Phylogenetics Based on Partial ORF2 of Triatoma Virus in Triatomines Collected over a Decade from Domiciliary Habitats

The only virus sequenced and studied in triatomines is the Triatoma virus, from the Dicistroviridae family, which causes delayed development, reduced oviposition, and premature death of infected insects. With the goal of expanding the sequences already obtained in previous years and verifying if any changes occurred in their genomic sequences, 68 samples of triatomines from several provinces of Argentina were analyzed. Sixteen positive samples were obtained by Reverse Transcription (RT)-polymerase chain reaction using the VP3-VP1 subregion of open reading frame-2 as a diagnostic method; after sequencing, 11 samples were obtained from Triatoma infestans. These new sequences showed no significant differences in the analyzed regions, which were not grouped by species or habitat or geographical distribution. There were no differences when compared with the sequences found during 2002-2012, all obtained from the wild.We conclude that despite being an RNA virus, the different sequences show high homology.Centro de Estudios Parasitológicos y de VectoresFacultad de Ciencias Veterinaria

Modelling the potential geographic distribution of triatomines infected by <i>Triatoma virus</i> in the southern cone of South America

Background: Triatoma virus (TrV) is the only entomopathogenous virus identified in triatomines. We estimated the potential geographic distribution of triatomine species naturally infected by TrV, using remotely sensed and meteorological environmental variables, to predict new potential areas where triatomines infected with TrV may be found. Methods: Detection of TrV infection in samples was performed with RT-PCR. Ecological niche models (ENM) were constructed using the MaxEnt software. We used 42 environmental variables derived from remotely sensed imagery (AVHRR) and 19 bioclimatic variables (Bioclim). The MaxEnt Jackknife procedure was used to minimize the number of environmental variables that showed an influence on final models. The goodness of fit of the model predictions was evaluated by the mean area under the curve (AUC). Results: We obtained 37 samples of 7 species of triatomines naturally infected with TrV. Of the TrV positive samples, 32% were from sylvatic habitat, 46% came from peridomicile habitats and 22% from domicile habitats. Five of the seven infected species were found only in the sylvatic habitat, one species only in the domicile and only Triatoma infestans was found in the three habitats. The MaxEnt model estimated with the Bioclim dataset identified five environmental variables as best predictors: temperature annual range, mean diurnal range, mean temperature of coldest quarter, temperature seasonality and annual mean temperature. The model using the AVHRR dataset identified six environmental variables: minimum Land Surface Temperature (LST), minimum Middle Infrared Radiation (MIR), LST annual amplitude, MIR annual amplitude annual, LST variance and MIR variance. The potential geographic distribution of triatomine species infected by TrV coincides with the Chaco and the Monte ecoregions either modelled by AVHRR or Bioclim environmental datasets. Conclusions: Our results show that the conditions of the Dry Chaco ecoregion in Argentina are favourable for the infection of triatomine species with TrV, and open the possibility of its use as a potential agent for the biological control of peridomestic and/or sylvatic triatomine species. Results identify areas of potential occurrence that should be verified in the field.Facultad de Ciencias VeterinariasCentro de Estudios Parasitológicos y de Vectore

Modelling the potential geographic distribution of triatomines infected by <i>Triatoma virus</i> in the southern cone of South America

