Estudios de Microbiota urinaria en personas asintomáticas y sintomáticas ¿Qué tienen los microorganismos para decir?

La vejiga urinaria se consideraba un órgano estéril, sin embargo se ha demostrado la existencia de una microbiota urinaria. Nos propusimos evaluar la presencia bacterias en la orina de personas asintomáticas y con patología u sintomáticas utilizando distintos métodos de cultivo, de bacterias intracelulares de vejiga. Las muestras se sembraron mediante urocultivo estándar -UcE- y expandido - EQUC- en distintas condiciones de cultivo y atmosféricas. La presencia de bacterias intracelulares se evaluó con una técnica de lisis celular y cultivo y mediante microscopía láser confocal (MLC). Los microorganismos presentes con diferentes morfologías en los distintos medios se identificaron por MALDI-TOF. Se recolectaron por la técnica de chorro medio 114 muestras de orina (51 de sexo femenino -7 niñas- y 63 de sexo masculino -14 niños-), de 69 asintomáticos y 45 sintomáticos. En UcE hubo crecimiento bacteriano en 91/114 muestras (79,8 %), 57 asintomáticos (83%) y 34 sintomáticos (75,6%). En EQUC, hubo crecimiento en 107/114 (94%) asintomáticos (97,1%) y 40 sintomáticos (88,9%). En asintomáticos y sintomáticos, el EQUC permite detectar crecimiento en un 15% más en relación al UcE (p=0,28 y p=0,0001). Se observaron bacterias intracelulares por la técnica de cultivo en 54/114 muestras de orina, 26/67 asintomáticos (38 %) y 28/45 sintomáticos (62 %), p=0,013. Hasta el momento se analizaron por ambas técnicas (cultivo y MLC) 87 muestras, en 38 (44%) se evidenciaron bacterias intracelulares (19/56 asintomáticos y 19/3 sintomáticos, p = 0,0023). La identificación de los microorganismos reveló u heterogeneidad de especies bacterianas presentes tanto en personas asintomáticas como sintomáticas. De las bacterias intracelulares se observó predominancia d Escherichia coli, seguido por Stenotophomonas maltophilia, Enterococcus faecalis y Proteus mirabilis. Estos estudios demuestran la presencia de bacterias en la orina de personas sanas y con sintomatología, e incluso de bacterias intracelulares. Si bien estos resultados son preliminares pueden establecer la predisposición a tener alguna patología del tracto urinario e incluso pueden sentar las bases para futuras terapias de re-establecimiento de la microbiota urinaria posterior a terapias antimicrobianas o en casos infecciones recurrentes.ANI

Enteropathogens Associated with Acute Diarrhea in Children from Households with High Socioeconomic Level in Uruguay

Infectious diarrhea, a common disease of children, deserves permanent monitoring in all social groups. To know the etiology and clinical manifestations of acute diarrhea in children up to 5 years of age from high socioeconomic level households, we conducted a descriptive, microbiological, and clinical study. Stools from 59 children with acute community-acquired diarrhea were examined, and their parents were interviewed concerning symptoms and signs. Rotavirus, adenovirus, and norovirus were detected by commercially available qualitative immunochromatographic lateral flow rapid tests. Salmonella, Campylobacter, Yersinia, and Shigella were investigated by standard bacteriological methods and diarrheagenic E. coli by PCR assays. We identified a potential enteric pathogen in 30 children. The most frequent causes of diarrhea were enteropathogenic E. coli (EPEC), viruses, Campylobacter, Salmonella, and Shiga-toxin-producing E. coli (STEC). Only 2 patients showed mixed infections. Our data suggest that children with viral or Campylobacter diarrhea were taken to the hospital earlier than those infected with EPEC. One child infected with STEC O26 developed “complete” HUS. The microbiological results highlight the importance of zoonotic bacteria such as atypical EPEC, Campylobacter, STEC, and Salmonella as pathogens associated with acute diarrhea in these children. The findings also reinforce our previous communications about the regional importance of non-O157 STEC strains in severe infant food-borne diseases

Surveillance of antibiotic resistance evolution and detection of class 1 and 2 integrons in human isolates of multi-resistant Salmonella Typhimurium obtained in Uruguay between 1976 and 2000.

