A simple and cheaper in house varicella zoster virus antibody indirect ELISA

We have developed a cheaper an simple in house indirect ELISA that uses the live attenuated VZV vaccine as a coating antigen. The alternative ELISA had an agreement of 94% when compared with a commercial VZV ELISA kit. Moreover, our ELISA proved to be more reliable than the kit when assessing true negative samples. By adding a standard serum, we were able to produce results in international units per millilitre. Also, the addition of an extra step with 8M urea allowed the assessment of VZV IgG avidity without excessive costs. The cost per sample to test VZV IgG was 2.7 times cheaper with our ELISA, allowing the testing of many samples without the burden of production of VZV antigen in the laboratory.Desenvolvemos um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto simples e econômico para detecção de anticorpos contra o vírus da varicela zoster (VVZ) que utiliza a vacina contendo o vírus vivo atenuado como antígeno para recobrir a placa. Este ELISA mostrou uma concordância de 94% quando comparado com um kit de ELISA comercial para anticorpos contra varicela. Além disso, nosso ELISA mostrou ser mais confiável que o kit quando amostras comprovadamente negativas foram testadas. O uso de um soro padrão de referência, calibrado em unidades internacionais por mililitro, possibilitou também que os resultados pudessem ser comparados com outros estudos. O acréscimo de uma etapa extra com solução de uréia 8M permitiu avaliação de avidez de IgG para VVZ sem custos excessivos. O custo por amostra para testar IgG contra VVZ com nosso ELISA foi 2,7 vezes mais barato quando comparado com o kit comercial

Prevalence of IgG antibodies against VZV(Varicella Zoster Virus) in the Kuikuro and the Kaiabi tribes of Xingu indigenous park before vacination against varicella

Objetivos: avaliar a soroprevalencia de anticorpos IgG anti-VVZ nas etnias mais populosas do Parque Indigena do Xingu e determinar os valores preditivos positivo e negativo da historia pregressa de infeccao por varicela. Metodos: o estudo foi realizado entre junho e setembro de 2001 no Parque Indigena do Xingu, situado ao norte de Estado do Mato Grosso, que compreende uma area de 2.642.003 hectares e populacao de entao 3919 habitantes. Destes, foram avaliados 589 pertencentes a duas aldeias Kuikuro da regiao do Alto Xingu, e tres aldeias Kaiabi da regiao do Baixo Xingu, de modo a fornecer dados sobre infeccao previa por varicela. Foi realizado ensaio imunoenzimatico indireto para pesquisa de anticorpos IgG anti-Varicela Zoster Virus em 224 amostras de sangue coletadas antes da Introdução da vacinacao contra varicela. A selecao de voluntarios foi feita por chamamento e seguiu a distribuicao etaria daquela populacao, sem que houvesse influencia da resposta proferida a anamnese. Resultados: a soroprevalencia de anticorpos IgG foi de 80,8 por cento (intervalo de confianca de 95 por cento: 76 por cento a 86 por cento). Nos menores de 1 ano de idade, entre 1 e 5 anos, 6 e 10 anos, 11 e 15 anos, 16 a 20 anos e nos maiores de 20 anos, houve soroprevalencia de respectivamente 25 por cento, 57,8 por cento, 78,9 por cento, 100 por cento, 97,1 por cento e 100 por cento. 0 valor preditivo positivo da historia pregressa de varicela foi de 98 por cento e o valor preditivo negativo foi de 41 por cento. Conclusoes: a soroepidemiologia da varicela no Parque do Xingu antes da Introdução da vacinacao contra varicela foi comparavel a da populacao brasileira descrita na literatura. Houve maior proporcao de soroprevalentes entre 11 e 15 anos, indicando aquisicao de imunidade mais precoce contra esta doenca. 0 valor preditivo positivo elevado e o valor preditivo negativo baixo da historia previa tambem corresponderam aqueles descritos na literatura internacionalBV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Detection of IgG antibodies to Varicella-Zoster Virus by flow cytometry adapted fluorescent antibody membrane antigen (FAMA) assay development and comparison to the standard FAMA assay