Background: Triatoma virus (TrV) is the only entomopathogenous virus identified in triatomines. We estimated the potential geographic distribution of triatomine species naturally infected by TrV, using remotely sensed and meteorological environmental variables, to predict new potential areas where triatomines infected with TrV may be found. Methods: Detection of TrV infection in samples was performed with RT-PCR. Ecological niche models (ENM) were constructed using the MaxEnt software. We used 42 environmental variables derived from remotely sensed imagery (AVHRR) and 19 bioclimatic variables (Bioclim). The MaxEnt Jackknife procedure was used to minimize the number of environmental variables that showed an influence on final models. The goodness of fit of the model predictions was evaluated by the mean area under the curve (AUC). Results: We obtained 37 samples of 7 species of triatomines naturally infected with TrV. Of the TrV positive samples, 32% were from sylvatic habitat, 46% came from peridomicile habitats and 22% from domicile habitats. Five of the seven infected species were found only in the sylvatic habitat, one species only in the domicile and only Triatoma infestans was found in the three habitats. The MaxEnt model estimated with the Bioclim dataset identified five environmental variables as best predictors: temperature annual range, mean diurnal range, mean temperature of coldest quarter, temperature seasonality and annual mean temperature. The model using the AVHRR dataset identified six environmental variables: minimum Land Surface Temperature (LST), minimum Middle Infrared Radiation (MIR), LST annual amplitude, MIR annual amplitude annual, LST variance and MIR variance. The potential geographic distribution of triatomine species infected by TrV coincides with the Chaco and the Monte ecoregions either modelled by AVHRR or Bioclim environmental datasets. Conclusions: Our results show that the conditions of the Dry Chaco ecoregion in Argentina are favourable for the infection of triatomine species with TrV, and open the possibility of its use as a potential agent for the biological control of peridomestic and/or sylvatic triatomine species. Results identify areas of potential occurrence that should be verified in the field.Facultad de Ciencias VeterinariasCentro de Estudios Parasitológicos y de Vectore

Dicistrovirus de la comunidad de polinizadores encontrados en palomas: ¿un nuevo reservorio viral?

Dicistroviruses are a family of viruses that affect invertebrates of sanitary and economic importance. Pigeons are also natural reservoirs of pathogens that have caused emerging and re-emerging diseases in humans. Twenty-five pigeons (24 Columba livia and one Zenaida auriculata) were captured in La Plata, Buenos Aires, between May and June 2019. Oropharyngeal/choana and then cloacal swabs were taken from each bird. RNA extraction was performed with Trizol®. For the analysis, 5 μl of total RNA was used for complementary DNA (cDNA) synthesis. The reaction was carried out using multiplex PCR (mPCR) as screening methodology in a final volume of 25 μl. This multiplex PCR amplifies six viruses. As a positive control, a sample previously isolated and characterized in the authors' laboratory as Israeli acute paralysis virus (IAPV) was used, and whose presence was confirmed by screening using specific primers, for a simple PCR, that amplify 185 bp. Fifteen of the samples (60%) were positive for IAPV in both the multiplex PCR and the specific PCR. Additional studies are required to explore the pathogenicity of dicistroviruses in pigeons and to determine if these viruses are the same ones that affect the pollinator community.Los Dicistrovirus son una familia de virus que afectan invertebrados de importancia sanitaria y económica. Las palomas son, asimismo, reservorios naturales de patógenos que han causado enfermedades emergentes y reemergentes en el humano. Se capturaron 25 palomas (24 Columba livia y una Zenaida auriculata) en La Plata, Buenos Aires, entre mayo y junio de 2019. Se tomaron hisopados de orofaringe/coana y luego cloacal de cada ave. Se realizó la extracción de ARN con Trizol®. Se utilizaron 5 μl del ARN total para la síntesis de ADN complementario (ADNc). La reacción se llevó a cabo utilizando una PCR múltiple (mPCR) como metodología de screening en un volumen final de 25 μl. Esta PCR múltiple amplifica seis virus. Como control positivo se utilizó una muestra previamente aislada y caracterizada en el laboratorio de los autores como virus de la parálisis aguda israelí (IAPV), y cuya presencia fue confirmada mediante screening utilizando cebadores específicos, para una PCR simple, que amplifican 185 pb. Quince de las muestras (60%) fueron positivas a IAPV tanto en la PCR múltiple como en la PCR específica. Se requiere de estudios adicionales para explorar la patogenicidad de los dicistrovirus en las palomas y determinar si estos virus son los mismos que afectan a la comunidad de polinizadores

