Cutaneous lupus erythematosus : histological, immunohistochemical and direct immunofluorescence analysis

Orientadores: Maria Letícia Cintra, Maria Heloísa de Souza Lima BlottaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: O lúpus eritematoso cutâneo (LEC) é classificado em agudo, subagudo, crônico e túmido. A sequência de eventos que deflagram a autoimunidade é pouco entendida. Neste trabalho foram estudados os aspectos histológicos, de imunofluorescência direta (IFD) e imuno-histoquímicos no LEC discoide (subtipo mais comum da forma crônica), subagudo e túmido, relacionando-os com a presença ou não de lúpus eritematoso sistêmico (LES) concomitante, visando compreender melhor a imunopatogênese destes subtipos e suas diferenças clínico-histopatológicas. Amostras cutâneas com LEC (discoide=21; subagudo=17; túmido=21) foram analisadas às colorações convencionais e imuno-histoquímicas (CD4, CD8, CD25, CD56, granzima A, granzima B, granulisina, perforina, FOXP3, ICAM-1, IL-1?, IL-6, IL-10, IL-17, IL-18 e TNF-?), com o auxílio do programa Image J®. Os achados clínicos e de IFD foram obtidos dos prontuários. A densidade de células CD8+ foi menor que a das CD4+ em todos os espécimes, e menor no grupo subagudo em relação aos outros dois grupos, bem como nas amostras de pacientes com LEC e LES associado (LEC+/LES+). A densidade de células CD8+ era maior que a das células CD56+ em todos os grupos estudados. Nos três subtipos, as células inflamatórias expressavam granzima A e B, perforina e granulisina e a densidade não era diferente entre eles. Apenas no grupo túmido houve associação positiva entre o número das células marcadas pelos diferentes grânulos e também entre este e a densidade de células CD8+, sugerindo que o fenômeno citotóxico mediado por grânulos, neste grupo, seja promovido por linfócitos CD8+. Como o LEC túmido não cursa com dermatite de interface/apoptose, provavelmente, neste subtipo, os grânulos atuem de outra forma, como sustentando a inflamação. O número de células CD25+ e FOXP3+ foi inferior a 10% nos três subtipos de LEC, sinalizando para um distúrbio imunorregulatório periférico. A maior diversidade na imunomarcação das citocinas ocorreu no subtipo subagudo. A imunoexpressão de IL-10 e IL-6 foi semelhante entre os subtipos. No LEC subagudo, a expressão dérmica da IL-1?, IL-18 e TNF-? foi maior; a da IL-17 foi maior na epiderme e menor no interstício dérmico. Outrossim, as amostras de LEC+/LES+ apresentaram maior expressão de IL-1? nos ceratinócitos, maior número de células inflamatórias ICAM-1+ e menor expressão de IL-17 no interstício, quando comparadas às de pacientes sem LES. À IFD, nos três subtipos, encontraram-se depósitos granulares, na zona da membrana basal, de IgG, predominantemente, seguindo-se de IgM, C¿3, IgA e C1q, inclusive nos espécimes de LEC túmido com resultado positivo. Nas amostras de LEC subagudo, o C¿3 foi o mais frequente. Estes resultados acrescentam informação sobre a patogênese do LEC túmido, entidade ainda pouco estudada. A semelhança na imunoexpressão dos biomarcadores, nas amostras de LEC subagudo e LEC+/LES+, aponta para uma modificação do microambiente inflamatório quando há acometimento sistêmico. Adicionalmente, o conjunto dos achados destaca a forma subaguda pela biomarcação distinta da discoide e da túmida, e enfatiza a semelhança destes dois subtipos, no que concerne à expressão dos imunomarcadores desta pesquisa. O estudo continuado sobre mecanismos imunopatogênicos nos subtipos de LEC poderá acrescentar