Avaliação da superexpressão da proteína p53 e das mutações no éxon 8 do gene TP53 em carcinomas mamários caninos e glândulas normais

Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a expressão da proteína p53, pela técnica de imuno-histoquímica, em neoplasmas mamários malignos em cadelas, além de investigar mutações no éxon 8 do gene supressor Tp53 por meio do padrão de bandas obtidas por PCR-RFLP. Dezenove mamas de cadelas saudáveis foram usadas como controle (Grupo 1). Amostras de 18 casos de tumores malignos (Grupo 2) e suas glândulas mamárias contralaterais (Grupo 3) foram obtidas na rotina do Hospital Veterinário da UFRPE. Os tumores foram identificados histologicamente e classificados em graus de malignidade. O método da estreptoavidina-biotina peroxidase foi utilizado para a análise da expressão de p53 por imuno-histoquímica, de acordo com a localização e intensidade da coloração. A expressão da proteína p53 não foi observada nas amostras do Grupo 1, mas foi encontrada em todas as amostras de tumores malignos (Grupo 2) seja só no núcleo, ou também no citoplasma. No Grupo 3, a expressão foi observada em quatro amostras normais e em duas que apresentavam tumor. Para a análise molecular, o DNA genômico foi extraído e submetido à PCR-RFLP com as seguintes endonucleases: AluI, BsoBI, DdeI e SmaI. O padrão de bandas foi polimórfico entre os grupos, mas não entre as variantes tumorais. Esse polimorfismo detectou mutações no fragmento estudado - éxon 8 do gene Tp53 - que podem resultar em alterações nos nucleotídeos, localizados nos sítios de restrição das enzimas. Esses achados levam a conclusão de que a imunoexpressão da p53 não tem relação com o subtipo histológico ou grau de malignidade do tumor, mas sim com a presença dos tumores no tecido mamário de cadelas. A PCR-RFLP pode ser usada como importante ferramenta para o estudo da carcinogênese mamária na cadela, possibilitando gerar diagnósticos precoces através do polimorfismo obtido com endonucleases de restrição pré-selecionadas

