Diagnóstico diferencial para infecção cutânea crônica em região endêmica de leishmaniose / Differential diagnosis for chronic skin infection in leishmaniose endemic region

Indivíduos residentes ou expostos à área de transmissão de Leishmaniose tegumentar americana (LTA) com úlceras crônicas devem ser investigados para a doença. Diagnósticos diferenciais incluempiodermites, paracoccidioidomicose (PCM) e carcinoma espinocelular. Realizado relato de caso a partir da revisão de prontuário e literatura. Homem, 63 anos, agricultor aposentado, tabagista, etilista, com úlcera interglútea extensa e indolor, e emagrecimento de 10kg em quatro anos. Anatomopatológico em 2013 foi positivo para LTA, tratado com antimoniato de metilglucamina sem melhora. Em 2016, quadro evoluiu com tosse seca, febre e nova úlcera retroauricular direita, apresentando raspados conflitantes, um em 2016 positivo e outro em 2017 negativo para LTA. Internado para investigação das lesões, ao exame havia leve redução do murmúrio vesicular. Tomografia de tórax com extensas consolidações irregulares em vidro fosco, difusamente distribuídas, associada a espessamento de septos interlobulares. Anatomopatológico de ambas as lesões revelou presença de células gigantes multinucleadas, com estruturas fúngicas esféricas e multiesporuladas compatíveis com PCM. Raspado e cultura para LTA negativos. Iniciado tratamento com itraconazol, resultando em melhora progressiva das úlceras. A PCM é infecção frequente no Brasil e sua manifestação tegumentar pode confundir-se com LTA. Há necessidade de investigação da coinfecção em úlceras com resposta insatisfatória ao tratament

Development and validation of PCR-based assays for diagnosis of American cutaneous leishmaniasis and identificatio nof the parasite species

In this study, PCR assays targeting different Leishmania heat-shock protein 70 gene (hsp70) regions, producing fragments ranging in size from 230-390 bp were developed and evaluated to determine their potential as a tool for the specific molecular diagnosis of cutaneous leishmaniasis (CL). A total of 70 Leishmania strains were analysed, including seven reference strains (RS) and 63 previously typed strains. Analysis of the RS indicated a specific region of 234 bp in the hsp70 gene as a valid target that was highly sensitive for detection of Leishmania species DNA with capacity of distinguishing all analyzed species, after polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorfism (PCR-RFLP). This PCR assay was compared with other PCR targets used for the molecular diagnosis of leishmaniasis: hsp70 (1400-bp region), internal transcribed spacer (ITS)1 and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6pd). A good agreement among the methods was observed concerning the Leishmania species identification. Moreover, to evaluate the potential for molecular diagnosis, we compared the PCR targets hsp70-234 bp, ITS1, G6pd and mkDNA using a panel of 99 DNA samples from tissue fragments collected from patients with confirmed CL. Both PCR-hsp70-234 bp and PCR-ITS1 detected Leishmania DNA in more than 70% of the samples. However, using hsp70-234 bp PCR-RFLP, identification of all of the Leishmania species associated with CL in Brazil can be achieved employing a simpler and cheaper electrophoresis protocol

