Orientadores: Maria Letícia Cintra, Maria Heloísa de Souza Lima BlottaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: O lúpus eritematoso cutâneo (LEC) é classificado em agudo, subagudo, crônico e túmido. A sequência de eventos que deflagram a autoimunidade é pouco entendida. Neste trabalho foram estudados os aspectos histológicos, de imunofluorescência direta (IFD) e imuno-histoquímicos no LEC discoide (subtipo mais comum da forma crônica), subagudo e túmido, relacionando-os com a presença ou não de lúpus eritematoso sistêmico (LES) concomitante, visando compreender melhor a imunopatogênese destes subtipos e suas diferenças clínico-histopatológicas. Amostras cutâneas com LEC (discoide=21; subagudo=17; túmido=21) foram analisadas às colorações convencionais e imuno-histoquímicas (CD4, CD8, CD25, CD56, granzima A, granzima B, granulisina, perforina, FOXP3, ICAM-1, IL-1?, IL-6, IL-10, IL-17, IL-18 e TNF-?), com o auxílio do programa Image J®. Os achados clínicos e de IFD foram obtidos dos prontuários. A densidade de células CD8+ foi menor que a das CD4+ em todos os espécimes, e menor no grupo subagudo em relação aos outros dois grupos, bem como nas amostras de pacientes com LEC e LES associado (LEC+/LES+). A densidade de células CD8+ era maior que a das células CD56+ em todos os grupos estudados. Nos três subtipos, as células inflamatórias expressavam granzima A e B, perforina e granulisina e a densidade não era diferente entre eles. Apenas no grupo túmido houve associação positiva entre o número das células marcadas pelos diferentes grânulos e também entre este e a densidade de células CD8+, sugerindo que o fenômeno citotóxico mediado por grânulos, neste grupo, seja promovido por linfócitos CD8+. Como o LEC túmido não cursa com dermatite de interface/apoptose, provavelmente, neste subtipo, os grânulos atuem de outra forma, como sustentando a inflamação. O número de células CD25+ e FOXP3+ foi inferior a 10% nos três subtipos de LEC, sinalizando para um distúrbio imunorregulatório periférico. A maior diversidade na imunomarcação das citocinas ocorreu no subtipo subagudo. A imunoexpressão de IL-10 e IL-6 foi semelhante entre os subtipos. No LEC subagudo, a expressão dérmica da IL-1?, IL-18 e TNF-? foi maior; a da IL-17 foi maior na epiderme e menor no interstício dérmico. Outrossim, as amostras de LEC+/LES+ apresentaram maior expressão de IL-1? nos ceratinócitos, maior número de células inflamatórias ICAM-1+ e menor expressão de IL-17 no interstício, quando comparadas às de pacientes sem LES. À IFD, nos três subtipos, encontraram-se depósitos granulares, na zona da membrana basal, de IgG, predominantemente, seguindo-se de IgM, C¿3, IgA e C1q, inclusive nos espécimes de LEC túmido com resultado positivo. Nas amostras de LEC subagudo, o C¿3 foi o mais frequente. Estes resultados acrescentam informação sobre a patogênese do LEC túmido, entidade ainda pouco estudada. A semelhança na imunoexpressão dos biomarcadores, nas amostras de LEC subagudo e LEC+/LES+, aponta para uma modificação do microambiente inflamatório quando há acometimento sistêmico. Adicionalmente, o conjunto dos achados destaca a forma subaguda pela biomarcação distinta da discoide e da túmida, e enfatiza a semelhança destes dois subtipos, no que concerne à expressão dos imunomarcadores desta pesquisa. O estudo continuado sobre mecanismos imunopatogênicos nos subtipos de LEC poderá acrescentar elementos às diferenças que os caracteriza, otimizando o tratamentoAbstract: Cutaneous Lupus erythematosus (CLE) is classified in acute, subacute and tumidus. The mechanisms for the aberrant immunology response is not still elucidated. In this research we studied the histopathological, direct immunofluorescence (DIF) and immunohistochemical aspects of discoid CLE (the most common subtype of the chronic form of CLE), subacute and tumidus CLE, correlating them with the concurrent diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE), in order to comprehend the immunopathogenesis of the disease subtypes and the clinical and histopathological differences between them. Skin specimens with CLE (discoid = 21, subacute =17, tumidus =21) were analyzed through conventional and immunohistochemistry staining (CD4, CD8, CD25, CD56, granzyme A, granzyme B, granulysin, perforin, FOXP3, ICAM-1, IL-1?, IL-6, IL-10, IL-17, IL-18 and TNF-?), using Image J® program analysis. Clinical and DIF data were obtained from the medical charts. The density of CD8+ cells were lower than CD4+ cells in all skin specimens, and lower in subacute group when compared with the other two groups. The same occurred with patients with CLE and SLE (CLE+/SLE+). The density of CD8+ cells was higher than CD56+ cells in all the groups studied. The three subtypes of CLE expressed granzyme A, B, granulysin and perforin, and the density was not different between them. The tumid group showed positive association between the number of cells staining for each granule and also between these granules and the density of CD8+ cells, suggesting that the granule-mediated cytotoxicity, in this group, is promoted by CD8+ lymphocytes. Because CLE tumidus does not present with interface dermatitis/apoptosis, the granules, in this subtype, might have other function, like maintaining inflammation. The number of CD25+ and FOXP3+ cells was inferior to 10% in the three subtypes of CLE, signalizing to a defect in peripheral immunoregulatory mechanisms. The major diversity of cytokine expression occurred with subacute subtype. The immunoexpression of IL-10 and IL-6 was similar to the other subtypes. Subacute CLE showed more expression of L-1?, IL-18 and TNF-?. IL-17 was more expressed in the epidermis and less in the dermal interstitium. CLE+/SLE+ skin specimens showed higher expression of IL-1? in the keratinocytes, more density of ICAM-1+ cells and less expression of IL-17 in the dermal interstitium, when compared with patients without SLE. The DIF findings were, in the 3 subtypes, granular deposits at the basement membrane zone, mostly IgG, followed by IgM, C3, IgA and C1q, even in specimens of CLE tumidus with positive DIF. In subacute skin specimens, C¿3 were the most frequent. These results improve the knowledge around CLE tumidus pathogenesis, an entity still poorly studied. The similar pattern of biomarkers staining between subacute patients and CLE+/SLE+ patients might indicate systemic factors influencing the skin inflammatory microenvironment. Additionally, the findings of this study distinguishes the subacute form from discoid and tumidus subtypes, and emphasizes the similarities between these two entities, concerning to the biomarkers expression found in this study. The continued progress in understanding CLE subtypes immunopathogenesis will clarify the reason for different aspects of the disease and target the correct treatmentDoutoradoAnatomia PatologicaDoutora em Ciências Médicas2011/50037-2122906/2013-6FAPESPCNP