[Objectives] To study the evolution of antibiotic resistance in isolates of Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium (Salmonella Typhimurium) obtained in Uruguay between the years 1976 and 2000, and to determine the incidence of class 1 and 2 integrons in the multiresistant isolates.[Methods] We studied 258 strains of Salmonella Typhimurium from various sources, isolated between 1976 and 2000. We determined the evolution of antibiotic resistance and the distribution of class 1 and 2 integrons in all isolates by means of disk diffusion assays and PCR.[Results] During the period 1989—2000 resistance to streptomycin was 56.8%, tetracycline 13.6%, sulfonamides 11.2%, and ampicillin 7.2%. Resistance to gentamicin, kanamycin, chloramphenicol, and nalidixic acid were lower than 5%; no resistance was detected to fluoroquinolones, oxyiminocephalosporins, and amikacin. These results show a dramatic decrease with respect to values found in the period 1976—1988. In this period, resistance to streptomycin was 63.2%, tetracycline 36.8%, sulfonamides 32.3%, and ampicillin 27.8%. Throughout the two periods, 29 multi-resistantPeer reviewe

Detection of class 1 and 2 integrons, extended-spectrum β-lactamases and qnr alleles in enterobacterial isolates from the digestive tract of Intensive Care Unit inpatients

In this study, we searched for extended-spectrum β-lactamases (ESBLs), class 1 and 2 integrons, and qnrA, qnrB and qnrS genes in 56 oxyimino-cephalosporin and/or ciprofloxacin-resistant enterobacterial isolates obtained from the gastrointestinal tract of patients admitted in an Intensive Care Unit in Uruguay. ESBLs were detected in 11 isolates (6 CTX-M-2, 3 CTX-M-9, 1 CTX-M-15 and 1 PER-2). qnr genes and integrons were detected in 5 and 24 isolates, respectively. Eight different antibiotic resistance gene cassettes were found within six different genetic arrangements. Two types of complex class 1 integrons carrying insertion sequence ISCR1 were found, one showing blaCTX-M-2–orf3 and the other qnrA1–ampR. Ten of the thirteen isolates carrying class 2 integrons presented the element IS5 inserted between intI2 and dfrA1, whereas another class 2 integron lacked the internal stop codon usually present in intI2. This is the first report of the occurrence of qnrA, qnrB and blaCTX-M-9 in Uruguay. Dissemination of the different groups of CTX-M enzymes (i.e. groups 1, 2 and 9) appears to be a recent phenomenon in South America.Fil: Bado, Inés. Universidad de la Republica; UruguayFil: Cordeiro, Nicolás F.. Universidad de la Republica; UruguayFil: Robino, Luciana. Universidad de la Republica; UruguayFil: García Fulgueiras, Virginia. Universidad de la Republica; UruguayFil: Seija, Verónica. Universidad de la Republica; UruguayFil: Bazet, Cristina. Universidad de la Republica; UruguayFil: Gutkind, Gabriel Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Ayala, Juan A.. Consejo Superior de Investigaciones Cientificas; España. Universidad Autónoma de Madrid; EspañaFil: Vignoli, Rafael. Universidad de la Republica; Urugua

Informe final del proyecto: Desarrollo de un test inmunocromatográfico rápido para la detección de uropatógenos y betalactamasas de espectro extendido en orina

