Исследование протективных свойств рекомбинантного комплекса белка F наружной мембраны и анатоксина Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa induces the complications after burns, injuries, surgical interventions and appears to be one of the main causative agents of nosocomial infections. This pathogen has the high resistance to the antibacterial preparations, therefore the immunoprophylaxis is considered as one of the major approaches to reduce Pseudomonas infection. Objective: The aim of our investigation is to study the protective properties of the recombinant complex of the outer membrane protein F (OprF) and a non-toxic variant of the exotoxin A (toxoid) against Pseudomonas infection. Methods: The recombinant proteins which contained the additional histidine residues were synthesized into Escherichia coli with isopropyl-βD-thyogalactopyranoside (IPTG). The recombinant proteins were purified by affinity chromatography on Ni-Sepharose. The preparations of recombinant proteins were injected intraperitoneally into the mice. Aluminum hydroxide was used as an adjuvant. For an experimental infection in mice, animals were challenged intraperitoneally by a live virulent culture of P. aeruginosa (PA-103 strain). Results: The best protective effect for the complex containing 25 μg OprF and 50 μg toxoid was identified when we used the double immunization of mice (Index of efficiency of the protective properties in this case was 4.0). Indexes of efficiency of separated recombinant proteins which were injected twice in the same doses were 2.0 for OprF и 2.3 for toxoid. The triple immunization of animals was inefficient for separated recombinant proteins in the same doses. The injection of doses which were lowered twice (12.5 μg for OprF and 25 μg for toxoid) resulted in increased survival of mice immunized by individual proteins (indexes of efficiency: 3 for OprF and и 3,5 for toxoid). However when we administered to the complex of proteins with the same doses Index of efficiency was 2.8. Conclusion: It was shown that the maximum protective effect in a short time is achieved by the combination of double immunization and the mixture of the recombinant proteins OprF and the 25 and 50 μg doses of recombinant toxoid . Pseudomonas aeruginosa вызывает осложнения после ожогов, травм и хирургических вмешательств, являясь одной из основных причин нозокомиальных инфекций. Этот патоген обладает высокой резистентностью к большинству антибактериальных средств, поэтому иммунопрофилактика рассматриваться как один из приоритетных подходов для борьбы с синегнойной инфекцией. Цель исследования: Изучить защитные свойства рекомбинантного комплекса белка F наружной мембраны (OprF) и атоксической формы экзотоксина А (анатоксина) от экспериментальной синегнойной инфекции. Методы: Рекомбинантные белки, содержащие дополнительную шести гистидиновую последовательность, синтезировали в клетках Escherichia coli c помощью изопропил-b-d-тиогалактопиранозида (ИПТГ) и очищали методом аффинной хроматографии с использованием Ni-сефарозы. Препаратами рекомбинантных белков внутрибрюшинно иммунизировали мышей. В качестве адъюванта использовали гидроксид алюминия. Экспериментальное заражение осуществляли внутрибрюшинным введением живой вирулентной культуры P. aeruginosa штамма РА103. Результаты: При двукратной иммунизации мышей комплексом, содержащим 25 мкг OprF и 50 мкг анатоксина, выявлен наилучший протективный эффект (индекс эффективности защитных свойств в этом случае составил 4,0). Индексы эффективности для рекомбинантных белков, вводимых двукратно в тех же дозах по отдельности, соответствовали 2,0 для OprF и 2,3 для анатоксина и не увеличивались после трехкратной иммунизации животных. Уменьшенные в два раза доз (12,5 мкг OprF и 25 мкг анатоксина) при трехкратном введении способствовало увеличению выживаемости мышей иммунизированных отдельными белками (индексы эффективности: 3 для OprF и 3,5 для анатоксина), однако при введении комплекса белков в тех же дозах индекс эффективности не увеличивался и составил 2,8. Заключение: Показано, что максимальный протективный эффект формируется в короткие сроки при использовании комплексной иммунизации двумя рекомбинантными белками OprF и анатоксином в дозах 25 и 50 мкг

Мероприятия по обслуживанию государственного долга Республики Беларусь

В статье раскрывается понятие государственного долга. Статья посвящена исследованию способов управления государственным долгом и мерам его регулирования. Исследованы методы снижения долговой нагрузки

The use of flour from germinated buckwheat in bread recipes

The results of the study of technological properties, chemical composition of buckwheat varieties of the Republic of Bashkortostan, as well as the effect of flour from sprouted buckwheat grain on the quality of wheat bread are presented. According to the nutritional value, in order to obtain buckwheat flour in order to include it in the bread recipe, the Inzer buckwheat variety was selected. The parameters of soaking and germination of buckwheat grain of this variety are optimized and it is shown that due to germination, the physico-chemical parameters of flour and its antioxidant activity are improved. Thus, the expediency of introducing flour from sprouted buckwheat grain into the recipe of wheat bread is proved. The optimal content of flour from sprouted buckwheat grain in the composition of a composite mixture with wheat flour of grade I, which amounted to 10%, providing an improvement in the organoleptic and physico-chemical parameters of bread, was established

The use of flour from germinated buckwheat in bread recipes

The results of the study of technological properties, chemical composition of buckwheat varieties of the Republic of Bashkortostan, as well as the effect of flour from sprouted buckwheat grain on the quality of wheat bread are presented. According to the nutritional value, in order to obtain buckwheat flour in order to include it in the bread recipe, the Inzer buckwheat variety was selected. The parameters of soaking and germination of buckwheat grain of this variety are optimized and it is shown that due to germination, the physico-chemical parameters of flour and its antioxidant activity are improved. Thus, the expediency of introducing flour from sprouted buckwheat grain into the recipe of wheat bread is proved. The optimal content of flour from sprouted buckwheat grain in the composition of a composite mixture with wheat flour of grade I, which amounted to 10%, providing an improvement in the organoleptic and physico-chemical parameters of bread, was established

