Estudio molecular en Neoplasias Mieloproliferativas Crónicas: mutación JAK2V617F

La mutación JAK2V617F constituye la alteración molecular más frecuente en Neoplasias Mieloproliferativas Crónicas BCR-ABL-negativas, detectándose en > 95% de los pacientes con Policitemia Vera y alrededor de 50-60% de aquellos con Mielofibrosis Primaria y Trombocitemia Esencial. Constituye un marcador clonal, siendo su utilidad diagnóstica principal la diferenciación entre desórdenes neoplásicos y condiciones reactivas. Además de las Neoplasias Mieloproliferativas BCR-ABL-negativas, puede detectarse con menor frecuencia en otras Neoplasias Mieloides. Los pacientes con Trombocitemia Esencial portadores de esta mutación presentan un moderado incremento en el riesgo trombótico, si bien su presencia no constituye por sí misma un parámetro que determine la decisión terapéutica. Hasta el presente, si bien se ha descripto mayor riesgo de trombosis y transformación a mielofibrosis en los pacientes con niveles más elevados de carga alélica JAK2V617F, la utilidad de su medición en el manejo clínico o el monitoreo del tratamiento en los pacientes con Neoplasias Mieloproliferativas no es clara.The JAK2V617 mutation is the most frequent molecular abnormality underlying the pathogenesis of chronic myeloproliferative neoplasmas. More than 95% of patients with polycythemia vera and around half of those with essential thrombocythemia and primary myelofibrosis carry this mutation. It is useful to distinguish clonal from reactive conditions and is one of the diagnostic criteria included in the WHO classification. It may be detected, albeit with low frequency, in other myeloid neoplasms. Although a moderate increase in the thrombotic risk has been described for JAK2V617F-positive essential thrombocythemia patients, its presence does not represent by itself a parameter to guide treatment recommendations. Patients with high JAK2V617F allelic burden have increased risk of thrombosis and myelofibrotic transformation. However, the role of allele burden measurement in the clinical management and treatment monitoring of patients with myeloproliferative neoplasms remains to be determined.Fil: Heller, Paula Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Medicas; ArgentinaFil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Medicas; Argentin

Pathophysiological mechanisms leading to low platelet count in immune thrombocytopenia

Primary immune thrombocytopenia (ITP) is an autoimmune disorder characterized by the decrease in peripheral blood platelet count below 100 x 109/L, and an increased bleeding risk when thrombocytopenia drops below 30 x 109/L. The mechanisms leading to ITP in adults, although not completely elucidated, involves an imbalance between effector and regulatory cells that results in a breakdown of the immune tolerance. Autoantibodies are considered the main responsible for thrombocytopenia, although direct T-cell cytotoxic effect and lysis by Complement attachment and activation could also contribute to platelet elimination from circulation. In addition to increased peripheral clearance, abnormalities in platelet production also favors platelet count reduction. This review is intended to describe some specific knowledge about peripheral and bone marrow mechanisms leading to thrombocytopenia in adult ITP.Fil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Goette, Nora Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Marta, Rosana Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Platelet Apoptosis in Adult Immune Thrombocytopenia: Insights into the Mechanism of Damage Triggered by Auto-antibodies

Mechanisms leading to decreased platelet count in immune thrombocytopenia (ITP) are heterogeneous. This study describes increased platelet apoptosis involving loss of mitochondrial membrane potential (ΔΨm), caspase 3 activation (aCasp3) and phosphatidylserine (PS) externalization in a cohort of adult ITP patients. Apoptosis was not related to platelet activation, as PAC-1 binding, P-selectin exposure and GPIb-IX internalization were not increased. Besides, ITP platelets were more sensitive to apoptotic stimulus in terms of aCasp3. Incubation of normal platelets with ITP plasma induced loss of ΔΨm, while PS exposure and aCasp3 remained unaltered. The increase in PS exposure observed in ITP platelets could be reproduced in normal platelets incubated with ITP plasma by adding normal CD3+ lymphocytes to the system as effector cells. Addition of leupeptin -a cathepsin B inhibitor- to this system protected platelets from apoptosis. Increased PS exposure was also observed when normal platelets and CD3+ lymphocytes were incubated with purified IgG from ITP patients and was absent when ITP plasma was depleted of auto-antibodies, pointing to the latter as responsible for platelet damage. Apoptosis was present in platelets from all patients carrying anti-GPIIb-IIIa and anti-GPIb auto-antibodies but was absent in the patient with anti-GPIa-IIa auto-antibodies. Platelet damage inversely correlated with platelet count and decreased during treatment with a thrombopoietin receptor agonist. These results point to a key role for auto-antibodies in platelet apoptosis and suggest that antibody-dependent cell cytotoxicity is the mechanism underlying this phenomenon.Fil: Goette, Nora Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Glembotsky, Ana Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Grodzielski, Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Contrufo, Geraldine. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Pierdominici, Marta S.. Departamento de Hematología, Hospital Ramos Mejía, Buenos Aires, Argentina; ArgentinaFil: Espasandin, Yesica Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Riveros, Dardo Alberto. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas “Norberto Quirno”; ArgentinaFil: García, Alejandro Jorge. Centro de Educación Médica e Investigaciones Clínicas “Norberto Quirno”; ArgentinaFil: Molinas, Felisa Concepción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Heller, Paula Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Marta, Rosana Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Anagrelide platelet-lowering effect is due to inhibition of both megakaryocyte maturation and proplatelet formation: Insight into potential mechanisms

