Tuberculosis bovina : transmisibilidad de cepas de Mycobacterium bovis y detección de micobacterias en menudencias comercializadas en bocas de expendio de carne

Tesis para obtener el grado de Doctor en Ciencias Veterinarias, área Microbiología, de la Universidad de Buenos Aires, en 2019La tuberculosis bovina, causada por Mycobacterium bovis (M. bovis), es endémica en la Argentina. Su presencia en el ganado bovino representa un riesgo para la salud humana debido a su carácter zoonótico, pudiendo además afectar a diversos mamíferos. En el hombre, M. bovis causa enfermedad con presentación pulmonar o extrapulmonar siendo la clínica indistinguible de la producida por Mycobacterium tuberculosis. Los más expuestos son los niños que consumen leche o sus derivados sin pasteurizar, los adultos relacionados con la actividad laboral pecuaria y también los cazadores. Para evitar la llegada del agente al consumidor, una de las últimas barreras de protección es la inspección bromatológica en el frigorífico para poder detectar lesiones compatibles con tuberculosis y decomisar los órganos afectados y si está generalizado la res completa. Se realiza visualmente y por palpación, pero debido a la patogenia de la tuberculosis, sólo las lesiones crónicas pueden ser evidenciadas por este monitoreo. La micobacteria puede estar presente incluso en tejidos sin lesión aparente, siendo los principales órganos afectados los linfonódulos y los pulmones, pudiéndose encontrar en otros órganos parenquimatosos como el hígado. Esto puede conducir a escapes del sistema de vigilancia permitiendo que las micobacterias lleguen a los comercios y posteriormente al consumidor. En este trabajo fueron recolectados 210 pulmones junto con los linfonódulos orrespondientes y 6 hígados bovinos, provenientes de un frigorífico y de 6 carnicerías de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires y de la provincia de Buenos Aires. Los pulmones recolectados en el frigorífico fueron inspeccionados in situ y se tomaron muestras del órgano para el trabajo en el laboratorio. Los pulmones e hígados que fueron comprados completos en carnicerías y fueron inspeccionados en el laboratorio. Se obtuvieron un total de 5 aislamientos de M. bovis en medio Stonebrink confirmados por PCR IS-6110 (aislamientos N° 134, 719, 179, 182 y 184) y además 12 aislamientos de micobacterias no tuberculosas confirmadas por la secuenciación de los genes hsp65, rpoB, 16S ARNr y secuenciación genómica de alto rendimiento para uno de ellos. Los aislamientos de M. bovis fueron caracterizados molecularmente por Spoligotyping y MIRU-VNTR. Se pudieron distinguir 3 patrones de Spoligotyping que se correspondieron con 3 patrones de MIRU-VNTR, 3 aislamientos compartieron ambos patrones y los otros 2 fueron únicos. Adicionalmente, se investigó en 3 de los aislamientos su capacidad de resistencia a drogas utilizadas en el tratamiento de la tuberculosis en humanos (rifampicina, isoniazida, etionamida, levofloxacina y estreptomicina), encontrándose que el aislamiento 184 era resistente a isoniazida y el aislamiento 134 era multirresistente (presentando resistencia a los 4 antibióticos probados y considerado ?border? para levofloxacina). Se realizó la secuenciación completa del genoma de uno de los aislamientos identificado como M. kansasii empleando una plataforma Illumina mySeq. El genoma fue anotado y se describió sus características así como también se evaluó la presencia de single nucleotide polymorphism (SNPs) en genes de virulencia y genes relacionados a la resistencia a antibióticos y codificantes de antígenos empleados para el diagnóstico de tuberculosis. Se evaluó la virulencia y transmisibilidad de los aislamientos N° 134 y 182 junto con una cepa de referencia M. bovis AN5 (considerada de virulencia intermedia), en un modelo murino. Los animales fueron inoculados intratraquealmente, con 1x105 UFC de cada una de las cepas a evaluar, y dichos animales se pusieron en contacto con ratones sin inocular en una relación 1:1. Se evaluó la virulencia en los animales inoculados, mientras que en los contactos sanos, se evaluó la transmisibilidad de las cepas. Se realizó la eutanasia de 5 animales infectados y 5 animales contactos sanos de cada grupo, en los tiempos 30, 60 y 90 días post-inoculación. Se cultivaron los pulmones y bazos de todos los animales infectados y los contactos sanos en los medios apropiados, evaluando su crecimiento semanalmente. Adicionalmente, los bazos fueron procesados para cuantificar las citoquinas IL-4, TNF ? e INF? por citometría de flujo mediante el kit comercial Cytometric bead array. El aislamiento N° 134 demostró ser virulento por producir sintomatología incompatible con la vida al día 16 posterior a la inoculación, produciendo la muerte de 9 animales, los 6 restantes fueron eutanasiados. El aislamiento N° 182 generó esplenomegalia en los ratones infectados, pero no se observó el desmejoramiento ni la muerte de los animales. Además, se pudo describir la transmisibilidad del aislamiento 182, mediante el aislamiento de la micobacteria a partir de bazo de uno de los animales ?contacto?. A partir del presente trabajo se pudo detectar la presencia de micobacterias tanto zoonóticas como ambientales en vísceras comercializadas. La virulencia, transmisibilidad y la resistencia a antibióticos de cada una de ellas fue variable, requiriéndose de estudios futuros para una