Organic matter in the Saf'yanovka copper massive sulfide deposit (Middle Urals)

The influence of tectonic processes on the transformation of organic matter in volcanic and volcano-sedimentary rocks within the East Ural uplift in the southern Rezh structural-formational zone was studied. The basic features and temperature ranges of organic matter (OM) and ore-bearing rock metamorphic transformations in the Saf'yanovka deposit were established using the methods of thermal analysis, electron paramagnetic resonance, and complex geochemical studies, including GC-MS. The geochemical study of organic matter in the ore-bearing rocks of the Saf'yanovka deposit confirmed its relation to the sapropelic type and to shallow marine conditions of formation. The syngenetic nature of the OM and ore-bearing rocks was established on the basis of the geochemical and physicochemical analyses. The transformation stage of OM in the Saf'yanovka deposit indicates its rapid, but incomplete maturation in the evolution of hydrothermal fluid

Антибиотикорезистентность культур Enterococcus spp., выделенных от промышленной птицы в 2013–2016 гг. в хозяйствах Российской Федерации, и детекция у них генов резистентности к ванкомицину

Rationale: Enterococci are the leading cause of a number of nosocomial and community-acquired human diseases. In the last decade, these pathogens are becoming resistant to antibacterials, including vancomycin. Multidrug-resistant enterococci have been also isolated from agricultural animals in many countries worldwide, which raises concern of scientists because of possible horizontal transfer of resistance genes. Aim: To assess antibacterial sensitivity of Enterococcus spp. isolates collected from the poultry in the Russian Federation from 2013 to 2016, and to identify vancomycin-resistance genes in their genomes. Materials and methods: Eighty-seven enterococci isolates belonging to E.  faecalis (n = 47, 54%), E.  faecium (n = 25, 28.7%) and other species (n = 15, 17.2%) were collected from clinical samples of 297 heads of poultry (liver, lungs, heart, spleen, contents of the nasal and sinus cavities) from 17  poultry farms of the Northwest, Central, Volga, Ural and Southern Federal districts of the Russian Federation. Sensitivity of enterococci to antibacterials was determined by disk-diffusion and broth microdilution methods. Vancomycin resistance genes van was detected by polymerase chain reaction with specific primers. Results: Most enterococci isolates were resistant to erythromycin (74/87, 85.1%), gentamicin (70/87, 80.5%), ceftriaxone (61/87, 70.1%), ciprofloxacin (56/87, 64.4%), tetracycline (57/87, 65.5%), and rifampicin (48/87, 55.2%), fewer ones to trimethoprim (38/87, 43.7%), ampicillin (28/87, 32.2%), linezolid (15/87, 17.2%) and chloramphenicol (5/87, 5.7%). The vanC type genes (vanC1 and vanC2/3) were identified in 10  isolates. Vancomycin minimal inhibitory concentrations for these isolates were 2 to 8  mg/L. E. faecium with vanC1 gene was isolated from poultry probably for the first time ever. Conclusion: Commercial poultry in the Russian poultry farms is an important reservoir and source of antibiotic-resistant enterococci populations, including enterococci carrying vanC1 and vanC2/3 vancomycin resistance genes. Актуальность. Энтерококки – ведущая причина ряда внутрибольничных и  внебольничных заболеваний человека. В  последнее десятилетие эти патогены приобретают устойчивость к  антибактериальным препаратам, в  том числе к  ванкомицину. Энтерококки с  множественной лекарственной устойчивостью выделяются также от сельскохозяйственных животных во многих странах мира, что вызывает настороженность ученых из-за возможного горизонтального переноса генетических детерминант резистентности. Цель  – определить чувствительность к  антибактериальным препаратам изолятов Enterococcus spp., выделенных от промышленной птицы в  Российской Федерации в  2013–2016  гг., детектировать в  их геномах гены устойчивости к  ванкомицину. Материал и  методы. Восемьдесят семь изолятов энтерококков, принадлежащих к  E.  faecalis (n = 47, 54%), E.  faecium (n = 25, 28,7%) и  другим видам (n = 15, 17,2%), выделены из клинических образцов 297  голов промышленной птицы (печень, легкие, сердце, селезенка, содержимое пазух носовых синусов) из 17  птицеводческих хозяйств Северо-Западного, Центрального, Приволжского, Уральского и  Южного федеральных округов Российской Федерации. Чувствительность энтерококков к антимикробным препаратам определяли диско-диффузионным методом и  методом микроразведений в  бульоне. Гены устойчивости к  ванкомицину (van) выявляли методом полимеразной цепной реакции со специфичными праймерами. Результаты. Большинство изолятов энтерококков были устойчивы к  эритромицину (74  из 87, 85,1%), гентамицину (70 из 87, 80,5%), цефтриаксону (61 из 87, 70,1%), ципрофлоксацину (56 из 87, 64,4%), тетрациклину (57 из 87, 65,5%) и рифампицину (48 из 87, 55,2%), а также к триметоприму (38 из 87, 43,7%), ампициллину (28 из 87, 32,2%), линезолиду (15  из 87, 17,2%) и  хлорамфениколу (5 из 87, 5,7%). У 10 изолятов были обнаружены гены типа vanC (vanC1 и vanC2/3). Минимальные подавляющие концентрации ванкомицина для этих изолятов составили 2–8 мг/л. Выделение от птицы и  идентификация изолята E.  faecium с  геном vanC1, по всей вероятности, является первым в  мировой практике. Заключение. Промышленная птица птицефабрик Российской Федерации – важный резервуар и источник антибиотикорезистентных популяций энтерококков, в том числе энтерококков с генами ванкомицинрезистентности vanC1 и vanC2/3.