Background and Objectives: Anagrelide represents a treatment option for essential thrombocythemia patients. It lowers platelet counts through inhibition of megakaryocyte maturation and polyploidization, although the basis for this effect remains unclear. Based on its rapid onset of action, we assessed whether, besides blocking megakaryopoiesis, anagrelide represses proplatelet formation (PPF) and aimed to clarify the underlying mechanisms. Methods and Results: Exposure of cord blood-derived megakaryocytes to anagrelide during late stages of culture led to a dose- and time-dependent inhibition of PPF and reduced proplatelet complexity, which were independent of the anagrelide-induced effect on megakaryocyte maturation. Whereas anagrelide was shown to phosphorylate cAMP-substrate VASP, two pharmacologic inhibitors of the cAMP pathway were completely unable to revert anagrelide-induced repression in megakaryopoiesis and PPF, suggesting these effects are unrelated to its ability to inhibit phosphodiesterase (PDE) 3. The reduction in thrombopoiesis was not the result of down-regulation of transcription factors which coordinate PPF, while the myosin pathway was identified as a candidate target, as anagrelide was shown to phosphorylate the myosin light chain and the PPF phenotype was partially rescued after inhibition of myosin activity with blebbistatin. Conclusions: The platelet-lowering effect of anagrelide results from impaired megakaryocyte maturation and reduced PPF, both of which are deregulated in essential thrombocythemia. These effects seem unrelated to PDE3 inhibition, which is responsible for anagrelide′s cardiovascular side-effects and antiplatelet activity. Further work in this field may lead to the potential development of drugs to treat thrombocytosis in myeloproliferative disorders with an improved pharmacologic profile.Fil: Espasandin, Yesica Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Glembotsky, Ana Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Grodzielski, Matías. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Goette, Nora Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Molinas, Felisa Concepción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Marta, Rosana Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Heller, Paula Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Increased levels of plasma interleukin-6 soluble receptor in patients with essential thrombocythemia

Background and Objectives. The pathogenesis of essential thrombocythemia (ET), a disease characterized by megakaryocyte hyperplasia and persistent thrombocytosis, is not completely clarified. Interleukin-6 (IL-6), one of the cytokines related to megakaryocytic development, exerts its effect through binding to a cell surface receptor, IL-6Ra, and a signal transducing unit, gp130. Interestingly, the soluble form of the IL-6Ra, IL-6sR, is an agonist for IL-6 activity. In order to evaluate the possible participation of IL-6sR in ET we measured its levels in plasma, platelets and in the supernatant of a mononuclear cell culture. We also evaluated IL-6R on leukocyte membrane and IL-6R/IL-6sR mRNA expression in mononuclear cells. Design and Methods. Fifty-five patients with ET were evaluated. IL-6sR and IL-6 were measured by an ELISA technique. Mononuclear cells were cultured for 48 hr and IL-6sR released into the supernatant was measured. IL-6R on leukocyte surfaces was evaluated by flow cytometry. IL-6R and IL-6sR mRNA levels were assessed by semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. Results. Plasma IL-6sR levels were increased while intraplatelet levels were low in untreated ET patients. Plasma levels decreased during treatment. Non-stimulated mononuclear cells from ET patients released greater amounts of IL-6sR than did cells from normal controls in 48-hour culture. No abnormality was found in IL-6R or IL-6sR mRNA expression by mononuclear ET cells. IL-6R on leukocyte surfaces was normal. Interpretations and Conclusions. Increased plasma IL-6sR levels might have a role in the abnormal megakaryocytic proliferation seen in ET patients, while platelets and mononuclear cells could be the source of the above-mentioned high levels of plasma IL6sR.Fil: Marta, Rosana Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Goette, Nora Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Heller, Paula Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Kornblihtt, Laura Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Vassallu, Patricia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Glembotski, Ana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Pirola, Carlos José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Molinas, Felisa Concepción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Increased levels of plasma interleukin-6 soluble receptor in patients with essential thrombocythemia