Phylogenetics Based on Partial ORF2 of Triatoma Virus in Triatomines Collected over a Decade from Domiciliary Habitats

The only virus sequenced and studied in triatomines is the Triatoma virus, from the Dicistroviridae family, which causes delayed development, reduced oviposition, and premature death of infected insects. With the goal of expanding the sequences already obtained in previous years and verifying if any changes occurred in their genomic sequences, 68 samples of triatomines from several provinces of Argentina were analyzed. Sixteen positive samples were obtained by Reverse Transcription (RT)-polymerase chain reaction using the VP3-VP1 subregion of open reading frame-2 as a diagnostic method; after sequencing, 11 samples were obtained from Triatoma infestans. These new sequences showed no significant differences in the analyzed regions, which were not grouped by species or habitat or geographical distribution. There were no differences when compared with the sequences found during 2002-2012, all obtained from the wild.We conclude that despite being an RNA virus, the different sequences show high homology.Centro de Estudios Parasitológicos y de VectoresFacultad de Ciencias Veterinaria

First Study of Different Insect Cells to Triatoma Virus Infection

The use of viruses for biological control is a new option to be considered. The family Dicistroviridae, which affects only invertebrates, is one of the families that have been proposed for this purpose. The Triatoma virus (TrV), a member of this family, affects triatomine transmitters of Chagas disease, which is endemic in Latin America but also expanding its worldwide distribution. To this end, we attempted virus replication in Diptera, Aedes albopictus (clone C6/36) and Lepidoptera Spodoptera frugiperda (SF9, SF21) and High Five (H5) cell lines. The methodologies used were transfection process, direct inoculation (purified virus), and inoculation of purified virus with trypsin. Results were confirmed by SDS-PAGE, Western blotting, RT-PCR, electron microscopy, and immunofluorescence. According to the results obtained, further analysis of susceptibility/infection of H5 cells to TrV required to be studied.Centro de Estudios Parasitológicos y de VectoresFacultad de Ciencias Veterinaria

Modelling the potential geographic distribution of triatomines infected by <i>Triatoma virus</i> in the southern cone of South America

Background: Triatoma virus (TrV) is the only entomopathogenous virus identified in triatomines. We estimated the potential geographic distribution of triatomine species naturally infected by TrV, using remotely sensed and meteorological environmental variables, to predict new potential areas where triatomines infected with TrV may be found. Methods: Detection of TrV infection in samples was performed with RT-PCR. Ecological niche models (ENM) were constructed using the MaxEnt software. We used 42 environmental variables derived from remotely sensed imagery (AVHRR) and 19 bioclimatic variables (Bioclim). The MaxEnt Jackknife procedure was used to minimize the number of environmental variables that showed an influence on final models. The goodness of fit of the model predictions was evaluated by the mean area under the curve (AUC). Results: We obtained 37 samples of 7 species of triatomines naturally infected with TrV. Of the TrV positive samples, 32% were from sylvatic habitat, 46% came from peridomicile habitats and 22% from domicile habitats. Five of the seven infected species were found only in the sylvatic habitat, one species only in the domicile and only Triatoma infestans was found in the three habitats. The MaxEnt model estimated with the Bioclim dataset identified five environmental variables as best predictors: temperature annual range, mean diurnal range, mean temperature of coldest quarter, temperature seasonality and annual mean temperature. The model using the AVHRR dataset identified six environmental variables: minimum Land Surface Temperature (LST), minimum Middle Infrared Radiation (MIR), LST annual amplitude, MIR annual amplitude annual, LST variance and MIR variance. The potential geographic distribution of triatomine species infected by TrV coincides with the Chaco and the Monte ecoregions either modelled by AVHRR or Bioclim environmental datasets. Conclusions: Our results show that the conditions of the Dry Chaco ecoregion in Argentina are favourable for the infection of triatomine species with TrV, and open the possibility of its use as a potential agent for the biological control of peridomestic and/or sylvatic triatomine species. Results identify areas of potential occurrence that should be verified in the field.Facultad de Ciencias VeterinariasCentro de Estudios Parasitológicos y de Vectore

