Getting Across the Plasma Membrane and Beyond: Intracellular Uses of Colloidal Semiconductor Nanocrystals

Semiconductor nanocrystals (NCs) are increasingly being used as photoluminescen markers in biological imaging. Their brightness, large Stokes shift, and high photostability compared to organic fluorophores permit the exploration of biological phenomena at the single-molecule scale with superior temporal resolution and spatial precision. NCs have predominantly been used as extracellular markers for tagging and tracking membrane proteins. Successful internalization and intracellular labelling with NCs have been demonstrated for both fixed immunolabelled and live cells. However, the precise localization and subcellular compartment labelled are less clear. Generally, live cell studies are limited by the requirement of fairly invasive protocols for loading NCs and the relatively large size of NCs compared to the cellular machinery, along with the subsequent sequestration of NCs in endosomal/lysosomal compartments. For long-period observation the potential cytotoxicity of cytoplasmically loaded NCs must be evaluated. This review focuses on the challenges of intracellular uses of NCs

Reactions d'elimination en serie terpenique : constante de Taft de groupes esters phosphoriques : nouvelle reaction de preparation d'ethers et d'esters terbutyliques : inhibiteurs potentiels de la biosynthese des terpenes

SIGLECNRS T Bordereau / INIST-CNRS - Institut de l'Information Scientifique et TechniqueFRFranc

Synthèses et évaluations immunologiques d oligosaccharides biotinylés (application au diagnostic des candidoses et des allergies alimentaires)

Ces travaux portent sur le développement d une nouvelle méthode de biotinylation d oligosaccharides. Cette technique est mise à profit pour la synthèse et l évaluation immunologiques d a et b 1,2 mannosides dans le cadre des candidoses et de fragments de N-glycanes dans celui des allergies alimentaires. En introduction, différentes techniques d immobilisation des hydrates de carbone sont présentées. Dans un premier chapitre, les méthodes de biotinylation d' oligosaccharides émergeant de la littérature sont décrites et référencées. Dans le chapitre 2, une nouvelle méthode de biotinylation faisant intervenir la biotine sulfone est développée ainsi que la synthèse d un modèle pour évaluer et valider cette technique. Dans un troisième chapitre, cette nouvelle méthode de biotinylation est mise à profit pour la synthèse et l immobilisation d a et b 1,2 mannosides biotinylés. La reconnaissance de ces produits par des anticorps monoclonaux spécifiques aux motifs 1,2 mannosides a été démontrée par des tests immunologiques grâce aux techniques de résonance plasmonique de surface et Luminex. Les résultats biologiques effectués sur des séra de patients présentant une candidose montrent que l utilisation de nos produits est un outil diagnostic efficace pour ce type d infection. Dans un dernier chapitre, cette même technique est utilisée pour la synthèse de fragments de N-glycanes dont les évaluations immunologiques sur des séra de patients allergiques peuvent nous renseigner sur le mécanisme des allergies alimentaires et plus particulièrement sur la compréhension les allergies croisées. Deux alternatives à l utilisation de thiols malodorants et toxiques tels que le thiophénol et l éthanethiol sont présentés. La synthèse des mannosides fait intervenir l utilisation du 2-naphtalènethiol et celle des N-glycanes celle du 2-méthyl-5-tert-butylthiophénol. Les nouveaux thioglycosides sont obtenus avec de très bons rendements et leurs utilisations en glycosylation se sont avérées efficaces.PARIS-BIUSJ-Thèses (751052125) / SudocPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Synthèse d'oligosaccharides biotinylés (analogues de chondroïtines sulfates, a(1->2),(1->3)-oligomannosides)