Objetivos: Desenvolver um teste de anticorpo fluorescente para antígeno de membrana (FAMA) para detectar IgG anti-virus varicela-zoster (WZ) modificado para citometria de fluxo e campará-Io com resultados do teste FAMA tradicional de modo cego e independente. Métodos: Fibroblastos humanos infectados pelo Virus Varicela-Zoster (WZ) marcados com anticorpo caprino IgG anti-humano fluoresceína lsotiocianato (FITC) foram avaliados através de citometria de fluxo. Foram testadas 62 amostras de soro armazenadas a -70°C no Laboratório da Universidade de Columbia, Nova lorque. Um subgrupo de 20 destas 62 amostras tinha comprovação como verdadeiros positivos (n=10) e verdadeiros negativos (n=10), outras 3 amostras foram utilizadas como controles e um subgrupo de 39 amostras que haviam sido referidas por terem apresentado resultados de ensaio imunoenzimático ELISA comercial negativo ou indeterminado para imunidade humoral para 0 WZ. Resultados: 0 teste de Friedman mostrou não haver dlferença interteste (p=0,387) nem intrateste (p=0.31) no subgrupo de 20 amostras com resultado conhecido. 0 teste FAMA modificado para citometria de fluxo foi comparável ao teste FAMA tradicianal com uma acurácia de 90.32%. obtida pela curva receiver operating characteristic (ROC) cuja área foi de 0,9125 (IC95%: 0,829-1,00). A senslbilidade do teste modificado em relação ao teste tradicional foi de 95,25%, a especificidade foi de 80%, para uma prevalência de 67,74%. Conclusão: O teste FAMA foi adaptado, padronizado e reproduzido para ser lido através de citometria de fluxo, tendo apresentado boa acurácia em relação ao teste FAMA tradicional, representando um ganho pela sua automatização e diminuição do seu tempo de execução, 0 que poderá facilitar sua reprodução em outros centros.TEDEBV UNIFESP: Teses e dissertaçõesCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)CAPES: 0108-08-

Prevalência de anticorpos contra o vírus da hepatite A entre os índios Kuikuro e Kaiabi do Parque Indígena do Xingu, Brasil

A seroprevalence study to detect total antibodies against Hepatitis A Virus was done with 220 samples from 589 Native Indians from Xingu National Park, Brazil, in five Kaiabi and Kuikuro villages, the most populous ethnic groups. Using a commercial immunoassay kit we detected 97.7% positive samples (95% Confidence Interval: 95%-99%). We noticed a precocious seroconversion, before the age of six years, when the disease is usually asymptomatic. These results are similar to those found in the literature in non-Indian population studies of the Northern, Northeastern and West Central regions of Brazil. They suggest that it is not necessary to introduce vaccination against Hepatitis A in these highly endemic populations.Um estudo de soroprevalência para detectar anticorpos totais contra o Vírus da Hepatite A foi realizado com 220 amostras obtidas de 589 indivíduos de cinco aldeias indígenas das tribos Kaiabi e Kuikuro, as mais populosas do Parque Nacional do Xingu, Brasil. Utilisando um kit comercial de ensaio imunoenzimático, detectamos 97,7% amostras positivas (Intervalo de Confiança de 95%: 95%-99%), com uma soroconversão precoce, antes dos seis anos de idade, quando a doença costuma ser assintomática. Estes resultados são semelhantes aos resultados encontrados na literatura em estudos com populações não-indígenas das regiões Norte, Nordeste e Centro-Oeste do Brasil, e sugere que não há necessidade de introdução de vacinação contra Hepatite A nestas populações de alta endemicidade

Prevalência de anticorpos IgG contra o vírus varicela zoster nas aldeias indígenas Kuikuro e Kaiabi do Parque Nacional do Xingu, Brasil, antes da vacinação contra varicela