Background and Objectives. The pathogenesis of essential thrombocythemia (ET), a disease characterized by megakaryocyte hyperplasia and persistent thrombocytosis, is not completely clarified. Interleukin-6 (IL-6), one of the cytokines related to megakaryocytic development, exerts its effect through binding to a cell surface receptor, IL-6Ra, and a signal transducing unit, gp130. Interestingly, the soluble form of the IL-6Ra, IL-6sR, is an agonist for IL-6 activity. In order to evaluate the possible participation of IL-6sR in ET we measured its levels in plasma, platelets and in the supernatant of a mononuclear cell culture. We also evaluated IL-6R on leukocyte membrane and IL-6R/IL-6sR mRNA expression in mononuclear cells. Design and Methods. Fifty-five patients with ET were evaluated. IL-6sR and IL-6 were measured by an ELISA technique. Mononuclear cells were cultured for 48 hr and IL-6sR released into the supernatant was measured. IL-6R on leukocyte surfaces was evaluated by flow cytometry. IL-6R and IL-6sR mRNA levels were assessed by semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. Results. Plasma IL-6sR levels were increased while intraplatelet levels were low in untreated ET patients. Plasma levels decreased during treatment. Non-stimulated mononuclear cells from ET patients released greater amounts of IL-6sR than did cells from normal controls in 48-hour culture. No abnormality was found in IL-6R or IL-6sR mRNA expression by mononuclear ET cells. IL-6R on leukocyte surfaces was normal. Interpretations and Conclusions. Increased plasma IL-6sR levels might have a role in the abnormal megakaryocytic proliferation seen in ET patients, while platelets and mononuclear cells could be the source of the above-mentioned high levels of plasma IL6sR.Fil: Marta, Rosana Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Goette, Nora Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Heller, Paula Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Kornblihtt, Laura Inés. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Vassallu, Patricia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Glembotski, Ana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Pirola, Carlos José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Molinas, Felisa Concepción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Abnormal proplatelet formation and emperipolesis in cultured human megakaryocytes from gray platelet syndrome patients

none10siThe Gray Platelet Syndrome (GPS) is a rare inherited bleeding disorder characterized by deficiency of platelet α-granules, macrothrombocytopenia and marrow fibrosis. The autosomal recessive form of GPS is linked to loss of function mutations in NBEAL2, which is predicted to regulate granule trafficking in megakaryocytes, the platelet progenitors. We report the first analysis of cultured megakaryocytes from GPS patients with NBEAL2 mutations. Megakaryocytes cultured from peripheral blood or bone marrow hematopoietic progenitor cells from four patients were used to investigate megakaryopoiesis, megakaryocyte morphology and platelet formation. In vitro differentiation of megakaryocytes was normal, whereas we observed deficiency of megakaryocyte α-granule proteins and emperipolesis. Importantly, we first demonstrated that platelet formation by GPS megakaryocytes was severely affected, a defect which might be the major cause of thrombocytopenia in patients. These results demonstrate that cultured megakaryocytes from GPS patients provide a valuable model to understand the pathogenesis of GPS in humans.openDi Buduo, Christian A.; Alberelli, Maria Adele; Glembostky, Ana C.; Podda, Gianmarco; Lev, Paola R.; Cattaneo, Marco; Landolfi, Raffaele; Heller, Paula G.; Balduini, Alessandra; De Candia, EricaDI BUDUO, CHRISTIAN ANDREA; Alberelli, Maria Adele; Glembostky, Ana C.; Podda, Gianmarco; Lev, Paola R.; Cattaneo, Marco; Landolfi, Raffaele; Heller, Paula G.; Balduini, Alessandra; De Candia, Eric

Señales de sobrevida inducidas por el complejo IL-6/IL-6sR en el linaje megacariocítico: influencia de la mutación JAK2-V617F