Les chondroïtines sulfates (CS) sont des oligosaccharides polyanioniques linéaires appartenant à la famille des glycosaminoglycanes. Ces molécules sont impliqués dans divers processus biologiques et les études structures-activité requièrent des fragments longs et de structure parfaitement définie. La construction de ce type de molécule étant fastidieuse, le but de ce travail est de proposer une synthèse d oligosaccharides analogues aux CS à partir du lactose. Les analogues synthétisés ont par la suite été couplés à la biotine par click-chemistry et leur affinité pour des récepteurs connus des CS a été évaluée. La maladie de Crohn est une pathologie inflammatoire auto-immune de l appareil digestif causant de graves troubles chez les personnes atteintes. Afin de distinguer cette affection des autres pathologies inflammatoires digestives, il est primordial de mettre au point un test de diagnostic fiable. Des travaux ont montré une corrélation entre la maladie de Crohn et la présence d anticorps dirigés contre S. cerevisiae chez 60% des patients étudiés. Les épitopes reconnus par ces anticorps ont été isolé, il s agit d un tri- et d un tetra-a(1 2),a(1 3)-mannoside. Nous avons synthétisé des structures de type a(1 2),a(1 3)-oligomannosides conjuguées à une biotine sulfone ; ces structures ont été évaluées biologiquement dans le cadre du développement d un nouveau test de diagnosticPARIS-BIUSJ-Biologie recherche (751052107) / SudocSudocFranceF

Conception, synthèse et évaluations de peptides vecteurs glycosylés pour une application en vectorologie

Les peptides vecteurs (CPP) sont de petits peptides capables de franchir la membrane cellulaire accompagnés de molécules de natures chimiques variées (dits cargo). Il est admis que l internalisation met en jeu deux processus, l endocytose et la translocation directe, impliquant des domaines lipidiques ainsi que des sucres de surface. L objectif de ce travail a été d analyser l influence de la glycosylation d un CPP sur l internalisation de conjugués CPP-cargos et sur leurs interactions avec des membranes modèles. Une série de CPP glycosylés, analogues du CPP (R6/W3) [RRWWRRWRR], a été obtenue par une stratégie convergente, optimisée sur support solide. Des azido-galactosides ont été greffés par chimie click sur des résidus propargylglycines introduits en différentes positions du CPP (R6/W3). Les peptides (R6/A3) et (R6/W3) ont également été réalisés en tant que témoin et référence pour l étude des CPP glycosylés. La capacité des glycopeptides vecteurs à transporter un cargo pro-apoptotique jusqu à sa cible intracellulaire a été analysée par un test de cytotoxicité. D autre part, l efficacité d internalisation des CPP conjugués à un cargo inhibiteur de protéines kinases (PKCi) a été quantifiée par spectrométrie de masse MALDI-TOF. Les microscopies en fluorescence et bi-photonique ont permis de compléter ces études. Les résultats obtenus témoignent d une modulation de l internalisation des peptides en fonction de la nature, du nombre et de la position des saccharides dans la séquence peptidique. Par ailleurs, les CPP ont été étudiés par des méthodes biophysiques afin d analyser leurs structures et leurs interactions avec différents modèles membranairesPARIS-BIUSJ-Physique recherche (751052113) / SudocSudocFranceF

Glycoreplica peptides to investigate molecular mechanisms of immune-mediated physiological versus pathological conditions

International audienceInvestigation of the role of saccharides and glycoconjugates in mechanisms of immune-mediated physiological and pathological conditions is a hot topic. In fact, in many autoimmune diseases cross-reactivity between sugar moieties exposed on exogenous pathogens and self-molecules has long been hinted. Several peptides have been reported as mimetics of glycans specifically interacting with sugar-binding antibodies. The seek for these glycoreplica peptides is instrumental in characterizing antigen mimicry pathways and their involvement in triggering autoimmunity. Therefore, peptides mimicking glycan-protein interactions are valuable molecular tools to overcome the difficulties of oligosaccharide preparations. The clinical impact of peptide-based probes for autoimmune diseases diagnosis and follow-up is emerging only recently as just the tip of the iceberg of an overlooked potential. Here we provide a brief overview of the relevance of the structural and functional aspects of peptide probes and their mimicry effect in autoimmunity mechanisms for promising applications in diagnostics and therapeutics

New branched amino acids for high affinity dendrimeric DC-SIGN ligands

International audienceA branched amino acid was synthesized from methyl glucopyranoside; this amino acid presents three amino groups protected by Fmoc and one acid group and can be used in classic peptide synthesis. In parallel, similar azido terminated blocks were synthesized. Successive coupling reaction and deprotection afforded dendrimers with up to 27 azido functional groups. As an example of application, d-mannose and l-fucose residues were linked through CuAAC coupling and resulting glycodendrimers were evaluated in their interaction with DC-SIGN using SPR competition assay