Los jóvenes y el Chagas: nuevas miradas posibles : Experiencias educativas en el Museo de La Plata

Se presenta el análisis de las representaciones de estudiantes de nivel secundario de la región de La Plata, que asistieron a los talleres dictados en el contexto de la “Semana del Chagas 2011” y del “Mes del Chagas 2012” en el Museo de La Plata. La propuesta implementada, destinada a difundir y visibilizar al tema como problemática compleja, incluyó un abordaje integral e interdisciplinario a partir de múltiples miradas, involucrando diferentes recursos y actores, planteando la problemática desde cuatro grandes dimensiones (biomédica, epidemiológica, sociocultural y político-económica). Las representaciones, identificadas a partir de expresiones plásticas y textos producidos frente a la pregunta “¿Qué es lo primero que se te viene a la cabeza cuando escuchás la palabra Chagas?”, reflejan fuertemente el discurso biomédico hegemónico, pero dan también lugar a la posibilidad de ver al tema de una manera más compleja que incorpora elementos de los aspectos sociales y políticos, necesarios para abordar la problemática.Trabajo publicado en Medeiros Costa Neto, Eraldo (comp.). Entomologia cultural: ecos do I Simposio Brasileiro de Entomologia Cultural. UEFS Editora, 2014.Centro de Estudios Parasitológicos y de VectoresGrupo de Didáctica de las Ciencia

Educación y Chagas: sistematización de experiencias innovadoras en la Región de La Plata (Buenos Aires, Argentina)

Considerando las características multidimensionales de la problemática del Chagas, se requieren aproximaciones de investigación, prevención, control y tratamiento que brinden respuestas integrales, interdisciplinarias e intersectoriales acordes a las particularidades de los escenarios actuales (Briceño-León y Galván, 2007). En este sentido, desarrollar un abordaje integral del Chagas requiere considerar simultáneamente cuatro grandes dimensiones -biomédica, epidemiológica, sociocultural y política- cuyos elementos se conjugan dinámicamente para constituir el entramado que expresa toda la complejidad de la problemática. Este planteo nos conduce a la necesidad de instalar el tema en diferentes contextos y profundizar sobre las diferentes maneras de hacerlo. Por este motivo, creemos que no hay un solo lenguaje para hablar de Chagas, tampoco un solo puñado de personas autorizadas para hacerlo, ni determinados lugares más adecuados que otros para abordar el tema, ni un solo perfil de destinatarios/as. Desde este marco venimos desarrollando una serie de propuestas educativas a partir de una perspectiva que hemos dado en llamar caleidoscópica (por las múltiples miradas involucradas) (Sanmartino et al., 2012). Trabajamos en diferentes escenarios y con diversos actores sociales, como parte de las actividades de investigación, docencia y extensión llevadas a cabo por los/as integrantes de un grupo multidisciplinario al que denominamos ¿De qué hablamos cuando hablamos de Chagas? (CONICET, UNLP, CIIE). En la propuesta que aquí presentamos buscamos analizar y sistematizar las estrategias y recursos desarrollados en estas experiencias ya que consideramos que constituyen ejemplos que aportarán al diseño y desarrollo de manerascontextualizadas de abordar el Chagas. En este sentido, cabe aclarar que, al igual que Torres y Cendales (2006), asumimos la sistematización como una práctica investigativa con identidad propia y no un momento o fase de toda investigación (?). Tampoco es una evaluación, pues su intención no es valorar el cumplimiento de lo planeado ni su impacto, sino recuperar los saberes y significados de la experiencia para potenciarla. Compartiremos algunos resultados de un camino que apunta a la optimización de las políticas y prácticas educativas y de comunicación de manerainnovadora, así como a recuperar diversos saberes y abrir nuevos interrogantes que permitan la construcción de un paradigma integrador necesario para abordar esta problemática compleja.Instituto de Física de Líquidos y Sistemas BiológicosCentro de Estudios Parasitológicos y de Vectore

