Brazil.Ehrlichia canis é o principal agente etiológico da erliquiose monocítica canina (EMC), uma doença infecciosa canina globalmente dispersa. No Brasil, a EMC é considerada endêmica, e a infecção pode atingir 65% em cães em alguns estados. O diagnóstico de erliquiose é importante para fins de tratamento e epidemiológicos. A proteína TRP36 de E. canis leva a uma resposta humoral com produção de anticorpos em fase aguda, encontrada durante o curso da doença. O objetivo deste estudo foi obter a proteína TRP36 recombinante da amostra São Paulo de E. canis e avaliar seu potencial como ferramenta para o diagnóstico sorológico da CME. O isolado de E. canis São Paulo foi cultivado em células da linhagem DH82 e o DNA genômico foi obtido. O fragmento de DNA bacteriano que codifica toda a ORF de TRP36 foi clonado no vetor pBAD / Thio-TOPO e transformado em células competentes Escherichia coli DH10B, com o plasmídeo portador de trp36 para expressão de proteínas. Para avaliar a antigenicidade da proteína, 16 amostras de soro canino foram previamente analisadas (por PCR e teste sorológico comercial SNAP4Dx). Os resultados estavam de acordo com o teste SNAP4Dx. Os experimentos que utilizam essa proteína recombinante como antígeno, visando ao desenvolvimento de um teste sorológico baseado no ELISA, são o próximo passo para produzir um teste de diagnóstico confiável, acessível e útil para o diagnóstico da EMC no Brasil