Participation of anandamide in the sperm release from the oviductal epithelia in bovines

El oviducto de los mamíferos actúa como un reservorio funcional de espermatozoides proveyendo un ambiente que permite su mantenimiento y competencia para la fecundación del oocito. La unión de los espermatozoides con las células epiteliales del oviducto (CEO) prolonga la vida del espermatozoide, retrasando la capacitación, hasta que señales asociadas a la ovulación inducen su liberación. Varias moléculas del fluido oviductal participan en la regulación de la interacción espermatozoide-oviducto. La anandamida es un endocannabinoide que actúa a través de los receptores cannabinoides y ha sido detectada en el fluido oviductal. Previamente demostramos que la anandamida induce la liberación de los espermatozoides de las CEO en bovinos. En este trabajo estudiamos la regulación y el mecanismo de acción de la anandamida en este proceso. Se caracterizó la principal vía metabólica de la anandamida durante el ciclo estral en el oviducto bovino, encontrándose que tanto las CEO como los espermatozoides expresan a las enzimas del metabolismo de la anandamida. Además la mayor concentración de anandamida en el fluido oviductal bovino fue detectada en el momento peri-ovulatorio, siendo el estradiol la hormona involucrada en la vía de activación de este endocannabinoide. Asimismo la anandamida indujo la capacitación espermática y la liberación de los espermatozoides de las CEO a través de los receptores CB1 y TRPV1 con un incremento de Ca2+ espermático. En conjunto, proponemos que en el momento peri-ovulatorio, las hormonas ováricas podrían inducir un incremento de anandamida oviductal favoreciendo la capacitación espermática con la consecuente liberación de los espermatozoides del reservorio oviductal.Mammals’ oviduct acts as a functional reservoir of spermatozoa, providing an environment that is proper for their maintenance and competence for the fecundation of the oocyte. The interaction of spermatozoa with oviductal epithelial cells (OEC) prolongs spermatozoa’s life, delaying capacitation, until ovulation-related signals induce their release. Several molecules from the oviductal fluid participate in the regulation of the spermoviduct interaction. Anandamide is an endocannabinoid that acts through cannabinoid receptors and it has been detected in oviductal fluid. In previous work, we have demonstrated that anandamide induces spermatozoa release from OEC in bovines. In this work we studied the regulation and the mechanism of action of anandamide in this process. The main metabolic pathway of anandamide during estrous cycle in bovine oviduct was characterized. Both OEC and spermatozoa express enzymes from anandamide metabolism. Also, the highest anandamide concentration in oviductal fluid was found in peri-ovulatory stages, being estradiol the hormone involved in the activation pathway of this endocannabinoid. Also, anandamide induced sperm capacitation and sperm release from the OECs through CB1 and TRPV1 receptors with an increase of intracellular calcium in spermatozoa. From these results we propose that in peri-ovulatory stages, ovarian hormones could induce an increase in oviductal anandamide, promoting sperm capacitation of bound spermatozoa with subsequent release of spermatozoa from the OECs.Fil:Gervasi, María Gracia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

The tyrosine kinase FER is responsible for the capacitation-associated increase in tyrosine phosphorylation in murine sperm

