Fast Adaptation in Mouse Olfactory Sensory Neurons Does Not Require the Activity of Phosphodiesterase

Vertebrate olfactory sensory neurons rapidly adapt to repetitive odorant stimuli. Previous studies have shown that the principal molecular mechanisms for odorant adaptation take place after the odorant-induced production of cAMP, and that one important mechanism is the negative feedback modulation by Ca2+-calmodulin (Ca2+-CaM) of the cyclic nucleotide-gated (CNG) channel. However, the physiological role of the Ca2+-dependent activity of phosphodiesterase (PDE) in adaptation has not been investigated yet. We used the whole-cell voltage-clamp technique to record currents in mouse olfactory sensory neurons elicited by photorelease of 8-Br-cAMP, an analogue of cAMP commonly used as a hydrolysis-resistant compound and known to be a potent agonist of the olfactory CNG channel. We measured currents in response to repetitive photoreleases of cAMP or of 8-Br-cAMP and we observed similar adaptation in response to the second stimulus. Control experiments were conducted in the presence of the PDE inhibitor IBMX, confirming that an increase in PDE activity was not involved in the response decrease. Since the total current activated by 8-Br-cAMP, as well as that physiologically induced by odorants, is composed not only of current carried by Na+ and Ca2+ through CNG channels, but also by a Ca2+-activated Cl− current, we performed control experiments in which the reversal potential of Cl− was set, by ion substitution, at the same value of the holding potential, −50 mV. Adaptation was measured also in these conditions of diminished Ca2+-activated Cl− current. Furthermore, by producing repetitive increases of ciliary's Ca2+ with flash photolysis of caged Ca2+, we showed that Ca2+-activated Cl− channels do not adapt and that there is no Cl− depletion in the cilia. All together, these results indicate that the activity of ciliary PDE is not required for fast adaptation to repetitive stimuli in mouse olfactory sensory neurons

The human two-pore channel 1 is modulated by cytosolic and luminal calcium

Two-pore channels (TPC) are intracellular endo-lysosomal proteins with only recently emerging roles in organellar signalling and involvement in severe human diseases. Here, we investigated the functional properties of human TPC1 expressed in TPC-free vacuoles from Arabidopsis thaliana cells. Large (20 pA/pF) TPC1 currents were elicited by cytosolic addition of the phosphoinositide phosphatidylinositol-(3,5)-bisphosphate (PI(3,5)P2) with an apparent binding constant of 3c15 nM. The channel is voltage-dependent, activating at positive potentials with single exponential kinetics and currents are Na+selective, with measurable but low permeability to Ca2+. Cytosolic Ca2+modulated hTPC1 in dual way: low \u3bcM cytosolic Ca2+increased activity by shifting the open probability towards negative voltages and by accelerating the time course of activation. This mechanism was well-described by an allosteric model. Higher levels of cytosolic Ca2+induced a voltage-dependent decrease of the currents compatible with Ca2+binding in the permeation pore. Conversely, an increase in luminal Ca2+decreased hTPC1 activity. Our data point to a process in which Ca2+permeation in hTPC1 has a positive feedback on channel activity while Na+acts as a negative regulator. We speculate that the peculiar Ca2+and Na+dependence are key for the physiological roles of the channel in organellar homeostasis and signalling

Especificaciones formales tempranas del comportamiento de sistemas de software

El objetivo general del presente proyecto es facilitar la especificación formal del comportamiento de artefactos de software. La especificación formal del comportamiento esperado de artefactos de software ha sido identificada como uno de los mayores obstáculos para el desarrollo de software basado en modelos, y para la transferencia de técnicas de validación y verificación formal como model checking. La comunidad en Ingeniería de Software cree que una posible solución debe poder combinar varios condimentos: deben permitir la descripción parcial del comportamiento, la facilidad para especificar sistemas abiertos, se deben usar sintaxis simples y conocidas, deben basarse en notaciones con suficiente poder expresivo y deben soportar heterogeneidad (combinando declaratividad para estar cerca de la especificación de los requerimientos y notaciones operacionales basadas en autómatas oformalismos similares). El objetivo específico de esta investigación es el desarrollo de un nuevo lenguaje declarativo con el suficiente poder expresivo para especificar el comportamiento de sistemas abiertos, y la capacidad para operacionalizar las especificaciones. En el mismo se combinará la posibilidad de describir comportamiento parcial, permitiendo el modelado incremental, junto con la posibilidad de especificar el comportamiento de artefactos describiendo su interacción con un ambiente o contexto externo, habilitando las especificaciones de sistemas abiertos.Eje: Ingeniería de Software.Red de Universidades con Carreras en Informática (RedUNCI