Alternatives methods for analysis of the goat sperm binding Capacity

Com este estudo objetivou-se realizar a análise da utilização do teste de ligação dos espermatozóides caprinos ao oócito bovino e a membrana perivitelina da gema do ovo de galinha comparando ao teste utilizando oócito caprino, buscando uma nova alternativa que predissesse a qualidade seminal sem perder a exatidão e acurácia deste ultimo. Utilizou-se 16 partidas de sêmen caprino coletadas de 04 bodes reprodutores, das raças Saanen (02) e Parda Alpina (02), por meio de vagina artificial, utilizando como manequim fêmea em estro natural. Foram avaliados os aspectos físicos do sêmen (volume, aspecto, turbilhonamento, vigor e motilidade espermática) e a concentração espermática. Para cada partida congelada se utilizou uma alíquota de 20 μL de sêmen fresco para inseminar uma membrana perivitelina de gema do ovo, onde se denominou este grupo de ligação em membrana perivitelina da gema do ovo com sêmen fresco (MPVGOF). Após o congelamento outros três grupos foram formados. No primeiro grupo, para cada partida de sêmen descongelado foi inseminada uma membrana perivitelina da gema do ovo, sendo este grupo denominado ligação em membrana perivitelina com sêmen descongelado (MPVGOD). No segundo grupo para cada partida foi utilizado um oócito bovino, denominando-se este de ligação em oócito bovino ( LIGBOV), já no terceiro grupo, em cada partida se utilizou um oócito caprino, onde este foi denominado ligação em oócito caprino (LIGCAP). Não houve variação (P>0,05) entre os animais utilizados em qualquer parâmetro seminal estudado. O volume médio de sêmen coletado foi 1,1 ± 0,15. A concentração espermática média observada foi de 1,94 ± 0,21 x 109. Observou-se um turbilhonamento médio de 3,6 ± 0,23. Foi observada uma motilidade espermática de 77,5 ± 1,37 e 32,2 ± 1,37, para o sêmen fresco e descongelado, respectivamente. Os valores médios para o vigor observado foi 3,8 ± 0,09 e 2,7 ± 0,12, para o sêmen fresco e descongelado, respectivamente. Não foram encontradas diferenças (P>0,05) entre os testes de ligação do oócito bovino e gema do ovo em relação ao teste de ligação ao oócito caprino. Não havendo também diferença (P>0,05) encontrada entre as médias do teste de ligação com sêmen fresco ou descongelado. Concluiu-se que, tanto o MPVGOD quanto o LIGBOV podem ser utilizados em substituição ao LIGCAP. O sêmen fresco ou descongelado pode ser utilizado para a avaliação da capacidade de ligação do sêmen por meio do teste de ligação à membrana perivitelina da gema do ovo sem qualquer alteração nos resultados da mesma.This study aimed to carry out the analysis using the simple binding of goat sperm to bovine oocytes and to the perivitelline membrane of the hen's egg yolk compared to binding to the goat oocytes, looking for an alternative to predict the buck semen quality without losing the precision and accuracy of their own oocytes. Sixteen doses of goat semen were collected from 04 breed bucks, 2 Saanen and 2 Alpine via artificial vagina, using an estrus female as dummy. The physical aspects of the semen (volume, sperm whirlwind, force and motility) and sperm concentration were evaluated. Three groups were formed, and 20 μL of semen from the same collection were thawed at a concentration of 5 x 106 spermatozoon/mL and used. In the 1st group goat oocytes (LIGCAP) and in the 2nd group bovine oocytes (LIGBOV) were inseminated and in the 3rd one the perivitelline membrane of the hen's egg yolk (MPVGOD) were used. Two others groups were formed, in the first and in the second one 16 doses of fresh (MPVGOF) and thawed (MPVGOD) semen from the same collection were used, respectively, to inseminate. Semen samples from both groups were used to inseminate perivitelline membrane from chicken egg yolk. The imposed treatment did not affect the animals variables studied (P> 0.05). The average volume of semen collected was 1.1 ± 0.15 mL. The average sperm concentration observed was:1.94 ± 0.21 x 109. The average sperm whirlwind was 3.6 ± 0.23. The sperm motility was 77.5 ± 1.37 and 32.2 ± 1.37 for fresh and thawed sperm, respectively. No differences (P>0.05) among the binding assays using the bovine oocytes or hen´s egg yolk in relation to the goat oocytes were showned. The binding assay using fresh and thawed semen did not differ between themselves. It is concluded that, both the MPVGO and the LIGBOV may be used to replace LIGCAP. The fresh or thawed semen may be used to evaluate the binding capacity of the semen through the MPVGO without compromise the results.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Addition of ciclodextrina-cholesterol compound on cryopreservation of goat semen