Las Infecciones del Tracto Urinario (ITU) son un problema frecuente. Escherichia coli es el principal agente etiológico, seguido por Staphylococcus saprophyticus, Klebsiella pneumoniae y Proteus mirabilis. La técnica de oro para el diagnóstico de ITU es el urocultivo, pero su resultado demora al menos 48h. La tira reactiva de orina (TRO) se utiliza como test rápido de tamizaje para ITU. La desventaja es su baja sensibilidad (41-64% para nitritos y 48-86% para leucocitos) y especificidad variable (82-98%), lo cual conduce en muchos casos a diagnósticos incorrectos y al uso inapropiado de antimicrobianos. El objetivo del estudio fue desarrollar un test inmunocromatográfico (TI) rápido para la detección de los uropatógenos más frecuentes en orina. A su vez, nos propusimos evaluar un formato comercial de TI para detectar E. coli en orina y evaluar su rendimiento en muestras clínicas de pacientes con sospecha de ITU. Se evaluaron y seleccionaron diferentes anticuerpos comerciales para la detección de los distintos uropatógenos mediante ELISA. Se desarrollaron los TI de producción propia para cada uropatógeno y se puso a punto el test comercial con formato universal utilizando el par de Ac anti E. coli seleccionado previamente. Para la validación del test se analizaron 161 muestras de orina de pacientes con sospecha de ITU y se comparó su resultado con el del urocultivo. Si bien se consiguió desarrollar un prototipo de TI que funcionó para la detección de los patógenos evaluados, su interpretación presentó dificultades visuales, por lo cual se procedió a utilizar el TI comercial que presentó mejor especificidad, valor predictivo positivo y precisión diagnóstica que la TRO. La combinación de ambas técnicas (TRO más TI) como método de tamizaje presenta una excelente sensibilidad (94%) y precisión diagnóstica (80%), representando una buena y rápida estrategia alternativa para los urocultivos.Agencia Nacional de Investigación e Innovació

Extended-spectrum β-lactamases and plasmid-mediated quinolone resistance in enterobacterial clinical isolates in the paediatric hospital of Uruguay

Objectives To analyse the prevalence of resistance to β-lactams and plasmid-mediated quinolone resistance in Enterobacteriaceae in the paediatric hospital of Uruguay. Methods A total of 368 enterobacterial isolates collected between 1 May and 30 November 2009 were studied for the presence of extended-spectrum β-lactamases (ESBLs), qnr alleles and aac(6′)Ib by phenotypic and molecular methods. The genomic context and transferability of β-lactamase and qnr genes were examined by PCR and conjugation, respectively. Results The proportion of inpatients having an infection caused by ESBL-producing enterobacteria was 0.23% (16/7073) in paediatrics wards, 0.64‰ (3/4696) in the neonatology department and 0.03‰ (1/32 557) in the emergency department. ESBL-carrying enterobacteria constituted a total of 21.6% (16/74), 13% (3/23) and 0.37% (1/271) when samples were obtained from paediatrics wards, the neonatology department and the emergency department, respectively. Overall, CTX-M-2 (n = 7), CTX-M-9 (n = 3), CTX-M-8 (n = 2), CTX-M-15 (n = 1), SHV-5 (n = 5) and SHV-2 (n = 2) β-lactamases were detected. Thirteen out of 20 ESBL-producing isolates also carried the aac(6′)Ib gene, and the cr variant was detected in one of them. qnr alleles were detected in four isolates comprising two qnrA1 genes, a qnrB8-like variant and a new qnrB gene showing 26 amino acid differences from QnrB1. Conclusions The proportion of ESBL-producing enterobacteria in Uruguay's paediatric hospital during the study period was 2.3 per 1000 hospitalized patients. The number of different microorganisms detected, as well as the various EBSLs, suggests the occurrence of sporadic episodes instead of nosocomial outbreaks. Nevertheless, the presence of new resistance genes reinforces the necessity for permanent surveillance programmes.Fil: García Fulgueiras, Virginia. Universidad de la Republica; UruguayFil: Bado, Inés. Universidad de la Republica; UruguayFil: Mota, María Inés. Universidad de la Republica; Uruguay. Uruguay. Ministerio de Salud Pública; UruguayFil: Robino, Luciana. Universidad de la Republica; UruguayFil: Cordeiro, Nicolás F.. Universidad de la Republica; UruguayFil: Varela, Adriana. Uruguay. Ministerio de Salud Pública; UruguayFil: Algorta, Gabriela. Universidad de la Republica; Uruguay. Uruguay. Ministerio de Salud Pública; UruguayFil: Gutkind, Gabriel Osvaldo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay; ArgentinaFil: Ayala, Juan A.. Universidad Autónoma de Madrid; España. Consejo Superior de Investigaciones Cientificas; EspañaFil: Vignoli, Rafael. Universidad de la Republica; Urugua