Triatoma virus: estudio de la diversidad en triatominos de Argentina

La Tripanosomiasis americana es el problema sanitario más relevante de la Argentina, afectando cerca de 1,6 millones de personas. La Organización Mundial de la Salud considera a la enfermedad de Chagas como uno de los mayores flagelos de América Latina: unas 18 millones de personas sufren sus consecuencias y 120 millones están en riesgo de infección. Si bien esta enfermedad se distribuye principalmente en América Latina, en las últimas décadas se ha observado con mayor frecuencia en los Estados Unidos, Canadá, muchos países europeos y algunos del Pacífico Occidental. Hasta hoy, el control de esta enfermedad, se basa exclusivamente en insecticidas que acarrean múltiples problemas en cuanto a su incorrecta aplicación y baja selectividad, debido a que eliminan tanto enemigos naturales de los triatominos como otras especies benéficas para el hombre, produciendo un gran deterioro en el medio ambiente, provocando todo esto que los insectos sean cada vez más resistentes a los insecticidas aplicados. La introducción o el incremento de enemigos naturales en poblaciones naturales de las principales especies transmisoras de Chagas, puede lograr con el tiempo la reducción del número de vectores a niveles que aseguren la interrupción de la transmisión del parásito en la población susceptible. Cabe destacar que los aspectos negativos en las campañas de rociado y la perspectiva que esas dificultades se agraven, ha motivado a que la búsqueda de nuevos métodos de control de triatominos de domicilio y peridomicilio haya sido identificada como un área prioritaria de investigación por la Organización Mundial de la Salud. El Triatoma virus (TrV) es el único virus entomopatógeno identificado en triatominos hasta el momento. Existen observaciones que sustentarían el uso de TrV como control biológico. Muscio en 1997, registró porcentajes superiores a 90% de mortalidad en el laboratorio en estados ninfales de T. infestans infectados con TrV. Además, Rozas-Dennis y Cazzaniga en el 2000, observaron que la infección con TrV reduce la longevidad y la fecundidad de las hembras adultas, y que las ninfas infectadas muestran parálisis en las patas y dificultad para desprenderse de la exuvia. De acuerdo al Comité Internacional de Taxonomía Viral (ICTV), TrV pertenece a la familia Dicistroviridae cuya especie tipo es el virus de la parálisis del grillo, con un único género: Cripavirus. Es un virus ARN de hebra simple y sentido positivo, con una longitud de 9.010 bases y una masa molecular teórica de 2.886,4 KDa. La composición de los viriones de TrV es 35% de ARN y 65% de proteínas. El genoma posee dos marcos abiertos de lectura denominados ORF1 y ORF2 que codifican las proteínas no estructurales y de la cápside respectivamente; separados por una región intergénica (IGR). De acuerdo a los estudios realizados hasta el momento, TrV puede transmitirse principalmente por vía horizontal, mediante la ruta fecal-oral, como así también por una vía vertical (transovárica). Su distribución en la naturaleza se restringe solamente a T. infestans y T. sordida. Hasta el momento no se conocen estudios inherentes a la búsqueda de TrV en Latinoamérica: al presente solo se ha encontrado en Argentina. El objetivo central de este trabajo fue, por un lado estudiar la diversidad de TrV en triatominos de nuestro país; y obtener un sistema para la replicación de TrV in vitro. Así, se analizaron triatominos de 10 provincias argentinas desde el 2008 hasta el 2011, resultando un total de 1632 ejemplares pertenecientes a 10 especies de domicilio, peridomicilio y ambiente silvestre: T. infestans, T. guasayana, T. delpontei, T. breyeri, T. eraturysiforme, T. sordida, T. platensis, T. garciabesi, Panstrongylus guentheri y Psammolestes coreodes. Las especies anteriormente mencionadas fueron capturadas en viajes de