Os objetivos do presente estudo foram: Capítulo 1 analisar, por meio da motilidade e do vigor espermáticos, a eficácia da adição de seis diferentes concentrações do complexo ciclodextrina-colesterol (CCC) em afetar a capacidade e a intensidade de movimentação das células espermáticas após o processo de congelamento do sêmen caprino, e avaliar a integridade e a funcionalidade da membrana plasmática do sêmen caprino descongelado. Capítulo 2 avaliar a integridade e a funcionalidade da membrana plasmática de espermatozoide após a adição do complexo ciclodextrina-colesterol (CCC) diluído em extensores à base de Tris-Glicerol ou à base de Tris-Etilenoglicol- gema de ovo ao sêmen caprino, e avaliar a forma de inclusão desse complexo (junto com o diluente ou pré-incubado por 15 minutos). No experimento descrito no Capítulo 1, cinco ejaculados foram coletados e fracionados de cinco reprodutores caprinos, saudáveis e com fertilidade comprovada. Uma fração foi utilizada como tratamento controle negativo (Tcontrole), onde não foi incluído o CCC. Adicionou-se nas demais alíquotas o diluente de congelamento (à base de Tris-glicerol) junto com o CCC nas concentrações de 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; e 3,0 mg, que foram consideradas como os tratamentos: T0,5; T1,0; T1,5; T2,0; T2,5; e T3,0, respectivamente, com uma concentração espermática de [ ] = 200 * 106/mL. Após o congelamento foram feitas as avaliações de motilidade e vigor espermáticos, o teste hiposmótico e o teste supravital. No experimento descrito no Capítulo 2, foram coletados três ejaculados de cada um dos quatro bodes, totalizando 12 ejaculados. Cada ejaculado foi avaliado, e aqueles considerados aptos para o congelamento, segundo os parâmetros mínimos de motilidade e vigor espermáticos exigidos pelo CBRA (1998), foram fracionados em seis alíquotas de 350 * 106 espermatozoides (quantidade suficiente para sete doses de 50 * 106 de espermatozoides/palheta de 0,25 mL). Cada alíquota recebeu 1,0 mg de CCC, nos seguintes tratamentos: TGlicerol controle negativo para o diluente à base de Tris-glicerol sem CCC; TGlicerol + CCC para o diluente à base de Tris-glicerol + CCC; TGlicerol + CCC/pré-incubado CCC diluído em solução isosmótica ao sêmen (soro fisiológico) com 15 minutos de incubação antes da adição do diluente à base de Tris-glicerol; TEtilenoglicol controle negativo para o diluente à base de Tris-Etilenoglicol-gema de ovo; TEtilenoglicol + CCC para o diluente à base de Tris-Etilenoglicol-gema de ovo + CCC, TEtilenoglicol+ incubado CCC/pré- para o CCC diluído em solução isoosmótica ao sêmen (soro fisiológico) com 15 minutos de incubação antes da adição do diluente à base de Tris- Etilenoglicol-gema de ovo. Capítulo 1 O valor de α foi de 5% para todos os parâmetros avaliados. Constatou-se que todos os tratamentos apresentaram diferenças (P0,05) entre tratamentos, sendo: T controle (2,1 ± 0,07), T0,5 (2,24 ± 0,07), T1,0 (2,4 ± 0,08), T1,5 (2,28 ± 0,07), T2,0 (2,13 ± 0,07), T2,5 (2,19 ± 0,07) e T3,0 (2,26 ± 0,09). O percentual de células com membrana funcional pelo teste supravital em T0,5 (41,5 ± 0,85) foi superior (P0,05) nos percentuais médios entre os tratamentos: T2,0; T2,5; T1,0; e T3,0 (38,06 ± 0,91; 38,06 ± 1,0; 36,33 ± 0,81; 35,54 ± 0,81; e 34,77 ± 1,13, respectivamente), em relação ao do Tcontrole. O percentual de membrana funcional do tratamento T1,5 (30,65 ± 0,98) foi inferior (P0,05) na integridade de membrana plasmática por meio do teste hiposmótico para Tcontrole (28,55 ± 1,01), T2,5 (24,47 ± 0,76), T0,5 (24,21 ± 0,82), T1,0 (23,74 ± 0,85), T1,5 (21,92 ± 1,18), T2,0 (21,24 ± 0,87) e T3,0 (19,68 ± 0,88), pelo teste de Kruskal-Wallis. Capítulo 2 O valor de α foi de 5% para todos os parâmetros avaliados. As médias da motilidade espermática diferiram (P0,05), apresentando as seguintes médias TEtilenoglicol + CCC/pré-incubado (2,96 ± 0,31), TEtilenoglicol + CCC (2,91 ± 0,12), TGlicerol + CCC/pré-incubado (2,75 ± 