Sperm capacitation is required for fertilization. At the molecular level, this process is associated with fast activation of protein kinase A. Downstream of this event, capacitating conditions lead to an increase in tyrosine phosphorylation. The identity of the tyrosine kinase(s) mediating this process has not been conclusively demonstrated. Recent experiments using stallion and human sperm have suggested a role for PYK2 based on the use of small molecule inhibitors directed against this kinase. However, crucially, loss-of-function experiments have not been reported. Here, we used both pharmacological inhibitors and genetically modified mice models to investigate the identity of the tyrosine kinase(s) mediating the increase in tyrosine phosphorylation in mouse sperm. Similar to stallion and human, PF431396 blocks the capacitation-associated increase in tyrosine phosphorylation. Yet, sperm from Pyk2(-/-) mice displayed a normal increase in tyrosine phosphorylation, implying that PYK2 is not responsible for this phosphorylation process. Here, we show that PF431396 can also inhibit FER, a tyrosine kinase known to be present in sperm. Sperm from mice targeted with a kinase-inactivating mutation in Fer failed to undergo capacitation-associated increases in tyrosine phosphorylation. Although these mice are fertile, their sperm displayed a reduced ability to fertilize metaphase II-arrested eggs in vitro.Fil: Alvau, Antonio. University of Massachussets; Estados UnidosFil: Battistone, Maria Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Gervasi, Maria Gracia. University of Massachussets; Estados UnidosFil: Navarrete, Felipe A.. University of Massachussets; Estados UnidosFil: Xu, Xinran. State University of Colorado - Fort Collins; Estados UnidosFil: Sánchez Cárdenas, Claudia. Universidad Nacional Autónoma de México. Instituto de Biotecnología; MéxicoFil: De la Vega Beltran, José Luis. Universidad Nacional Autónoma de México. Instituto de Biotecnología; MéxicoFil: Da Ros, Vanina Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Greer, Peter. Queens University; CanadáFil: Darszon, Alberto. Universidad Nacional Autónoma de México. Instituto de Biotecnología; MéxicoFil: Krapf, Diego. State University of Colorado - Fort Collins; Estados UnidosFil: Salicioni, Ana María. University of Massachussets; Estados UnidosFil: Cuasnicu, Patricia Sara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Visconti, Pablo E.. University of Massachussets; Estados Unido

MRP4-mediated cAMP efflux is essential for mouse spermatozoa capacitation

Mammalian spermatozoa must undergo biochemical and structural changes to acquire the capacity for fertilization, in a process known as capacitation. Activation of PKA enzymes is essential for capacitation, and thus cAMP levels are tightly regulated during this process. Previously, we demonstrated that during capacitation, bovine spermatozoa extrude cAMP through multidrug resistance-associated protein 4 (MRP4, also known as ABCC4), which regulates intracellular levels of the nucleotide and provides cAMP to the extracellular space. Here, we report the presence of functional MRP4 in murine spermatozoa, since its pharmacological inhibition with MK571 decreased levels of extracellular cAMP. This also produced a sudden increase in PKA activity, with decreased tyrosine phosphorylation at the end of capacitation. Blockade of MRP4 inhibited induction of acrosome reaction, hyperactivation and in vitro fertilization. Moreover, MRP4 inhibition generated an increase in Ca2+ levels mediated by PKA, and depletion of Ca2+ salts from the medium prevented the loss of motility and phosphotyrosine inhibition produced by MK571. These results were supported using spermatozoa from CatSper Ca2+ channel knockout mice. Taken together, these results suggest that cAMP efflux via MRP4 plays an essential role in mouse sperm capacitation.This article has an associated First Person interview with the first author of the paper.Fil: Alonso, Carlos Agustín Isidro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Lottero Leconte, Raquel María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Luque, Guillermina Maria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Vernaz, Z. J. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Di Siervi, Nicolás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Gervasi, Maria Gracia. University of Massachussets; Estados UnidosFil: Buffone, Mariano Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Davio, Carlos Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Farmacológicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Investigaciones Farmacológicas; ArgentinaFil: Perez Martinez, Silvina Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; Argentin