mejor comprensión del impacto de estas observaciones en la dinámica de la enfermedad tanto en el ámbito veterinario como en Salud pública.Bovine tuberculosis, a disease caused by Mycobacterium bovis (M. bovis), is endemic in Argentine. Its presence in cattle represents a risk to human health, due to its zoonotic nature and can also affect various mammals. In human beings, M. bovis causes disease with pulmonary or extrapulmonary presentation, being the clinical manifestation undistinguishable from that produced by M. tuberculosis. The most exposed are children who consume unpasteurized milk or its products, adults who works with livestock and also hunters. To avoid the arrival of the agent to the consumer, one of the main barriers of protection are the carcasses post-mortem inspection at the slaughterhouse, to detect and confiscate organs with lesions compatible with tuberculosis or even the hole animal. Inspection is performed visually and by palpation of the bovine organ, but due to the pathogenesis of the Mycobacterium, only the chronic lesions can be evidenced in this inspection. The Mycobacterium might be present even in tissues without apparent lesion, being the lymph nodes and the lungs, the most affected organs: Other parenchymal organs such as the liver could also be affected. This can lead to escapes of the surveillance system allowing the Mycobacteria to reach the stores and hence, arrive to the consumer. In this study, 210 lungs along with the corresponding lymph nodes and 6 bovine livers were collected, in one slaughterhouse and 6 butchers´ shops in the city of Buenos Aires and the great Buenos Aires area. The lungs collected in the slaughterhouse were inspected in situ and small portions of them were taken. Complete lungs and livers that were bought in butchers´ shops and were then inspected in the laboratory. A total of 5 isolates of M. bovis were obtained in Stonebrink medium and its identity confirmed by PCR IS-6110 (isolates number 134, 719, 179, 182 and 184). Additionally 12 non-tuberculous mycobacteria were isolated and confirmed by the sequencing of the hsp65, rpoB and 16S rRNA genes. The isolates of M. bovis were molecularly characterized by Spoligotyping and MIRU-VNTR. We could differentiate 3 Spoligotyping patterns that corresponded with the 3 patterns of MIRU-VNTR obtained. Three isolates shared both patterns and the other 2 were unique. Additionally, drug resistance to human treatment commonly used drugs (rifampicin, isoniazid, ethionamide, levofloxacin and streptomycin) was investigated in all M. bovis isolates, and it was found that isolate number 184 was resistant to isoniazid and isolate number 134 was multi-resistant (showing resistance to the 4 antibiotics tested and considered "border" for levofloxacin). One non-tuberculous mycobacteria isolates from which good quality DNA was obtained was completely sequenced (whole genome equencing). The genome was annotated and its characteristics were investigated as well as the presence of single nucleotide polymorphism (SNPs) in virulence genes and genes related to resistance to antibiotics and antigens used for diagnosis. The virulence and transmissibility of isolates number 134 and 182 were evaluated together with a reference strain M. bovis-AN5 (considered of intermediate virulence), in an experimental assay in a mouse model. A total of 99 BALB/c female mice aged 5 weeks, were separated in 3 groups of 33 animals each. In turn, each group was divided into 6 cages, the first cage with 3 animals and the remaining cages with 6 animals. All animals in cage number 1 of each group and 3 from each of the remaining cages, were intratracheally inoculated under sedation with isoflurane, with 1x105 CFU of each of the strains to be evaluated, suspended in 100 ?L of PBS, keeping the relationship between inoculated animal and healthy contact 1:1. Virulence was evaluated in those animals that were inoculated, while in the healthy contacts that were living with the infected animals the transmissibility of the strains was investigated. Euthanasia of 5 infected animals and 5 healthy contact animals of each group were performed at times 30, 60 and 90 days post-inoculation. The lungs and spleens of all infected animals and healthy contacts were cultured. The cultures were grown at 37°C for up to 2 months, with weekly evaluation of their growth. Spleens were further processed to measure the cytokines IL-4, TNF? and INF? with the use of a commercial Cytometric bead array kit. Strain number 134 showed to be virulent because it produced symptoms incompatible with life on day 16 after inoculation, producing the death of 9 animals, the remaining 6 were euthanatized and processed. Strain number 182 generated spleen enlargement in the infected mice, but it did not generate the illness or death of any of them. The transmissibility of strain 182 could be evidenced, due to the observation of the growth of colonies from a spleen of a contact animal in the time of euthanasia 90 days after inoculation It was possible to detect the presence of both, zoonotic and environmental mycobacteria, in commercialized viscera. The virulence, transmissibility and drugresistance of the M. bovis strains was variable, requiring future studies for a better understanding of the dynamics of the disease.Instituto de BiotecnologíaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentin

Tuberculosis in wild South American sea lions Otaria flavescens stranded in Chubut, Argentina

Pinniped tuberculosis, commonly caused by Mycobacterium pinnipedii, is a zoonotic disease reported in free-living and captive otariid species of the southern hemisphere. Currently, data concerning pinniped tuberculosis in South America are scarce, reinforcing the need for further studies of the disease in free-ranging pinnipeds. In this study, we investigated the presence of tuberculosis in South American sea lions Otaria flavescens (SASLs) stranded along the Chubut coastline (Argentina). Necropsies were performed in 9 SASLs, and tissue samples were collected for histopathology, bacteriology, and molecular diagnosis. Four SASLs showed enlarged tracheobronchial lymph nodes (TBLNs) with multifocal to coalescing granulomas. In these animals, a direct IS6110-PCR amplification confirmed the presence of a Mycobacterium tuberculosis complex member in TBLNs (n = 4) and lungs (n = 2), but the agent could not be further identified. In one SASL, Mycobacterium murale was isolated from lungs without lesions. This study confirms the presence of tuberculosis in SASLs from Chubut, where tourist activities promote close interaction with the animals, generating a potential risk to human health. Further research is currently focusing on addressing the prevalence of tuberculosis in wild SASLs, to assess the risk for public health and develop management strategies to avoid human infection.Fil: Fiorito, Carla Daniela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Centro para el Estudio de Sistemas Marinos; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Falzoni, Elvira María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Martínez Vivot, Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Zumárraga, Martín José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Lombardo, Daniel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Barandiaran, Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Mastitis tuberculosa en bovinos de leche : reporte de casos

La tuberculosis bovina (TB) es una enfermedad del ganado producida principalmente, por Mycobacterium bovis (M. bovis). Aunque es conocido el riesgo de infección en terneros asociados al manejo del calostro y leche (Evangelista and De Anda, 1996), la utilización de leche cruda es frecuente en rodeos lecheros de la región (Garro et al., 2010). Sin embargo, es escasa la información sobre la ocurrencia de mastitis por TB. El objetivo de este estudio es describir las características patológicas y epidemiológicas de cuatro casos de mastitis tuberculosa en bovinos de producción de leche.Instituto de PatobiologíaFil: Garro, Carlos Javier. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Delgado, Fernando Oscar. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Zumarraga, Martin Jose. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Garbaccio, Sergio Gabriel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; Argentin

Aislamiento de Mycobacterium intracellulare a partir de un pulmón bovino comercializado en una carnicería de la zona oeste del conurbano bonaerense = Isolate of Mycobacterium intracellulare from a bovine lung marketed in a butcher shop from western of Greater Buenos Aires