0,2), TEtilenoglicol (2,59 ± 0,35), TGlicerol + CCC (2,29 ± 0,18), TGlicerol (2,22 ± 0,18). Não foram observadas diferenças (P>0,05) nos percentuais médios para integridade de membrana pelo teste hiposmótico dos tratamentos TGlicerol + CCC/pré-incubado (52,0 ± 4), TEtilenoglicol+ CCC/pré-incubado (49,65 ± 5,9), TGlicerol + CCC (45,05 ± 4,83), TGlicerol (44,8 ± 2,31), TEtilenoglicol (44,39 ± 4,66) e TEtilenoglicol + CCC (39,6 ± 4,96). Diferenças não foram observadas (P>0,05) entre as médias dos tratamentos TEtilenoglicol + CCC/pré- incubado (29,0 ± 3,82), TEtilenoglicol + CCC (26,96 ± 4,73), TGlicerol + CCC/pré-incubado (24,5 ± 4,2), TGlicerol + CCC (23,54 ± 4,49), TGlicerol (20,79 ± 3,35), TEtilenoglicol (19,45 ± 4,08), para funcionalidade da membrana plasmática, pelo teste supravital. Foram observadas diferenças (P0,05) na integridade de membrana plasmática por meio das sondas fluorescentes (IP Dietilcarboxifluorosceína) nos tratamentos TGlicerol (63,98 ± 8,4), TGlicerol (63,08 ± 9,05), TGlicerol + CCC/pré-incubado + + CCC (52,24 ± 9,47), T5 (52,09 ± 10,88), TEtilenoglicol+ CCC/pré-incubado (44,37 ± 8,96) e TEtilenoglicol (37,19 ± 10,81). Capítulo 1 Conclui-se que a adição de 0,5 mg do CCC ao sêmen com a concentração espermática de 200 * 106 /mL diminui as perdas de integridade e funcionalidade da membrana plasmática. No entanto, a adição de 1,0 mg de CCC ao sêmen com a concentração espermática de 200 * 106 /mL propicia melhor resultado na motilidade espermática após o descongelamento do sêmen. Capítulo 2 Diante dos resultados observados, conclui-se que a adição de 1,0 mg do complexo ciclodextrina-colesterol no sêmen com a concentração espermática de 200 * 106 /mL não altera a integridade e/ou a funcionalidade da membrana plasmática do espermatozoide caprino. O diluidor à base de Tris-gema de ovo- etileno glicol não altera a funcionalidade da membrana plasmática ou o vigor espermático,embora influencie positivamente a integridade da membrana acrossomal afete negativamente a motilidade espermática do sêmen descongelado, comparado ao diluente à base de Tris-Glicerol. A pré-incubação do sêmen com o complexo ciclodextrina-colesterol não altera as características de vigor espermático, nem a integridade e a funcionalidade da membrana plasmática dos espermatozoides, mas afeta positivamente a motilidade espermática do sêmen descongelado.The objective of this study was to analyze by spermatic motility and vigor the accuracy of six different of Ciclodextrin-Cholesterol Compound (CCC) concentrations on the spermatic motility and vigor effect after goat semen cryopreservation process and to evaluate the plasma membrane function and integrity of thawed goat semen. Chapter 2 The objective of this study was to evaluate the functionality and integrity of plasma membrane of thawed goat semen after addition of Ciclodextrin-Cholesterol Compound (CCC) diluted in tris glycerol or tris ethylene glycol + yolk hen s egg diluent to goat semen. And further, to evaluate the way of inclusion of the CCC (together with diluent or preincubated for 15 minutes). Chapter 1 Five Billy goats were used and five samples were collected from each and then fractionated in seven aliquots. One aliquot did not receive the CCC been considered a negative control (Tcontrol), the others received the CCC in the following concentrations: 0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5; 3.0 mg for spermatic concentration of [ ] = 200 * 106/mL, being called treatments: T0.5; T1.,0; T1.5; T2.0; T2.5; and T3.0, respectively. The spermatic motility and vigor and the supravital and hypoosmotic test were applied to the post-thaw semen. Chapter 2 Four billy goats were used and three samples were collected from each with a total of twelve ejaculates. Each ejaculate was evaluated and the ones good to be frozen by the minimum requirements of motility and vigor by the Brazilian College of Animal Reproduction (CBRA, 1998) were fractionated in six aliquots