QUBIC II: Spectro-Polarimetry with Bolometric Interferometry

Bolometric interferometry is a novel technique that has the ability to perform spectral imaging. A bolometric interferometer observes the sky in a wide frequency band and can reconstruct sky maps in several sub-bands within the physical band in post-processing of the data. This provides a powerful spectral method to discriminate between the cosmic microwave background (CMB) and astrophysical foregrounds. In this paper, the methodology is illustrated with examples based on the Q & U Bolometric Interferometer for Cosmology (QUBIC) which is a ground-based instrument designed to measure the B-mode polarization of the sky at millimeter wavelengths. We consider the specific cases of point source reconstruction and Galactic dust mapping and we characterize the point spread function as a function of frequency. We study the noise properties of spectral imaging, especially the correlations between sub-bands, using end-to-end simulations together with a fast noise simulator. We conclude showing that spectral imaging performance are nearly optimal up to five sub-bands in the case of QUBIC.Fil: Gamboa Lerena, Martín Miguel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Astronómicas y Geofísicas; ArgentinaFil: Landau, Susana Judith. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Física de Buenos Aires. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Física de Buenos Aires; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Física; ArgentinaFil: Mennella, A.. Università degli Studi di Milano; Italia. Istituto Nazionale di Fisica Nucleare; ItaliaFil: Scoccola, Claudia Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Astronómicas y Geofísicas; ArgentinaFil: Almela, Daniel Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Arnaldi, Luis Horacio. Comisión Nacional de Energía Atómica. Gerencia del Área de Energía Nuclear. Instituto Balseiro; ArgentinaFil: Cobos Cerutti, Agustin Cleto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Duca, Clara. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Etchegoyen, Alberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Ferreyro, Luciano Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Fracchia, Diego. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: García Méndez, Betania Sorybet. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: García Redondo, Manuel Elías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Gervasi, Maria Gracia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Università degli Studi di Milano; Italia. Istituto Nazionale di Fisica Nucleare; ItaliaFil: Gomez Berisso, Mariano. Comisión Nacional de Energía Atómica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Hampel, Matias Rolf. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Harari, Diego Dario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica; ArgentinaFil: Melo, Diego Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Pajot, Hipolito Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Centre National de la Recherche Scientifique; FranciaFil: Pastoriza, Hernan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Comisión Nacional de Energía Atómica. Fundación José A. Balseiro; ArgentinaFil: Platino, Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Rasztocky, Emiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Argentino de Radioastronomía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Argentino de Radioastronomía; ArgentinaFil: Romero, G. E.. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Argentino de Radioastronomía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Argentino de Radioastronomía; ArgentinaFil: Salum, Juan Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Supanitsky, Alberto Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Comisión Nacional de Energía Atómica. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas. Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Tecnología en Detección y Astropartículas; ArgentinaFil: Wright, María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. University of Manchester; Reino Unid

Anandamide Induces Sperm Release from Oviductal Epithelia through Nitric Oxide Pathway in Bovines

Mammalian spermatozoa are not able to fertilize an egg immediately upon ejaculation. They acquire this ability during their transit through the female genital tract in a process known as capacitation. The mammalian oviduct acts as a functional sperm reservoir providing a suitable environment that allows the maintenance of sperm fertilization competence until ovulation occurs. After ovulation, spermatozoa are gradually released from the oviductal reservoir in the caudal isthmus and ascend to the site of fertilization. Capacitating-related changes in sperm plasma membrane seem to be responsible for sperm release from oviductal epithelium. Anandamide is a lipid mediator that participates in the regulation of several female and male reproductive functions. Previously we have demonstrated that anandamide was capable to release spermatozoa from oviductal epithelia by induction of sperm capacitation in bovines. In the present work we studied whether anandamide might exert its effect by activating the nitric oxide (NO) pathway since this molecule has been described as a capacitating agent in spermatozoa from different species. First, we demonstrated that 1 µM NOC-18, a NO donor, and 10 mM L-Arginine, NO synthase substrate, induced the release of spermatozoa from the oviductal epithelia. Then, we observed that the anandamide effect on sperm oviduct interaction was reversed by the addition of 1 µM L-NAME, a NO synthase inhibitor, or 30 µg/ml Hemoglobin, a NO scavenger. We also demonstrated that the induction of bull sperm capacitation by nanomolar concentrations of R(+)-methanandamide or anandamide was inhibited by adding L-NAME or Hemoglobin. To study whether anandamide is able to produce NO, we measured this compound in both sperm and oviductal cells. We observed that anandamide increased the levels of NO in spermatozoa, but not in oviductal cells. These findings suggest that anandamide regulates the sperm release from oviductal epithelia probably by activating the NO pathway during sperm capacitation