Avaliação da eficácia do Leishvacin no tratamento de leishmaniose cutânea

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007.O antimonial pentavalente, indicado como tratamento de escolha para a leishmaniose tegumentar americana (LTA), é um medicamento eficaz, mas de toxicidade elevada. A resposta imune estabelecida pelo homem diante de uma infecção por Leishmania é fator determinante para a evolução dessa infecção. Assim, pode ser considerada de interesse a avaliação de uma modalidade de tratamento capaz de induzir uma resposta imune associada à regressão de lesões e proteção, o que por hipótese poderia ocorrer com a estimulação antigênica resultante do uso de uma vacina antileishmaniose. Estudos relatados com uma vacina produzida no Brasil, inicialmente avaliada para a profilaxia da LTA e posteriormente para a terapia da doença, mostraram resultados satisfatórios. Nesses trabalhos, o uso do Leishvacin® associou-se a taxas de cura semelhantes às obtidas com os antimoniais, mas sempre se utilizando esquemas prolongados, nos quais as séries eram várias vezes repetidas. Com a proposta de se avaliar a eficácia do uso do Leishvacin® como imunoterapia na leishmaniose cutânea, conduziu-se um ensaio clínico controlado e randomizado, aberto em decorrência da diferença das vias de administração dos medicamentos em comparação. Considerou-se como essencial que o esquema terapêutico a ser utilizado fosse aplicável em situações habituais de assistência aos pacientes com LTA. A amostra inicialmente planejada foi modificada após uma análise intermediária que mostrou resultados conclusivos quanto ao desfecho, não havendo justificativa ética para a continuidade do estudo. Foram tratados 34 pacientes com Leishvacin® e 32 pacientes com Glucantime® em série única de 20 dias, com 133 administração diária supervisionada dos medicamentos. Eram na maioria do sexo masculino (92,4%), com idade variando de 20 a 50 anos (72,7%). Todos tiveram algum exame parasitológico positivo, 92,2% com identificação do parasito por PCR, todos pertencentes ao complexo Viannia. Os pacientes foram avaliados quanto ao desfecho principal cura ou falha terapêutica ao final da série e a cada 30 dias, com tempo máximo de 90 dias de observação após a medicação. Numa análise de intenção de tratar, apresentaram cura clínica 20,6% dos pacientes do grupo do Leishvacin® e 81,3% dos pacientes do grupo do Glucantime® (p<0,001). O risco relativo de apresentar falha foi 4,25 vezes maior no grupo do Leishvacin® e a média de tempo para a ocorrência de falha terapêutica foi de 12,3 semanas (11,4; 13.3) e de 14,5 (13,6; 15,1) nos grupos do Leishvacin® e do Glucantime®, respectivamente. O efeito do tratamento manteve-se como significante após ajuste numa análise de regressão logística. O uso do Leishvacin® esteve associado a uma freqüência baixa de eventos adversos sistêmicos. O uso do antimonial associou-se a freqüência elevada de artralgia e mialgia, sintomas digestivos e confirmou a já relatada tendência de elevação da amilase sérica e enzimas hepáticas. Não houve indicação de interrupção dos esquemas terapêuticos para pacientes do estudo. O Leishvacin® não se mostrou como uma alternativa de tratamento da leishmaniose cutânea localizada no esquema e dose utilizados no presente ensaio clínico. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACTPentavalent antimonial is the first-choice drug for the treatment of American tegumentary leishmaniasis (ATL) but it causes relevant toxicity. The immune response established by the host constitutes a determinant factor for the evolution of this infection. Thus, it is an important goal to evaluate alternative treatments that could induce lesion healing, hypothetically, this situation would be achievable through the use of anti-leishmanial vaccination. Some reports on studies carried out with a vaccine produced in Brazil, used as a prophylactic or therapeutic against leishmaniasis, had shown good results. In those reports, cure rates with Leishvacin® were similar to the cure rates observed with pentavalent antimonial treatment, but the patient exposure to Leishvacin® was longer and repeated compared to the the exposure to antimonial. To evaluate the effectiveness of the use of the Leishvacin® as imunotherapy for cutaneous leishmaniasis, we conducted an open-label controlled randomized clinical trial, considering the difference in the administration route of Leishvacin® and Glucantime®. It was considered essential to evaluate a feasible schedule to be used in common health-care facilities which take care of the patients with ATL. An interim analysis supported the interruption of the study because of a clear inferiority observerd in the immunotherapy arm. Thirty-four and thirty-two patients were submitted to Leishvacin® and Glucantime® treatment, respectively, in only one series of 20 days, with supervised daily administration. The patients were mainly male (92.4%), with age range from 20 to 50 years (72.7%). All had had confirmation of the diagnosis based on parasitological tests, 92.2% with identification of the parasite by the PCR 135 assay. All identified parasites belong to the Viannia complex. Main outcomes were diagnosed by clinical criteria at the end of the treatment series and every 30 days thereafter. The total follow-up after treatment was three months. Intention-to-treat analysis showed cure rate of 20.6% in the Leishvacin® group and of 81.3% in the Glucantime® group (p<0.001). The relative risk of failure was 4.25 times higher in the Leishvacin® group and the mean time-to-failure were 12.3 weeks (11.4; 13.3) and 14.5 (13.6; 15.1) for Leishvacin® and Glucantime®, respectively. The effect of the treatment remained significant after adjusting by relevant co-variates in a logistic regression model. The use of Leishvacin® was associated with a low frequency of systemic adverse events. Glucantime® group showed higher frequency of arthralgia and myalgia, dyspeptic symptoms and abnormal serum amylase and hepatic enzymes levels without clinical symptoms. There was no need of Glucantime® interruption because of adverse events. Concluding, our results with Leishvacin® do not suggest that it could be an alternative against cutaneous leishmaniasis in the treatment schedule and dose used in the present trial