of 350 * 106 spermatozoa (enough for 7 doses with 50 * 106 spermatozoa/semen straw). Each aliquot received 1.0 mg of CCC in the following treatment: TGlycerol negative control for Tris glycerol diluent without CCC; TGlycerol + CCC Tris glycerol diluent + CCC; TGlycerol + CCC + preincubated CCC diluted in isosmotic solution (normal saline) 15 minutes before addittion of the Tris glycerol diluent; TEthyleno diluent without CCC;TEthylene glycol negative control for Tris ethyleno glycol glycol + CCC Tris ethylene glycol + yolk hen s egg diluent + CCC; TEthylene glycol + CCC + preincubated CCC diluted in isosmotic solution (normal saline) 15 minutes before addition of the Tris ethylene glycol + yolk hen s egg diluent. Chapter 1 Treatments were considered to be different if (P 0.05), and their mean values were:Tcontrol(2.1 ± 0.07), T0.5(2.24 ±0.07), T1.0(2.4 ±0.08), T1.5(2.28 ±0.07), T2.0(2.13 ±0.07), T2.5(2.19 ±0.07), T3.0(2.26±0.09). The percentage of cells with functional membrane in the supravital test in T0.5 (41.5 ± 0.85) was higher (P0.05) among the treatments T2.0; T2.5; T1.0; T3.0 (38.06 ± 0.91; 38.06 ± 1.0; 36.33 ± 0.81; 35.54 ± 0.81; 34.77 ± 1.13, respectively) as compared to Tcontrol ones. The percentage of plasma membrane functionality for treatment T1.5 (30.65 ± 0.98) was lower (P0.05) in the integrity of plasma membrane by hypoosmotic test among Tcontrol (28.55 ± 1.01), T2.5 (24.47 ± 0.76), T0.5 (24.21 ± 0.82), T1.0 (23.74 ± 0.85), T1.5 (21.92 ± 1.18), T2.0 (21.24 ± 0.87), T3.0 (19.68 ± 0.88). Chapter 2 It was found difference among the averages of all treatments for the spermatic motility (P0.05), whose averages are: TEthyleno glycol + CCC + preincubated (2.96± 0.31), TEthyleno glycoll + CCC (2.91 ± 0.12), TGlycerol + CCC + preincubated (2.75 ± 0.2), T Ethyleno glycol (2.59 ± 0.35), TGlycerol + CCC (2.29 ± 0.18), TGlycerol (2.22 ± 0.18). No difference was found (P>0.05) on the percentage plasma membrane integrity by hypoosmotic test on treatments TGlycerol CCC/preincubated (49.65 ± 5.9), TGlycerol + CCC/preincubated + CCC (52.0 ± 4), TEthylene glycol+ (45.05 ± 4.83), TGlycerol (44.8 ± 2.31), TEthylene glycol (44.39 ± 4.66), TEthylene glycol + CCC (39.6 ± 4.96). The functionality of the plasma membrane by supravital test was not affected by the treatments (P>0.05). The treatments averages were: TEthylene 3.82), TEthylene glycol + CCC (26.96 ± 4.73), TGlycerol glycol+ CCC/preincubated + CCC/preincubated (29.0 ± (24.5 ± 4.2), TGlycerol + CCC (23.54 ± 4.49), TGlycerol (20.79 ± 3.35), TEthylene glycol (19.45 ± 4.08). The ATP production by mitochondrial sheath was affected by treatmens (P0.05) and theirs means were: TGlycerol (63.98 ± 8.4), TGlycerol + CCC (63.08 ± 9.05), TGlycerol + CCC/preincubated (52.24 ± 9.47), T5 (52.09 ± 10.88), TEthylene glycol+ CCC/preincubated (44.37 ± 8.96), TEthylene glycol (37.19 ± 10.81).Chapter 1 It is concluded that the addition of 0.5 mg of CCC at spermatic concentration of 200 * 106/mL reduced the loss of integrity and functionality of the plasma membrane. However, the addition of 1.0 mg of CCC at the spermatic concentration 200 * 106/ mL showed better results for sperm cell motility in post-thawed semen. Chapter 2 It is concluded based on the results that the addittion of 1.0 mg of CCC on the spermatic concentration of 200 * 106/ mL did not affected the integrity neither the functionality of plasma membrane of goat sperm. The Tris + Ethyleno glycol + yolk egg hen s yolk diluent did not alter the functionality of plasma membrane or vigor.. Although it has a positive influence on the acrossomal membrane integrity, negatively affects the motility of the thawed sperm compared to solvent-based Tris- glycerol. The preincubation of sperm with CCC does not alter the characteristics of sperm vigor, and integrity and functionality of the plasma membrane, but positively affect the motility of the thawed sperm.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