campaña, obtenidas del material conservado en la colección de nuestro laboratorio o enviadas de otros centros de referencia. A todos los insectos se les extrajo la materia fecal para luego extraerle ARN y finalmente analizarlas mediante RT-PCR. Los resultados positivos resultantes de la RT-PCR fueron 29. Estos productos resultantes se purificaron, cuantificaron y se enviaron a secuenciar. El análisis de las muestras secuenciadas no mostraron variabilidad genómica significativa. Esto se vio reflejado tanto a nivel específico, como de hábitat y distribución geográfica de los triatominos. Contar con líneas o cultivos celulares sensibles a la infección con TrV podría traer grandes ventajas. Permitir aislar, caracterizar y estudiar en profundidad la biología del virus nos permitiría obtener masa viral, siendo una herramienta fundamental para su posible uso como agente de control biológico. Si bien, no se conocen líneas celulares susceptibles a TrV, se intentó su replicación en líneas de dípteros y lepidópteros. Se desconoce además, si el virus producirá efecto citopático visible en las células. Con respecto a este otro gran objetivo general, se intentó la replicación de TrV en cultivos celulares. Por un lado, en líneas celulares de insecto, por medio de distintos métodos: transfección, electroporación, inoculación con tripsina y con virus purificado. Por otro lado se intentó obtener cultivo primario de vinchucas sanas. Para esto se utilizaron triatominos de la colonia de nuestro laboratorio. Los sustratos para la realización del cultivo primario fueron embriones y adultos (con y sin tripsina y explantos); además se inocularon huevos embrionados. Para todos los métodos y ensayos descriptos anteriormente, se utilizaron técnicas de SDS-PAGE, Western Blot (WB), Inmunofluorescencia indirecta (IFI) o bien RT-PCR para confirmar la presencia del TrV en las células. Para evaluar el líquido alantoideo se utilizó la técnica de Hemaglutinación (HA). No fue posible la replicación in vitro de TrV en líneas celulares de dípteros (C6/36) y lepidópteros (SF9, SF21, HighFive). Tampoco fue posible obtener un clon celular partiendo de tejidos adultos o embrionarios de vinchucas sanas. En cuanto a la presencia de virus en líquido alantoideo por HA, en ningún caso se obtuvo resultado positivo, ni tampoco utilizando sobrenadantes supuestamente infectados. Sin embargo el virus TrV purificado utilizado como control, aglutinó los glóbulos rojos de pollo. En las pruebas complementarias de Microscopia electrónica, SDS-PAGE, WB, IFI, RT-PCR tampoco obtuvimos resultados satisfactorios. Este trabajo de tesis, representa uno de los estudios más amplios realizado hasta el presente en TrV de triatominos en Argentina. El registro de este virus es de alta importancia, debido a que de las tres vías posibles de contagio de la enfermedad de Chagas, la vectorial es la predominante en el área endémica, siendo imprescindible profundizar aún más en el conocimiento de los insectos huéspedes para optimizar su control. Los resultados de esta labor, amplían considerablemente la información existente sobre este virus en Argentina, siendo de suma importancia además para el resto de los países afectados por la enfermedad. Si bien no fue posible la replicación del virus in vitro, nada se conocía al respecto sobre TrV. Es por ello que se intentará su replicación en líneas celulares de hemípteros, donde se han citado resultados exitosos en virus muy cercanos filogenéticamente. Se esbozan datos novedosos sobre la distribución geográfica y de ambiente; hospedero y variabilidad genómica de las especies analizadas. Si bien no ha sido uno de los objetivos de este trabajo de tesis, el desarrollo de la misma, permitió ampliar el estudio del virus para poder llegar a utilizarlo en un futuro inmediato, como ya se ha mencionado, como agente de control biológico.Facultad de Ciencias Naturales y Muse