Anandamide Capacitates Bull Spermatozoa through CB1 and TRPV1 Activation

Anandamide (AEA), a major endocannabinoid, binds to cannabinoid and vanilloid receptors (CB1, CB2 and TRPV1) and affects many reproductive functions. Nanomolar levels of anandamide are found in reproductive fluids including mid-cycle oviductal fluid. Previously, we found that R(+)-methanandamide, an anandamide analogue, induces sperm releasing from bovine oviductal epithelium and the CB1 antagonist, SR141716A, reversed this effect. Since sperm detachment may be due to surface remodeling brought about by capacitation, the aim of this paper was to investigate whether anandamide at physiological concentrations could act as a capacitating agent in bull spermatozoa. We demonstrated that at nanomolar concentrations R(+)-methanandamide or anandamide induced bull sperm capacitation, whereas SR141716A and capsazepine (a TRPV1 antagonist) inhibited this induction. Previous studies indicate that mammalian spermatozoa possess the enzymatic machinery to produce and degrade their own AEA via the actions of the AEA-synthesizing phospholipase D and the fatty acid amide hydrolase (FAAH) respectively. Our results indicated that, URB597, a potent inhibitor of the FAAH, produced effects on bovine sperm capacitation similar to those elicited by exogenous AEA suggesting that this process is normally regulated by an endogenous tone. We also investigated whether anandamide is involved in bovine heparin-capacitated spermatozoa, since heparin is a known capacitating agent of bovine sperm. When the spermatozoa were incubated in the presence of R(+)-methanandamide and heparin, the percentage of capacitated spermatozoa was similar to that in the presence of R(+)-methanandamide alone. The pre-incubation with CB1 or TRPV1 antagonists inhibited heparin-induced sperm capacitation; moreover the activity of FAAH was 30% lower in heparin-capacitated spermatozoa as compared to control conditions. This suggests that heparin may increase endogenous anandamide levels. Our findings indicate that anandamide induces sperm capacitation through the activation of CB1 and TRPV1 receptors and could be involved in the same molecular pathway as heparin in bovines

Sperm interaction with thefemale reproductive tract: More than a simple cellular attachment

Los espermatozoides de mamíferos no son capaces de fecundar a un oocito inmediatamente después de la eyaculación. Para que esto ocurra necesitan atravesar el tracto reproductor de la hembra donde sufren una serie de cambios metabólicos y estructurales que le confieren capacidad fecundante.El tracto reproductor de la hembra interactúa con los espermatozoides a través de diferentes vías para facilitar su tránsito hacia el oocito impidiendo la migración de patógenos dentro del tracto, manteniendo la sobrevida desde la cópula hasta la ovulación y seleccionando a los espermatozoides más aptos para la fecundación. El oviducto de mamíferos actúa como un reservorio funcional de espermatozoides los cuales se unen a las células epiteliales a través de interacciones moleculares específicas. La unión de los espermatozoides al epitelio oviductal está mediada por residuos de carbohidratos de las células epiteliales y proteínas tipo lectinas presentes en la cabeza de los espermatozoides. La liberación de los espermatozoides en el período peri-ovulatorio es modulada principalmente por el remodelamiento de la membrana plasmática que ocurre durante el proceso de capacitación y/o hiperactivación espermática. Moléculas proteicas, glicosaminoglicanos y lípidos presentes en el fluido oviductal están involucradas en la regulación de la interacción espermatozoide-oviducto y en la fecundación en mamíferos. En resumen, la selección espermática por el tracto reproductor de la hembra es clave para garantizar una fecundación exitosa.Mammalian spermatozoa are not capable of fertilizing the oocyte just upon ejaculation. They need to travel along the female reproductive tract, where they undergo a series of metabolic and structural changes that render them fertilizing competence. The female reproductive tract interacts with sperm in several ways in order to facilitate sperm migration towards the egg while impeding migrations of pathogens into the genital tract, to keep sperm alive during the time between mating and ovulation, and to select the fittest sperm for fertilization. Mammalian oviduct acts as a functional reservoir for sperm, which binds to the oviductal epithelial cells by specific molecular interactions. The adhesion of spermatozoa to the oviductal epithelium is mediated by specific interactions between carbohydrate moieties on the epithelial surface of the oviduct and lectins on the sperm head surface. During the oestrus, sperm detachment is mainly modulated by the remodeling of the sperm plasma membrane that occurs through the capacitation process and/or by sperm hyperactivation. Proteins, glycosaminoglycans and lipid molecules present in the oviductal fluid are involved in the regulation of the sperm-oviduct interaction and mammalian fertilization. In conclusion, sperm selection by the female reproductive tract is fundamental to ensure successful fertilization.Fil: Osycka Salut, Claudia Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Gracia Gervasi, María. University Of Massachusetts; Estados UnidosFil: Castellano, Luciana Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Alonso, Carlos Agustín Isidro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; ArgentinaFil: Perez Martinez, Silvina Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos; Argentin