<b>Estudo do polimorfismo genético da α_S1-caseína em cabras, no Estado de Pernambuco, Brasil</b> - DOI: 10.4025/actascianimsci.v29i3.551 <b>Study of the genetic polymorphism of the α_S1-casein in goats of Pernambuco State, Brazil</b> - DOI: 10.4025/actascianimsci.v29i3.551

O Estado de Pernambuco tem uma vocação pecuária, especialmente, para a exploração de caprinos. Dentre as proteínas, chamadas de caseínas, a α_S1-caseína foi a primeira proteína comprovada com base no polimorfismo genético. Objetivando realizar a genotipagem de cabras criadas no sertão, agreste e zona da mata do Estado de Pernambuco, por meio da técnica de PCR-RFLP, estudou-se o polimorfismo do gene da α_S1-caseína. Utilizaram-se 60 animais, divididos em três grupos de 20 animais, das raças Moxotó, Alpina Americana e SRD (Sem Raça Definida). A extração do DNA foi realizada com a utilização do protocolo fenol-clorofórmio, e o gene da α_S1-caseína foi amplificado por meio da PCR (reação da polimerase em cadeia). Em seguida, foi utilizada a enzima de restrição <em>XmnI</em> para obter a freqüência alélica das raças estudadas. Encontrou-se, nos caprinos, os alelos da α_S1-caseína B e D que foram predominantes para a raça nativa Moxotó e animais SRD (100%), e os alelos C e D, para a raça Alpina Americana (100%), concluindo-se que existem variações genéticas para o gene da α_S1-caseína do leite das raças caprinas estudadas, embora se evidencie a proximidade genética entre a Moxotó e SRD.<br>The Pernambuco State, has been a livestock area, mainly for the caprine exploration. Among the proteins, called caseins, the α_S1-casein was the first proved protein with base in the genetic polymorphism. To genotype goats of the “sertão”, “agreste” and “zona da mata” regions of the Brazilian State of Pernambuco, through the PCR-RFLP technique, we studied the polymorphism of the α_S1-casein gene. Sixty animals were used, divided in three groups of twenty animals of the races Moxotó, American Alpine and UB (Undefined Breed). The DNA extraction was done by the phenol-chloroform protocol and the α_S1-casein gene was amplified through the PCR (Polymerase Chain Reaction). Then, the restriction enzyme <em>XmnI</em> was used to obtain the allele frequency of the studied races. In the goats, we found the α_S1-casein alleles B and D that predominantly were in the native race Moxotó and Ub animals (100%), the alleles, C and D for the American Alpine race (100%), concluding that there are genetic variations for the α_S1-casein in the milk of the goat races studied in the region, although it was observed a genetic proximity between Moxotó and UB