Current Methods to Unravel the Functional Properties of Lysosomal Ion Channels and Transporters

open18siA distinct set of channels and transporters regulates the ion fluxes across the lysosomal membrane. Malfunctioning of these transport proteins and the resulting ionic imbalance is involved in various human diseases, such as lysosomal storage disorders, cancer, as well as metabolic and neurodegenerative diseases. As a consequence, these proteins have stimulated strong interest for their suitability as possible drug targets. A detailed functional characterization of many lysosomal channels and transporters is lacking, mainly due to technical difficulties in applying the standard patch-clamp technique to these small intracellular compartments. In this review, we focus on current methods used to unravel the functional properties of lysosomal ion channels and transporters, stressing their advantages and disadvantages and evaluating their fields of applicability.openFesta M.; Minicozzi V.; Boccaccio A.; Lagostena L.; Gradogna A.; Qi T.; Costa A.; Larisch N.; Hamamoto S.; Pedrazzini E.; Milenkovic S.; Scholz-Starke J.; Ceccarelli M.; Vitale A.; Dietrich P.; Uozumi N.; Gambale F.; Carpaneto A.Festa, M.; Minicozzi, V.; Boccaccio, A.; Lagostena, L.; Gradogna, A.; Qi, T.; Costa, A.; Larisch, N.; Hamamoto, S.; Pedrazzini, E.; Milenkovic, S.; Scholz-Starke, J.; Ceccarelli, M.; Vitale, A.; Dietrich, P.; Uozumi, N.; Gambale, F.; Carpaneto, A

Nube híbrida nacional: soberana, libre, interoperable y con desarrollo local

Recientemente la Secretaría de Innovación Pública ha convocado a un procedimiento de consulta para la concreción de una “Nube Híbrida de Gobierno”. El objetivo de la Consulta es recibir aportes, ideas, experiencias y recomendaciones para la definición de criterios tecnológicos que permitan la construcción de la misma. En este marco, quienes firmamos la presente, actores de diversas organizaciones del quehacer tecnológico nacional, mujeres y hombres con décadas de experiencia profesional en tecnologías informáticas y su relación con el desarrollo nacional, apoyamos la construcción de una “Nube híbrida de Gobierno”, saludamos el llamado a Consulta y acordamos en una serie de principios que creemos fundamentales para su desarrollo y el aseguramiento de la soberanía tecnológica.Facultad de Trabajo Socia

Nube híbrida nacional: soberana, libre, interoperable y con desarrollo local

Recientemente la Secretaría de Innovación Pública ha convocado a un procedimiento de consulta para la concreción de una Nube Híbrida de Gobierno. El objetivo de la Consulta es recibir aportes, ideas, experiencias y recomendaciones para la definición de criterios tecnológicos que permitan la construcción de la misma. En este marco, quienes firmamos la presente, actores de diversas organizaciones del quehacer tecnológico nacional, mujeres y hombres con décadas de experiencia profesional en tecnologías informáticas y su relación con el desarrollo nacional, apoyamos la construcción de una Nube híbrida de Gobierno, saludamos el llamado a Consulta y acordamos en una serie de principios que creemos fundamentales para su desarrollo y el aseguramiento de la soberanía tecnológica.Fil: Monk, Leandro Nicolás. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Computación; ArgentinaFil: Schapachnik, Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Investigación en Ciencias de la Computación. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigación en Ciencias de la Computación; ArgentinaFil: Uchitel, Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Investigación en Ciencias de la Computación. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigación en Ciencias de la Computación; ArgentinaFil: Vannini, Pablo Alberto. No especifíca;Fil: Zukerfeld, Mariano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Investigación en Ciencias de la Computación. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigación en Ciencias de la Computación; ArgentinaFil: Díaz, Andrea. No especifíca;Fil: Dunayevich, Julián. No especifíca;Fil: Lagostena, Juan Pablo. No especifíca;Fil: Passerini, Pablo Nicolás. No especifíca