Interaction between lysophosphatidic acid, prostaglandins and the endocannabinoid system during the window of implantation in the rat uterus.

Bioactive lipid molecules as lysophosphatidic acid (LPA), prostaglandins (PG) and endocannabinoids are important mediators of embryo implantation. Based on previous published data we became interested in studying the interaction between these three groups of lipid derivatives in the rat uterus during the window of implantation. Thus, we adopted a pharmacological approach in vitro using LPA, DGPP (a selective antagonist of LPA3, an LPA receptor), endocannabinoids' receptor selective antagonists (AM251 and AM630) and non selective (indomethacin) and selective (NS-398) inhibitors of cyclooxygenase-1 and 2 enzymes. Cyclooxygenase isoforms participate in prostaglandins' synthesis. The incubation of the uterus from rats pregnant on day 5 of gestation (implantation window) with LPA augmented the activity and the expression of fatty acid amide hydrolase, the main enzyme involved in the degradation of endocannabinoids in the rodent uteri, suggesting that LPA decreased endocannabinoids' levels during embryo implantation. It has been reported that high endocannabinoids are deleterious for implantation. Also, LPA increased PGE2 production and cyclooxygenase-2 expression. The incubation of LPA with indomethacin or NS-398 reversed the increment in PGE2 production, suggesting that cyclooxygenase-2 was the isoform involved in LPA effect. PGs are important mediators of decidualization and vascularization at the implantation sites. All these effects were mediated by LPA3, as the incubation with DGPP completely reversed LPA stimulatory actions. Besides, we also observed that endocannabinoids mediated the stimulatory effect of LPA on cyclooxygenase-2 derived PGE2 production, as the incubation of LPA with AM251 or AM630 completely reversed LPA effect. Also, LPA augmented via LPA3 decidualization and vascularization markers. Overall, the results presented here demonstrate the participation of LPA3 in the process of implantation through the interaction with other groups of lipid molecules, prostaglandins and endocannabinoids, which prepare the uterine milieu for embryo invasion during the window of implantation

Participation of CB1 and TRPV1 in NO production during bull sperm capacitation by AEA.

<p>Sperm samples were incubated for 60 min at 38.5°C in 0.3% BSA sp-TALP containing 0.1 mM L-Arginine and 5 µM of DAF-FM diacetate and untreated (control) or treated with MetAEA (1.4 nM) and/or SR141716A (SR1: CB1 antagonist (0.1 nM)) or Capsazepine (CZP: TRPV1 antagonist (10 nM)). Spermatozoa were fixed and the fluorescent complex was measured by flow cytometry. Fluorescence data are expressed as mean fluorescence (percentage of control at 45 min incubation, control adjusted to 100%). Data are expressed as mean ± SEM (n = 5). a≠b, p<0.05.</p

Determination of NO levels in bull spermatozoa.

<p>Sperm samples were incubated for 60 min at 38.5°C in 0.3% BSA sp-TALP containing 0.1 mM L-Arginine and 5 µM of DAF-FM diacetate and untreated (control) or treated with MetAEA (1.4 nM), MetAEA+L-NAME (1 µM). Spermatozoa were fixed and the fluorescent complex was measured by flow cytometry. A) A representative photograph showing fluorescence in spermatozoa, indicating the content of intracellular NO (Magnification, ×600); B) Fluorescence data are expressed as mean fluorescence (percentage of control at 45 min incubation, control adjusted to 100%). Data are expressed as mean ± SEM (n = 8). a≠b, p<0.05.</p