CARACTERÍSTICAS DO SÊMEN CAPRINO DESCONGELADO APÓS A ADIÇÃO DE RINGER LACTATO, CITRATO DE SÓDIO E SOLUÇÃO TRIS

Cryopreservation of semen is of great importance for various reproductive biotechnologies such as artificial insemination (IA), In Vitro Embryo Production (PIV) and Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI). The objective of this work was to evaluate the stability and persistence of motility and strength of sperm, as well as changes in the plasma membrane after the addition of Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% or TRIS solution in thawed goat semen. Semen was collected from two Alpine Brown goats, and standard procedures for cryopreservation and seminal analysis were performed. After thawing the semen, the extenders Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% and TRIS solution were added and Thermoresistance (TTR), Supravital and Morphology Tests were carried out. In TTR, only the group received TRIS solution presented motility and strength for a longer period (90 minutes; P 0.05). We concluded that the addition of the solutions does not allow a large persistence of motility and strength of thawed sperm, but TRIS solution could be used for expansion of seminal doses used in vitro reproductive biotechnology

Avaliação da superexpressão da proteína p53 e das mutações no éxon 8 do gene TP53 em carcinomas mamários caninos e glândulas normais

Este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a expressão da proteína p53, pela técnica de imuno-histoquímica, em neoplasmas mamários malignos em cadelas, além de investigar mutações no éxon 8 do gene supressor Tp53 por meio do padrão de bandas obtidas por PCR-RFLP. Dezenove mamas de cadelas saudáveis foram usadas como controle (Grupo 1). Amostras de 18 casos de tumores malignos (Grupo 2) e suas glândulas mamárias contralaterais (Grupo 3) foram obtidas na rotina do Hospital Veterinário da UFRPE. Os tumores foram identificados histologicamente e classificados em graus de malignidade. O método da estreptoavidina-biotina peroxidase foi utilizado para a análise da expressão de p53 por imuno-histoquímica, de acordo com a localização e intensidade da coloração. A expressão da proteína p53 não foi observada nas amostras do Grupo 1, mas foi encontrada em todas as amostras de tumores malignos (Grupo 2) seja só no núcleo, ou também no citoplasma. No Grupo 3, a expressão foi observada em quatro amostras normais e em duas que apresentavam tumor. Para a análise molecular, o DNA genômico foi extraído e submetido à PCR-RFLP com as seguintes endonucleases: AluI, BsoBI, DdeI e SmaI. O padrão de bandas foi polimórfico entre os grupos, mas não entre as variantes tumorais. Esse polimorfismo detectou mutações no fragmento estudado - éxon 8 do gene Tp53 - que podem resultar em alterações nos nucleotídeos, localizados nos sítios de restrição das enzimas. Esses achados levam a conclusão de que a imunoexpressão da p53 não tem relação com o subtipo histológico ou grau de malignidade do tumor, mas sim com a presença dos tumores no tecido mamário de cadelas. A PCR-RFLP pode ser usada como importante ferramenta para o estudo da carcinogênese mamária na cadela, possibilitando gerar diagnósticos precoces através do polimorfismo obtido com endonucleases de restrição pré-selecionadas

Seasonal variation in the reproductive activity of male goats raised under tropical climate conditions

This study analyzed seasonal variations in the testes, the concentration of sex hormones, the parameters of fresh and thawed semen, and the sexual behavior of male Alpine goats from a temperate region in a tropical climate and possible interference with fertility. The maximum and minimum temperature and luminosity were recorded daily, while seminal, hormonal, and behavioral assessments were carried out every fortnight. The maximum and minimum temperature (°C) and luminosity (h) were recorded daily always at 17.00 h. The scrotal circumference (cm), testicular volume (mL), volume (mL), appearance (creamy, milky, aqueous) and coloration (white, white-yellowish, and yellowish) seminal, turbulence or mass movement (0 to 5), progressive spermatic motility (0 to 100%), spermatic force (0 to 5), concentration (spermatozoids/mL), spermatic pathologies, hypoosmotic test (%), serum levels of FSH (mUI/mL), LH (mUI/mL), testosterone (ng/mL), and sexual behaviors were carried out every fortnight. There was a difference between the scrotal circumference evaluated monthly, testicular volume, volume and concentration of fresh semen, sperm vigor of the thawed semen, serum levels of testosterone, FSH and LH, and some sexual behaviors. Thus, the changes that occur in the quantity and quality of sperm, in the hormonal profile, and in sexual behaviors should not be regarded as an impediment to the use of male Alpine goats in tropical climates throughout the year. These variations do not lead to changes in the semen that may compromise the fertility of these animals

Seasonal variation in the reproductive activity of male goats raised under tropical climate conditions

ABSTRACT This study analyzed seasonal variations in the testes, the concentration of sex hormones, the parameters of fresh and thawed semen, and the sexual behavior of male Alpine goats from a temperate region in a tropical climate and possible interference with fertility. The maximum and minimum temperature and luminosity were recorded daily, while seminal, hormonal, and behavioral assessments were carried out every fortnight. The maximum and minimum temperature (°C) and luminosity (h) were recorded daily always at 17.00 h. The scrotal circumference (cm), testicular volume (mL), volume (mL), appearance (creamy, milky, aqueous) and coloration (white, white-yellowish, and yellowish) seminal, turbulence or mass movement (0 to 5), progressive spermatic motility (0 to 100%), spermatic force (0 to 5), concentration (spermatozoids/mL), spermatic pathologies, hypoosmotic test (%), serum levels of FSH (mUI/mL), LH (mUI/mL), testosterone (ng/mL), and sexual behaviors were carried out every fortnight. There was a difference between the scrotal circumference evaluated monthly, testicular volume, volume and concentration of fresh semen, sperm vigor of the thawed semen, serum levels of testosterone, FSH and LH, and some sexual behaviors. Thus, the changes that occur in the quantity and quality of sperm, in the hormonal profile, and in sexual behaviors should not be regarded as an impediment to the use of male Alpine goats in tropical climates throughout the year. These variations do not lead to changes in the semen that may compromise the fertility of these animals