La IL-6 actúa a través del receptor de membrana y del soluble (IL-6sR) que confiere sensibilidad a células sin receptor de membrana. Previamente reportamos aumento de IL-6sR en trombocitemia esencial (TE), una neoplasia mieloproliferativa (NM). En este trabajo se evaluó la acción del complejo IL-6/IL-6sR (COMP) comparado con la IL-6 en su capacidad de protección de la apoptosis de progenitores CD34+ normales y de NM y de activación de JAK/STAT en plaquetas normales y de NM. Se evaluó expresión de fosfatidilserina por marcación con anexina V y de caspasa 3 activada en células CD34+ de sangre periférica de NM y de cordón umbilical como control, y activación de JAK2 y STAT3 por western-blot con anticuerpos contra las proteínas fosforiladas y sin fosforilar. En conjunto, los progenitores CD34+ de pacientes y controles tuvieron menos apoptosis con COMP que con IL-6 (activación de caspasa 3 p=0.001, 7 normales, 4 pacientes; expresión de anexina V p=0.029, 6 normales, 5 pacientes; Rangos señalados Wilcoxon) La activación de JAK2 y STAT3 en plaquetas se evaluó calculando la relación (Rel) de intensidad de la banda de la proteína fosforilada respecto del total estimulada por COMP (RelCOMP) y por TPO (RelTPO), obteniéndose el cociente (R COMP/TPO). Los pacientes JAK2V617F + tuvieron aumento de R COMP/TPO del STAT3, 2.03 (0.45-3.03) (mediana y rango) (n=4), respecto de controles 0.63 (0.014- 0.8) (n=5) y pacientes no mutados, 0.75 (0.005-1.12) (n=5) (ANOVA p=0.018). La activación de JAK2 siguió una tendencia similar a STAT3 aunque no alcanzó diferencias significativas. Los resultados sugieren que el COMP es más efectivo que la IL-6 en la protección de la apoptosis de los progenitores CD34+. Esto junto al hallazgo de aumento de IL-6sR en TE, sugerirían que un mayor nivel de IL-6sR favorece la sobrevida de los progenitores megacariocíticos en NM. La protección ocurriría a través de JAK2 y STAT3 siendo más eficiente en pacientes JAK2V617F+.Fil: Chazarreta, Carlos Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Goette, Nora Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Salim, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Molinas, Felisa Concepción. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Marta, Rosana Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Platelet toll-like receptors mediate thromboinflammatory responses in patients with essential thrombocythemia

Essential thrombocythemia (ET) is comprised among chronic myeloproliferative neoplasms (MPN) and is caused by driver mutations in JAK2, CALR and MPL, which lead to megakaryocyte proliferation and prominent thrombocytosis. Thrombosis remains the main cause of morbidity in ET and is driven by the interplay between blood cells, the endothelium, the clotting cascade and host-derived inflammatory mediators. Platelet activation plays a key role in the thrombotic predisposition, although the underlying mechanisms remain poorly defined. In addition to their role in hemostasis, platelets participate in innate immunity and inflammation owing to the expression of toll-like receptors (TLR), which recognize inflammatory signals, triggering platelet functional responses. Considering the impact of inflammation on ET procoagulant state, we assessed the contribution of TLR2 and TLR4 to platelet hemostatic and inflammatory properties in ET patients, by using Pam3CSK4 and lipopolysaccharide (LPS) as specific TLR2 and TLR4 ligands, respectively. TLR2 ligation induced increased surface translocation of α-granule-derived P-selectin and CD40L, which mediate platelet interaction with leukocytes and endothelial cells, respectively, and higher levels of dense granule-derived CD63 in patients, whereas PAC-1 binding was not increased and LPS had no effect on these platelet responses. Platelet-neutrophil aggregate formation was elevated in ET at baseline and after stimulation of both TLR2 and TLR4. In addition, ET patients displayed higher TLR2- and TLR4-triggered platelet secretion of the chemokine RANTES (CCL5), whereas von Willebrand factor release was not enhanced, revealing a differential releasate pattern for α-granule-stored inflammatory molecules. TLR-mediated hyperresponsiveness contrasted with impaired or preserved responses to classic platelet hemostatic agonists, such as TRAP-6 and thrombin. TLR2 and TLR4 expression on the platelet surface was normal, whereas phosphorylation of downstream effector ERK1/2 was higher in patients at baseline and after incubation with Pam3CSK4, which may partly explain the enhanced TLR2 response. In conclusion, exacerbated response to TLR stimulation may promote platelet activation in ET, boosting platelet/leukocyte/endothelial interactions and secretion of inflammatory mediators, overall reinforcing the thromboinflammatory state. These findings highlight the role of platelets as inflammatory sentinels in MPN prothrombotic scenario and provide additional evidence for the close intertwining between thrombosis and inflammation in this setting.Fil: Marin Oyarzún, Cecilia Paola. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Glembotsky, Ana Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Goette, Nora Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: de Luca, Geraldine. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Baroni Pietto, Maria Constanza. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Moiraghi, Beatriz. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos "Ramos Mejía"; ArgentinaFil: Castro Ríos, Miguel A.. Consultorios Hematológicos; ArgentinaFil: Vicente, Angeles. Hospital Alemán; ArgentinaFil: Marta, Rosana Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Schattner, Mirta Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Heller, Paula Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; Argentin