Expression of annexin A1 in Leishmania-infected skin and its correlation with histopathological features

ABSTRACTINTRODUCTION:The aim of this study was quantify annexin A1 expression in macrophages and cluster of differentiation 4 (CD4) + and cluster of differentiation 8 (CD8)+ T cells from the skin of patients with cutaneous leishmaniasis (n=55) and correlate with histopathological aspects.METHODS:Infecting species were identified by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, and expression of annexin A1 was analyzed by immunofluorescence.RESULTS:All patients (n = 55) were infected with Leishmania braziliensis . Annexin A1 was expressed more abundantly in CD163 + macrophages in infected skin (p < 0.0001) than in uninfected skin. In addition, macrophages in necrotic exudative reaction lesions expressed annexin A1 at higher levels than those observed in granulomatous (p < 0.01) and cellular lesions p < 0.05). This difference might be due to the need to clear both parasites and necrotic tissue from necrotic lesions. CD4 + cells in cellular lesions expressed annexin A1 more abundantly than did those in necrotic (p < 0.05) and granulomatous lesions (p < 0.01). Expression in CD8 + T cells followed the same trend. These differences might be due to the pervasiveness of lymphohistiocytic and plasmacytic infiltrate in cellular lesions.CONCLUSIONS:Annexin A1 is differentially expressed in CD163 + macrophages and T cells depending on the histopathological features of Leishmania -infected skin, which might affect cell activation

The use of radionuclide DNA probe technology for epidemiological studies of tegumentary leishmaniasis in Mato Grosso state

DNA hybridisation, using probes labelled with 32P, was used to type Leishmania samples isolated from patients living in endemic areas of Mato Grosso State (Brazil), and clinically diagnosed as having tegumentary leishmaniasis. kDNA cloned mini-circle probes specific for the Leishmania mexicana and Leishmania braziliensis complexes were used. The results showed that L. braziliensis is the predominant group infecting human patients in the state. Sixty-eight samples were typed, 64 samples (94.1%) belonging to the L. braziliensis complex and only four (5.9%) belonging to the L. mexicana complex. Accurate identification of the Leishmania permits better orientation of the medical follow-up, since clinical manifestations may vary depending on the complex to which the parasite belongs. The epidemiological information furnished by the identification of the Leishmania in given endemic area is also essential for the design of appropriate control measures<br>Hibridização, utilizando sondas de DNA marcadas com 32P, foi utilizada para a tipagem de amostras de Leishmania isoladas de pacientes do estado do Mato Grosso (Brasil), diagnosticados clinicamente como portadores de leishmaniose tegumentar. Sondas de minicírculos clonados de kDNA, específicas para os complexos Leishmania mexicana e Leishmania braziliensis, foram utilizadas. Os resultados demonstraram que o complexo L. brasiliensis é o grupo predominante infectando pacientes humanos no estado do Mato Grosso. Foram tipadas 68 amostras: 64 (94,1%) foram identificadas como pertencentes ao complexo L. brasiliensis e somente 4 (5,9%) como pertencentes ao complexo L. mexicana. A tipagem de Leishmania é importante para um melhor acompanhamento médico, uma vez que as manifestações clínicas podem variar em função do complexo ao qual o parasita pertence. A informação fornecida pela identificação também é essencial para a definição das medidas de controle mais adequadas e compreensão da epidemiologia da doença