Seasonal variations in the seminal plasma composition of male goats

Este estudo avaliou as variações mensais proteicas e bioquímicas no plasma seminal de bodes da raça Alpina criados em clima tropical. A avaliação da motilidade progressiva de espermatozóides foi realizada no sêmen fresco e descongelado, e a avaliação da funcionalidade da membrana após a descongelação. Após 12 meses, o plasma seminal foi submetido a eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida a 10 e 14%, em paralelo com as análises dos seus parâmetros bioquímicos. No gel de poliacrilamida a 10% foram identificadas 22 bandas proteicas  (25-181 kDa), enquanto que no gel de 14%, foram identificadas 16 bandas proteicas (5,7-165 kDa). As frações de proteínas de 5,7 e 34,3-34,5 kDa mostraram um perfil que variou de acordo com a sazonalidade reprodutiva dos bodes, com o aumento da produção ocorrendo durante a estação reprodutiva. Na análise dos parâmetros bioquímicos, as concentrações de cálcio, fósforo, e colesterol também mostraram variação sazonal. No entanto, a análise da motilidade progressiva, bem como a funcionalidade de membrana não alteraram. Estes resultados indicam que alterações nos perfis proteico e bioquímico do plasma seminal durante o ano, não alterou a qualidade do sêmen fresco e descongelado de bodes Alpinos em clima tropical

Productive performance of sheep fed buffel grass silage in replacement of corn silage

Este estudio tuvo como objetivo evaluar el desempeño productivo y el estado nutricional de ovinos mestizos alimentados con una dieta que contenía ensilaje de pasto buffel (EPB) en sustitución de ensilaje de maíz (EM). Treinta y dos (32) ovinos Santa Inês machos con un peso corporal promedio de 20.09 ± 2.0 kg se distribuyeron en un diseño de bloques completamente al azar con cuatro tratamientos (0, 33.3, 66.6 y 100 % de sustitución de ensilaje de maíz por ensilaje de pasto buffel) y ocho animales por tratamiento. Se evaluó la ingesta de materia seca, la digestibilidad aparente de nutrientes, el balance hídrico, el balance de nitrógeno y el desempeño productivo de los animales. Los diferentes niveles de sustitución de ensilaje de maíz por ensilaje de pasto buffel promovieron una disminución lineal en el consumo de extracto etéreo (P=0.001) y carbohidratos no fibrosos (P0.05) en el desempeño productivo de los ovinos, con una ganancia diaria de peso promedio de 140.16 g/día. La sustitución del 66.6 % de EM por EPB proporciona resultados satisfactorios para la ingesta de materia seca y nutrientes, y la ingesta de agua, con una ganancia de peso de hasta 155 g/día para ovinos mestizos Santa Inês en los semiáridos brasileños.This study aimed to evaluate the productive performance and nutritional status of crossbred sheep fed a diet containing buffel grass silage (BGS) in substitution of corn silage (CS). Thirty-two male Santa Inês sheep with an average body weight of 20.09 ± 2.0 kg were distributed in a completely randomized block design with four treatments (0, 33.3, 66.6, and 100 % of substitution of corn silage with buffel grass silage) and eight animals per treatment. Dry matter intake, apparent nutrient digestibility, water balance, nitrogen balance, and productive performance of animals were evaluated. The different levels of substitution of corn silage by buffel grass silage promoted a linear decrease in the consumption of ether extract (P=0.001) and non-fibrous carbohydrate (P0.05) were observed in sheep productive performance,  with an average daily  weight  gain of 140.16 g/d.  The replacement  of 66.6 % of CS for BGS provides satisfactory results for dry matter and nutrients intake, and water intake, with weight gain of up to 155 g/d for Santa Inês crossbred sheep in Brazilian semi-arid