Desialilación plaquetaria e influencia de los autoanticuerpos en la trombocitopenia del lupus eritematoso sistémico

En estudios previos demostramos que la apoptosis y activación plaquetaria junto con la inhibición en la formación de proplaquetas (FPP) contribuyen a la trombocitopenia en el lupus eritematoso sistémico (LES). En el presente estudio evaluamos la pérdida de ácido siálico inducida por plasma de LES como un posible mecanismo adicional que favorece la eliminación periférica de plaquetas en esta entidad y la participación de los autoanticuerpos anti-plaquetarios en la inhibición de la FPP. Se obtuvieron muestras de plasma de 25 pacientes LES sin (PNT) y con trombocitopenia (PT) y 25 controles (C) y muestras de plaquetas normales por centrifugación diferencial. Las plaquetas normales se incubaron con plasmas LES o controles y se evaluó la desialinización de glicoproteínas plaquetarias por citometría de flujo a través de la unión de RCA (Ricinus communis agglutinin I) y PNA (peanut agglutinin), lectinas con afinidad por galactosa que queda expuesta tras la pérdida de ácido siálico. Los plasmas de LES indujeron la desialilación de las plaquetas (p<0.01, test t) siendo mayor el efecto observado en presencia de plasmas PT. Para evaluar el efecto de los autoanticuerpos anti-plaquetarios en la inhibición de la FPP, se seleccionaron 3 plasmas LES que previamente demostraron un marcado efecto inhibitorio sobre la trombopoyesis y se incubaron con plaquetas normales para inducir la unión de los autoanticuerpos presentes en los plasmas de LES a sus blancos antigénicos en plaquetas normales. Luego se separaron las plaquetas para obtener el plasma libre de autoanticuerpos (inmunodepletado). Posteriormente, se cultivaron progenitores hematopoyéticos CD34+ obtenidos de sangre de cordón umbilical normal en medio libre de plasma, hasta obtener megacariocitos maduros. Al día 12 de cultivo se les adicionó en pocillos independientes 10% de plasma LES o el mismo plasma inmunodepletado y se evaluó la trombopoyesis al día 15, observándose reversión de la inhibición en presencia de los plasmas inmunodepletados, lo que demuestra el rol fundamental de los autoanticuerpos en este proceso.Considerando en conjunto tanto las alteraciones descriptas anteriormente (apoptosis y activación plaquetaria, inhibición de trombopoyesis) como la desialilación, estas anormalidades fueron más frecuentes en pacientes con PT que en PNT y dentro de los PT, en aquellos con mayor actividad de la enfermedad (SLEDAI) (Fisher exact test, **p<0.01).Nuestros resultados sugieren que los mecanismos de trombocitopenia son variados y pueden ser concomitantes en un mismo paciente, y que la incidencia de los mismos está asociada con mayor severidad de la enfermedad.Fil: Baroni Pietto, Maria Constanza. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Lev, Paola Roxana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Glembotsky, Ana Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Collado, V.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Pisoni, C.. Centro de Educaciones Médicas e Investigación Clínica "Norberto Quirno"; ArgentinaFil: Gonzalez, J.. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Carlos Durand; ArgentinaFil: Gomez, R.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Hospital de Clínicas General San Martín; ArgentinaFil: Gomez, G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Heller, Paula Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Goette, Nora Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaFil: Marta, Rosana Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Médicas. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Médicas; ArgentinaXIV Congreso Argentino de Hemostasia y Trombosis y V Curso Educacional de la ISTHbuenos airesArgentinaSociedad Argentina de Hemostasia y Trombosi