Se realizó un muestreo de 62 pulmones bovinos en una carnicería y un frigorífico de la zona oeste del conurbano bonaerense. De uno de ellos, adquirido en una carnicería, y sin lesiones visibles compatibles con tuberculosis, se obtuvo por cultivo en medio Stonebrink desarrollo de bacilos ácido alcohol resistentes. Por polymerase chain reaction restriction analysis y secuenciación del gen que codifica 16S ARN ribosomal se identificó Mycobacterium avium subsp. intracellulare. Esta especie pertenece al complejo Mycobacterium avium y es considerada una micobacteria oportunista ya que normalmente no produce signos clínicos, aunque ha sido aislada de mamíferos enfermos. Este hallazgo en un pulmón bovino nos alerta sobre el potencial riesgo de transmisión a animales que consumen este tipo de alimento crudo y a personas inmunosuprimidas que lo manipulan.Sixty two bovine lungs were sampled in one butcher shop and one slaughterhouse from the western region of Greater Buenos Aires. In one of them, purchased in a butcher shop, which showed no lesions compatible with tuberculosis, we obtained an isolate of acid fast bacilli on Stonebrink medium. Mycobacterium avium subsp. intracellulare was identified using polymerase chain reaction restriction analysis and sequencing of the gene encoding 16S rRNA. This species belongs to the Mycobacterium avium complex and is regarded as opportunistic mycobacteria because it usually does not cause clinical signs, but it has been isolated from diseased mammals. This finding in a bovine lung alerts us about the potential risk of transition to animals that consume this type of food raw and to immunosuppressed people who manipulate it.Instituto de BiotecnologíaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Garbaccio, Sergio Gabriel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Huertas, Pablo Sebastian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Barandiaran, Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Alonso, Bernardo.. Ministerio de Agricultura, Ganadería, Pesca y Alimento. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria; ArgentinaFil: Zumárraga, Martín José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentin

Epidemiology of Pig Tuberculosis in Argentina

Bovine tuberculosis (bTB) is a disease caused mainly by the Mycobacterium bovis and that is endemic to livestock populations in most Latin American countries. Traditionally, bTB control programs are costly and targeted to cattle, largely disregarding other species such as swine and wildlife. According to official services, in Argentina disease prevalence in pigs is comparable to that observed in cattle, suggesting the need for efficient control programs to manage the disease in both species. Additionally, extensive farming systems, which are commonly practiced in Argentina, allow the interaction between livestock and wildlife such as wild boar (Sus scrofa), which is considered a natural host of the disease. Here, we evaluated the bTB pigs- cattle interface, studying the dynamics of M. bovis isolates in the pig population and identifying farm-level epidemiological variables associated with the disease confirmation at slaughterhouses. Additionally, to assess the potential multi-host systems in the transmission of bTB, the molecular characterization of wild boar mycobacterial strains was included in the study, as this interaction has not been previously evaluated in this region. Multivariable logistic regression models were used to assess the association between farm-level epidemiological variables (location, farm size, and co-existence with cattle and goats) and bTB confirmation in pig tuberculosis-like lesions samples. Results showed that when cattle were present, the odds of bTB in pigs decreased 0.3 or 0.6% for every additional sow when cattle were present or absent in the farm, respectively. Pigs shared 60% (18/30) of the genotypes with cattle and wild boar, suggesting transmission at the interface between pigs and cattle and highlighting the potential role of wild boar in bTB maintenance. These results provide novel information about the molecular diversity of M. bovis strains in pigs in Argentina and proposes the potential relevance of a multi-host system in the epidemiology of bTB in the region. The statistical models presented here may be used in the design of a low cost, abattoir-based surveillance program for bTB in the pig industry in Argentina, with potential extension to other settings with similar epidemiological conditions.Instituto de BiotecnologíaFil: Barandiaran, Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Barandiaran, Soledad. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Enfermedades Infecciosas; ArgentinaFil: Capobianco, Guillermo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Matemática de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Capobianco, Guillermo. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Matemática. Instituto de Matemática de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Perez Aguirreburualde, María Sol. University of Minnesota. College of Veterinary Medicine; Estados UnidosFil: Zumarraga, Martin Jose. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Zumarraga, Martin Jose. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Eirin, Maria Emilia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Eirin, Maria Emilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cuerda, Maria Ximena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Cuerda, Maria Ximena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Winter, Marina. Universidad Nacional de Río Negro. Centro de Investigaciones y Transferencia de Río Negro; ArgentinaFil: Martinez Vivot, Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Enfermedades Infecciosas; ArgentinaFil: Pérez, Andrés Maximiliano. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Pérez, Andrés Maximiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: La Sala, Luciano Francisco. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: La Sala, Luciano Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentin

Mycobacterioses in dogs and cats from Buenos Aires, Argentina

Mycobacterioses can produce nonspecific clinical signs in dogs and cats that make diagnosis difficult. Furthermore, the full characterization of mycobacterial agents is not always possible or practical. We characterized mycobacteria detected through cytology in 12 dogs and 7 cats with generalized clinical signs from the province of Buenos Aires in Argentina. In dogs, molecular testing confirmed the presence of Mycobacterium avium subsp. hominissuis (MAH) in 8 cases and M. fortuitum in 1 case. All dogs were Miniature Schnauzers, suggesting that this breed may be more susceptible to M. avium than other dog breeds. The cat isolates were 2 M. bovis, 1 M. fortuitum, and 1 MAH. Mycobacterial interspersed repetitive unit–variable-number tandem repeat patterns suggested possible links with cattle, swine, and humans studied previously in Argentina. The results show that pets may act as susceptible hosts with the potential risk of transmitting the infection to humans and other animals.Instituto de BiotecnologíaFil: Barandiaran, Soledad. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Martinez Vivot, Marcela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Falzoni, Elvira. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Perez Tort, Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Virreyes Veterinary Hospital; ArgentinaFil: Rovatti, Paula. Private Veterinary Clinic; ArgentinaFil: Fernandez, Mónica. Zoonosis Luis Pasteur Institute; ArgentinaFil: Iachini, Ricardo. Zoonosis Luis Pasteur Institute; ArgentinaFil: Satek, Fernanda. Surgical Veterinary Clinic (EQVET); ArgentinaFil: Duchene, Adriana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Zumarraga, Martin Jose. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentin

Molecular characterization of Mycobacterium bovis infection in cattle and buffalo in Amazon Region, Brazil

The aim of this study was to characterize Mycobacterium bovis from cattle and buffalo tissue samples, from two Brazilian states, and to analyse their genetic diversity by spoligotyping. Tissue samples from tuberculosis suspect animals, 57 in Amazonas State (12 cattle and 45 buffaloes) and six from Pará State (5 cattle and one buffalo) from slaughterhouses under State Veterinary Inspection, were isolated in culture medium Stonebrink. The positive cultures were confirmed by PCR and analysed by the spoligotyping technique and the patterns (spoligotypes) were identified and compared at the Mycobacterium bovis Spoligotype Database (http://www.mbovis.org/). There was bacterial growth in 44 (69.8%) of the tissues of the 63 animals, of which PCR for region of differentiation 4 identified 35/44 (79.5%) as Mycobacterium bovis. Six different spoligotypes were identified among the 35 Mycobacterium bovis isolates, of which SB0295, SB1869, SB0121 and SB1800 had already been described in Brazil, and SB0822 and SB1608 had not been described. The most frequent spoligotype in this study (SB0822) had already been described in buffaloes in Colombia, a neighbouring country of Amazonas state. The other identified spoligotypes were also described in other South American countries, such as Argentina and Venezuela, and described in the Brazilian states of Rio Grande do Sul, Santa Catarina, São Paulo, Minas Gerais, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso and Goiás, indicating an active movement of Mycobacterium bovis strains within Brazil.Instituto de BiotecnologíaFil: Carneiro, Paulo A. M. Michigan State University. Center for Comparative Epidemiology; Estados UnidosFil: Pasquatti, Taynara N. Dom Bosco Catholic University; BrasilFil: Takatani, Haruo. Agencia de Defesa Agropecuaria do Amazonas; BrasilFil: Zumarraga, Martin Jose. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Barnard, Christian. Agencia de Defesa Agropecuaria do Amazonas; BrasilFil: Fitzgerald, Scott D. Michigan State University. Veterinary Diagnostic Laboratory; Estados UnidosFil: Abramovitch, Robert B. Michigan State University. Department of Microbiology and Molecular Genetics; Estados UnidosFil: Araujo, Flabio Ribeiro de. Centro Nacional de Pesquisa de Gado de Corte; BrasilFil: Kaneene, John B. Michigan State University. Center for Comparative Epidemiology; Estados Unido

Pathogenesis of domestic pigs submitted to mycobacterial sensitizations previous to experimental infection with Mycobacterium bovis

