N011 Culture et délivrance au niveau du tissu cardiaque de cardiomyocytes issus de cellules souches embryonnaires humaines au moyen de matrices tridimensionelles poreuses à base de polysaccharides

Un intérêt particulier a été porté ces dernières années à la thérapie cellulaire réparatrice cardiaque. Les cellules souches embryonnaires humaines (hES) sont une source prouvée de cardiomyocytes et les premières données in vivo suggèrent leurs capacités fonctionnelles à type d’effet pacemaker ou réparatrices d’infarctus du myocarde. Nous avons étudié un mode de délivrance des cellules hES dans le tissu cardiaque basé sur une matrice 3D servant de support à la fois pour la culture des cellules et pour leur implantation au contact du myocarde.Des matrices poreuses de polysaccharides (pullulane et dextrane) ont été préparées par réticulation chimique permettant de réaliser des films avec des pores de 100 à 200 microns. Les matrices ont été recouvertes de différentes protéines; les cellules hES indifférenciées ont été cultivées sur fibroblastes murins, en milieu supplémenté avec du sérum knock-out et du FGF2. Dans une première partie in vitro, nous avons mis en évidence par q-RT-PCR, observation microscopique et imagerie confocale, la différenciation en cardiomyocytes de cellules hES directement cultivées dans les matrices en présence d’un milieu inducteur de différentiation; les matrices permettaient aussi la culture, l’expansion et la survie à long terme de parties battantes obtenues à partir de corps embryoïdes issus d’hES et isolées manuellement. Nous avons ensuite étudié le devenir des cellules hES dans un modèle de lésions cardiaques par dépôt de films poreux cellularisés sur les cœurs infarcis de souris NOD SCID. L’identification est confirmée pour les cardiomyocytes issus d’ES d’une lignée de cellules hES H9 GFP+ ainsi que d’une lignée de cellules hES dans laquelle l’expression de la GFP est sous contrôle d’un promoteur spécifique du tissu cardiaque, Nkx2.5. Nous avons ainsi mis en évidence la migration des cellules ES à différents stades de différenciation à partir des matrices 3D vers les souris NOD SCID ainsi que leur différenciation en cardiomyocytes. Les données de PCR quantitative sur la base du transgène GFP mettent en évidence une meilleure survie des ES délivrées par l’intermédiaire des matrices 3D en comparaison avec une administration directe. Une étude fonctionnelle comparative est en cours

Structural insights into Legionella RidL-Vps29 retromer subunit interaction reveal displacement of the regulator TBC1D5

Legionella pneumophila can cause Legionnaires’ disease and replicates intracellularly in a distinct Legionella-containing vacuole (LCV). LCV formation is a complex process that involves a plethora of type IV-secreted effector proteins. The effector RidL binds the Vps29 retromer subunit, blocks retrograde vesicle trafficking, and promotes intracellular bacterial replication. Here, we reveal that the 29-kDa N-terminal domain of RidL (RidL2–281) adopts a “foot-like” fold comprising a protruding β-hairpin at its “heel”. The deletion of the β-hairpin, the exchange to Glu of Ile170 in the β-hairpin, or Leu152 in Vps29 abolishes the interaction in eukaryotic cells and in vitro. RidL2–281 or RidL displace the Rab7 GTPase-activating protein (GAP) TBC1D5 from the retromer and LCVs, respectively, and TBC1D5 promotes the intracellular growth of L. pneumophila. Thus, the hydrophobic β-hairpin of RidL is critical for binding of the L. pneumophila effector to the Vps29 retromer subunit and displacement of the regulator TBC1D5

PHIL Accelerator at LAL - Diagnostic status

http://accelconf.web.cern.ch/AccelConf/BIW2010/papers/tupsm100.pdfInternational audienceThe "Photo-Injector at LAL" (PHIL : http://phil.lal.in2p3.fr/) is a new electron beam accelerator at LAL. This accelerator is dedicated to test and characterise electron photo-guns and high-frequency structures for future accelerator projects (like the next generation lepton colliders, CLIC, ILC). This machine has been designed to produce low energy (E<10 MeV), small emittance (epsilon < 10 pi.mm.mrad), high current (charge 2 nC/bunch) electrons bunch at low repetition frequency (frep<10Hz) [1]. The first beam has been obtained on the 4th of November 2009. This paper will describe the current status and the futures developments of the diagnostics devices on this machine

Low Energy Beam Measurements Using PHIL Accelerator at LAL, Comparison with PARMELA Simulations

http://accelconf.web.cern.ch/AccelConf/PAC2011/papers/wep210.pdfInternational audiencePHIL ("PHo­to-In­jec­tor at LAL") is a new elec­tron beam ac­cel­er­a­tor at LAL. This ac­cel­er­a­tor is ded­i­cat­ed to test and char­ac­ter­ize elec­tron RF-guns and to de­liv­er elec­tron beam to users. This ma­chine has been de­signed to pro­duce and char­ac­terise low en­er­gy (E<10 MeV), small emit­tance (e<10 p.​mm.​mrad), high bril­liance elec­trons bunch at low rep­e­ti­tion fre­quen­cy (n<10Hz). The first beam has been ob­tained on the 4th of Novem­ber 2009. The cur­rent RF-gun test­ed on PHIL is the Al­phaX gun, a 2.5 cell S-band cav­i­ty de­signed by LAL for the plas­ma ac­cel­er­a­tor stud­ies per­formed at the Strath­clyde uni­ver­si­ty. This paper will pre­sent the first Al­phaX RF-gun char­ac­ter­i­za­tions per­formed at LAL on PHIL ac­cel­er­a­tor, and will show com­par­isons be­tween mea­sure­ments and PARMELA sim­u­la­tions

Combined transcriptomic-(1)H NMR metabonomic study reveals yhat monoethylhexyl phthalate stimulates adipogenesis and glyceroneogenesis in human adipocytes

Adipose tissue is a major storage site for lipophilic environmental contaminants. The environmental metabolic disruptor hypothesis postulates that some pollutants can promote obesity or metabolic disorders by activating nuclear receptors involved in the control of energetic homeostasis. In this context, monoethylhexyl phthalate (MEHP) is of particular concern since it was shown to activate the peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) in 3T3-L1 murine preadipocytes. In the present work, we used an untargeted, combined transcriptomic-(1)H NMR-based metabonomic approach to describe the overall effect of MEHP on primary cultures of human subcutaneous adipocytes differentiated in vitro. MEHP stimulated rapidly and selectively the expression of genes involved in glyceroneogenesis, enhanced the expression of the cytosolic phosphoenolpyruvate carboxykinase, and reduced fatty acid release. These results demonstrate that MEHP increased glyceroneogenesis and fatty acid reesterification in human adipocytes. A longer treatment with MEHP induced the expression of genes involved in triglycerides uptake, synthesis, and storage; decreased intracellular lactate, glutamine, and other amino acids; increased aspartate and NAD, and resulted in a global increase in triglycerides. Altogether, these results indicate that MEHP promoted the differentiation of human preadipocytes to adipocytes. These mechanisms might contribute to the suspected obesogenic effect of MEHP