elementos às diferenças que os caracteriza, otimizando o tratamentoAbstract: Cutaneous Lupus erythematosus (CLE) is classified in acute, subacute and tumidus. The mechanisms for the aberrant immunology response is not still elucidated. In this research we studied the histopathological, direct immunofluorescence (DIF) and immunohistochemical aspects of discoid CLE (the most common subtype of the chronic form of CLE), subacute and tumidus CLE, correlating them with the concurrent diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE), in order to comprehend the immunopathogenesis of the disease subtypes and the clinical and histopathological differences between them. Skin specimens with CLE (discoid = 21, subacute =17, tumidus =21) were analyzed through conventional and immunohistochemistry staining (CD4, CD8, CD25, CD56, granzyme A, granzyme B, granulysin, perforin, FOXP3, ICAM-1, IL-1?, IL-6, IL-10, IL-17, IL-18 and TNF-?), using Image J® program analysis. Clinical and DIF data were obtained from the medical charts. The density of CD8+ cells were lower than CD4+ cells in all skin specimens, and lower in subacute group when compared with the other two groups. The same occurred with patients with CLE and SLE (CLE+/SLE+). The density of CD8+ cells was higher than CD56+ cells in all the groups studied. The three subtypes of CLE expressed granzyme A, B, granulysin and perforin, and the density was not different between them. The tumid group showed positive association between the number of cells staining for each granule and also between these granules and the density of CD8+ cells, suggesting that the granule-mediated cytotoxicity, in this group, is promoted by CD8+ lymphocytes. Because CLE tumidus does not present with interface dermatitis/apoptosis, the granules, in this subtype, might have other function, like maintaining inflammation. The number of CD25+ and FOXP3+ cells was inferior to 10% in the three subtypes of CLE, signalizing to a defect in peripheral immunoregulatory mechanisms. The major diversity of cytokine expression occurred with subacute subtype. The immunoexpression of IL-10 and IL-6 was similar to the other subtypes. Subacute CLE showed more expression of L-1?, IL-18 and TNF-?. IL-17 was more expressed in the epidermis and less in the dermal interstitium. CLE+/SLE+ skin specimens showed higher expression of IL-1? in the keratinocytes, more density of ICAM-1+ cells and less expression of IL-17 in the dermal interstitium, when compared with patients without SLE. The DIF findings were, in the 3 subtypes, granular deposits at the basement membrane zone, mostly IgG, followed by IgM, C3, IgA and C1q, even in specimens of CLE tumidus with positive DIF. In subacute skin specimens, C¿3 were the most frequent. These results improve the knowledge around CLE tumidus pathogenesis, an entity still poorly studied. The similar pattern of biomarkers staining between subacute patients and CLE+/SLE+ patients might indicate systemic factors influencing the skin inflammatory microenvironment. Additionally, the findings of this study distinguishes the subacute form from discoid and tumidus subtypes, and emphasizes the similarities between these two entities, concerning to the biomarkers expression found in this study. The continued progress in understanding CLE subtypes immunopathogenesis will clarify the reason for different aspects of the disease and target the correct treatmentDoutoradoAnatomia PatologicaDoutora em Ciências Médicas2011/50037-2122906/2013-6FAPESPCNP