Aim of study: To demonstrate the virulence of a Mycobacterium bovis local pig isolate in order to contribute to a better understanding of the pathological and immunological consequences of M. bovis infection in previous sensitized animals. Area of study: Buenos Aires, Argentina Material and methods: One group of ten pigs received two oral doses of killed M. bovis suspension and a comparative intradermal tubercu-lin test (CIT) (multiple sensitized) and then was infected with the M. bovis strain. Another group only received the CIT (single sensitized) and the infective dose. Humoral immune response was followed monthly, and gross pathology, histopathological and bacteriological analysis were performed at necropsy 100 days after infection. Main results: M. bovis oral infection induced lesions and allowed bacterial growth in most of the animals. Previous sensitization with killed M. bovis suspension slightly raised the intensity of the response, as the multiple sensitized group showed higher lesion scores and humoral response. Research highlights: Although the differences in lesion scores were not statistically significant, oral route infection after sensitization can modify the course of infections towards a fast development of lesions with a higher fibrotic component suggestive of increased resistance to infection in the right conditions.Fil: Cuerda, Maria Ximena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Colombatti Olivieri, María Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Gravisaco, María J.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Barandiaran, Soledad. Universidad de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Sevilla, Iker A.. Centro de Investigación. Neiker - Tecnalia; EspañaFil: Garrido, Joseba M.. Centro de Investigación. Neiker - Tecnalia; EspañaFil: Moyano, Roberto Damian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Zumárraga, Martín José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Romano, Maria Isabel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Juste, Ramón A.. Centro de Investigación. Neiker - Tecnalia; EspañaFil: Santangelo, María de la Paz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación En Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; Argentin

Evaluación de antígenos recombinantes en la prueba de interferón gamma en bovinos tuberculosos no reactores a la prueba tuberculínica

La tuberculosis se encuentra presente en rodeos bovinos de nuestro país, impactando a nivel de los sistemas de producción de cría y lecheros por disminuir la eficiencia productiva de los animales infectados e imponer restricciones al comercio internacional de productos cárnicos, lecheros y sus derivados. A su vez, constituye un problema de salud pública por tratarse de una zoonosis. A nivel internacional, se ha demostrado que la prueba intradérmica de la tuberculina es eficaz en la identificación de los animales infectados por M. bovis, el agente causal de la tuberculosis bovina (TBB), siendo la prueba oficial a nivel local que se emplea en el marco del plan de control y erradicación (SENASA, Resol. 128/12)1. Sin embargo, existen animales que por diferentes causas si bien están infectados no reaccionan a dicha prueba, representando un problema para aquellos establecimientos que entran en etapa de saneamiento. Estos animales constituyen potenciales focos de infección ya que pueden ser excretores de la micobacteria. La determinación de liberación de interferón gamma (IFN-ɣ) es una técnica que puede emplearse de manera complementaria a la prueba intradérmica de la tuberculina. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la determinación de IFN-ɣ, utilizando como inmunógeno proteínas recombinantes de M. bovis con el fin de estudiar la capacidad de detección de animales no reactores a la prueba tuberculinica en rodeos en saneamiento.Instituto de BiotecnologíaFil: Ferrara Muñiz, Ximena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Garbaccio, Sergio Gabriel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología; ArgentinaFil: Delgado, Fernando Oscar. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Garro, Carlos Javier. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Huertas, Pablo Sebastian. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Patobiología Veterinaria; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Zumarraga, Martin Jose. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Eirin, Maria Emilia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología; Argentin

Prevalence and species diversity of nontuberculous mycobacteria in drinking water supply system of Bahía Blanca City, Argentina

Background: There is evidence that tap water is the vehicle through which nontuberculous mycobacteria (NTM) infect or colonize the human body. The objective of this study was to determine the presence and diversity of NTM in the water distribution system of Bahía Blanca city, Argentina (sites S2/S3) and in the dike that supplies water to it (S1). Methods: Culture-dependent method, biochemical tests, and molecular method (16S rRNA sequencing gene) were combined to detect and identify NTM. Results: NTM were isolated in 51.6% (64/124) of all the samples analyzed. Mycobacterium gordonae was the most frequently isolated organism (15/64) in all samples analyzed, followed by Mycobacterium peregrinum and Mycobacterium frederiksbergense. Significant differences were found in the residual chlorine values between sampling S2 and S3. In both sites, maximum counts were recorded but they did not correlate with low chlorine values. A concentration higher than 500 colony-forming unit/L of NTM was never found, which can be attributed to the negative effect caused by decontamination methods being a point to consider for the recovery of NTM. In 46.9% (30/64) of samples, both methods coincided in the identification, and the obtained sequences presented ≥99% identity. Identification at the species level was achieved in 50% (32/64) of the isolates. Nearly 17.2% (11/64) of the isolates showed a similarity <99%. Conclusions: It should be taken into account that sequencing of the 16S rRNA gene and biochemical tests are useful for the identification of several species, but it is necessary to incorporate other genes (hsp 65 and rpo B) to obtain accurate identification.Fil: Oriani, Alejandra Soledad. Universidad Nacional del Sur; ArgentinaFil: Marfil, Maria Jimena. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Zumárraga, Martín José. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Baldini, Monica Diana. Universidad Nacional del Sur; Argentin