The purpose of the study was to estimate the prevalence of IgG antibodies against varicella zoster virus (VZV) in the two most populated indigenous ethnic groups from Xingu Indigenous National Park, in Brazil, prior to the introduction of vaccination against the disease, and to determine the positive and the negative predictive values of a history of varicella infection. In 2001, 589 inhabitants of two Kuikuro villages and three Kaiabi villages were evaluated and provided information concerning previous varicella infection. An indirect immunosorbent assay (ELISA) to detect IgG anti-VZV antibodies was performed in 224 blood samples - volunteer selection had no interference of anamnesis. IgG prevalence was 80.8% (95% Confidence Interval: 76% - 86%). The seroepidemiology of varicella in Xingu National Park prior to varicella vaccine introduction was comparable to the Brazilian national seroprevalence described in the literature, and so were the positive (98%) and the negative predictive value (41%) of the referred history.O objetivo do estudo foi aferir a prevalência de anticorpos IgG contra o Vírus Varicela-Zoster (VVZ) nos dois grupos étnicos indígenas mais povoados do Parque Nacional Indígena do Xingu, Brasil, antes da introdução da vacinação contra a doença, e determinar os valores preditivos positivo e negativo da história de infecção de varicela. Em 2001, 589 habitantes de duas aldeias Kuikuro e três aldeias Kaiabi foram avaliados e forneceram dados referentes à infecção prévia por varicela. Um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) foi realizado em 224 amostras de sangue para detectar anticorpos IgG anti-VVZ - a seleção de voluntários não teve interferência da anamnese. A prevalência de IgG foi de 80,8% (Intervalo de Confiança de 95%: 76% - 86%). A soroepidemiologia de varicela no Parque Nacional do Xingu antes da introdução da vacina foi comparável à soroprevalência nacional descrita na literatura, assim como os valores preditivos positivo (98%) e negativo (41%) da história referida.Federal University of São Paulo Division of Pediatric Infectious DiseasesUNIFESP, Division of Pediatric Infectious DiseasesSciEL

Desenvolvimento de ELISA indireto simples e de baixo custo para detecção de anticorpos anti-varicela zoster

We have developed a cheaper an simple in house indirect ELISA that uses the live attenuated VZV vaccine as a coating antigen. The alternative ELISA had an agreement of 94% when compared with a commercial VZV ELISA kit. Moreover, our ELISA proved to be more reliable than the kit when assessing true negative samples. By adding a standard serum, we were able to produce results in international units per millilitre. Also, the addition of an extra step with 8M urea allowed the assessment of VZV IgG avidity without excessive costs. The cost per sample to test VZV IgG was 2.7 times cheaper with our ELISA, allowing the testing of many samples without the burden of production of VZV antigen in the laboratory.Desenvolvemos um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto simples e econômico para detecção de anticorpos contra o vírus da varicela zoster (VVZ) que utiliza a vacina contendo o vírus vivo atenuado como antígeno para recobrir a placa. Este ELISA mostrou uma concordância de 94% quando comparado com um kit de ELISA comercial para anticorpos contra varicela. Além disso, nosso ELISA mostrou ser mais confiável que o kit quando amostras comprovadamente negativas foram testadas. O uso de um soro padrão de referência, calibrado em unidades internacionais por mililitro, possibilitou também que os resultados pudessem ser comparados com outros estudos. O acréscimo de uma etapa extra com solução de uréia 8M permitiu avaliação de avidez de IgG para VVZ sem custos excessivos. O custo por amostra para testar IgG contra VVZ com nosso ELISA foi 2,7 vezes mais barato quando comparado com o kit comercial.Federal University of São Paulo Division of Pediatric Infectious DiseasesFederal University of São Paulo Division of Adult Infectious DiseasesFleury Laboratory Immunology DepartmentUNIFESP, Division of Pediatric Infectious DiseasesUNIFESP, Division of Adult Infectious DiseasesSciEL