Use of the ML-Flow test as a tool in classifying and treating leprosy

FUNDAMENTOS: O tratamento da hanseníase é definido pela classificação de pacientes em paucibacilares (PB) e multibacilares (MB). A OMS (Organização Mundial de Saúde) classifica os doentes de acordo com o número de lesões, mas Ridley-Jopling (R&J) utiliza também exames complementares, porém é de difícil utilização fora dos serviços de referência. Em 2003 foi desenvolvido um teste denominado ML-Flow, uma alternativa à sorologia por ELISA para auxiliar na classificação de pacientes em PB e MB e auxiliar na decisão terapêutica. OBJETIVOS: Observar a concordância entre o teste de ML-Flow e baciloscopia de linfa, exame já consagrado para detecção de MB. Analisar a utilidade do teste de ML-Flow em campo. MATERIAL E MÉTODOS: Estudo retrospectivo avaliando prontuário de 55 pacientes virgens de tratamento, diagnosticados como PB ou MB por R&J. Submetidos à baciloscopia e ao teste de ML-Flow. RESULTADOS: Nos MB, a baciloscopia foi positiva em 80% dos casos, o ML-flow foi positivo em 82,5%. Entre os PB, o ML-Flow foi positivo em 37,5% e a baciloscopia do esfregaço foi negativa em 100% dos casos. A concordância entre os resultados da baciloscopia do esfregaço e ML-Flow foi de 87,5%, kappa=0,59, p<0,001. CONCLUSÃO: Nenhum teste laboratorial é 100% sensível e específico para a correta classificação de todas as formas de hanseníase. O ML-Flow é um teste rápido, de fácil manuseio em campo, menos invasivo que a baciloscopia podendo ser útil para auxiliar na decisão terapêutica em locais de difícil acesso a serviços de referência.BACKGROUND: The treatment of leprosy is defined by the classification of patients as paucibacillary (PB) or multibacillary (MB). The WHO (World Health Organization) classifies patients according to the number of lesions, but Ridley-Jopling (R & J) also uses complementary exams, which are difficult to use outside reference services. In 2003, a test called ML-Flow, an alternative to Elisa serology, was developed to help classify patients as PB or MB and decide about their treatment. OBJECTIVES: To assess the agreement between the ML-Flow test and slit skin smears, already largely used for MB detection, and to observe the efficacy of the ML-Flow test in the field. MATERIAL AND METHODS: A retrospective study evaluating the medical records of 55 patients who had not undergone previous treatment, diagnosed as PB or MB according to R & J and subjected to slit skin smears and the ML- Flow test. RESULTS: In MB patients, slit skin smears were positive in 80% of the cases, the ML-flow was positive in 82.5%. Among PB patients, the ML-Flow was positive in 37.5% and slit skin smears were negative in 100% of the cases. The agreement between skin smear and ML-Flow results was 87.5%, with a kappa value of 0.59, p <0.001. CONCLUSION: No laboratory test is 100% sensitive and specific for the correct classification of all forms of leprosy. The ML-Flow test is faster, easier to use, and less invasive than slit skin smears and therefore may be useful when making therapeutic decisions in areas of difficult access to reference services

Angiokeratoma Of The Vulva.

Angiokeratomas are benign tumors characterized by ectasia of blood vessels in the papillary dermis associated with acanthosis and hyperkeratosis of the epidermis. Dermatological examination of angiokeratomas of Fordyce is characterized by papular keratotic lesions of erythematous-violet color. They are more common in the scrotum, and vulvar involvement is rarely reported. Histopathology is particularly important to distinguish them from other benign and malignant tumors. The article reports the case of a middle-aged black woman with a history of chronic constipation, varicose veins of the lower limbs and cesarean section performed 20 years ago who had had multiple vulvar angiokeratomas for three months.86333-

Avaliação do grau de incapacidade dos pacientes com diagnóstico de hanseníase em serviço de dermatologia do estado de São Paulo Evaluation of the degree of incapacity of patients with a diagnosis of leprosy at a dermatology service in the state of São Paulo

INTRODUÇÃO: Hanseníase é doença infecciosa crônica que pode levar a incapacidade física. MÉTODOS: Avaliou-se 167 prontuários de pacientes com diagnóstico de hanseníase, no período de 2003 a 2007, para investigação do grau de incapacidade no momento do diagnóstico. RESULTADOS: A maioria (60%) dos pacientes apresentava incapacidade física no momento do diagnóstico; 34% grau I e 26% grau II. Observou-se que há relação direta entre a duração da doença e o grau de incapacidade. CONCLUSÕES: O diagnóstico da hanseníase ainda é tardio e isto pode contribuir para a manutenção da endemia.IINTRODUCTION: Leprosy is a chronic infectious disease that can lead to physical incapacity. METHODS: The medical records of 167 patients diagnosed with leprosy between 2003 and 2007 were reviewed. RESULTS: Most of the patients (60%) presented physical incapacity at the time of diagnosis: 34% with grade I and 26% with grade II. It was observed that the degree of incapacity had a direct correlation with the duration of the disease. CONCLUSIONS: Leprosy is still diagnosed late, which may contribute towards maintaining this endemic disease