Control de la salud en el pez cebra (Danio rerio) utilizado en investigación

El conocimiento de las enfermedades comunes del pez cebra (Danio rerio) y su impacto en los resultados de las investigaciones en las que se utiliza ha aumentado sustancialmente, y se recomienda que las colonias de peces tengan un programa rutinario de control de la salud.Trabajo publicado en Cagliada, Maria del Pilar Lilia y Galosi, Cecilia Mónica (comps.). I Congreso de Microbiología Veterinaria. Libro de resúmenes. La Plata: Facultad de Ciencias Veterinarias, 2021.Facultad de Ciencias Veterinaria

Control sanitario en colonias de peces cebra (<i>Danio rerio</i>) de Argentina utilizados en experimentación

El pez cebra, Brachydanio rerio (también conocido como Danio rerio), es utilizado como modelo de desarrollo embrionario de vertebrados, para el análisis de la función génica, y mutagénesis. Previo al desarrollo del modelo del pez cebra en la década de 1970, genetistas del desarrollo experimentaban con modelos de invertebrados como Drosophila melanogaster (mosca de la fruta) y, más recientemente con Caenorhabditis elegans (nematodo) para la investigación del desarrollo embrionario temprano. La combinación de una prolífica capacidad reproductiva de Drosophila y la manipulación exitosa de sus embriones permite hacer ensayos de desarrollo embrionario y análisis genético de forma práctica en el laboratorio. Sin embargo, en relación al desarrollo embrionario, la aplicación de esta información a vertebrados fue limitada. Desde embriones de ratones que se desarrollan dentro de un útero hasta la rana de garras africana (Xenopus laevis) tienen una capacidad reproductiva lenta, y ninguno de estos modelos de vertebrados más populares poseen las características que hizo de Drosophila un modelo tan práctico (Kahn, 1994). Por su alta fecundidad y fertilización externa, el pez cebra poseía los atributos de estos modelos existentes, sin sus inconvenientes inherentes. Debido a que los mecanismos moleculares fundamentales del desarrollo de un embrión son similares para todos los vertebrados, posibilitó que el pez cebra, se haya convertido gradualmente en el modelo vertebrado inferior de elección.Facultad de Ciencias Veterinaria

Estudio de la prevalencia de infecciones producidas por el Virus Diminuto del Ratón (MVM) en bioterios de Argentina y su influencia en la contaminación de tumores trasplantables

La presencia de agentes infecciosos en colonias de animales de laboratorio representa un serio problema en las investigaciones biomédicas. Algunos microorganismos patógenos pueden inducir signos clínicos o causar infecciones subclínicas. La presencia de estos agentes puede modificar parámetros fisiológicos y producir alteraciones significativas en los resultados experimentales. Entre los virus murinos presentes en colonias de ratones se destaca el Virus Diminuto del Ratón (MVM) perteneciente a la Familia Parvoviridae considerado un virus de alta prevalencia en colonias de ratones y un contaminante de algunos stock de virus y de tumores trasplantables. Como todos los parvovirus, la dependencia de la replicación del MVM por funciones moduladas por la proliferación, diferenciación y transformación celular indica que el virus requiere de células en división para replicarse. La misma se produce en diversos órganos como el páncreas, intestino delgado, órganos linfoides, hígado y riñones. Este virus se libera y transmite a través de las heces y la orina, donde puede persistir durante varias semanas. Los animales sanos se infectan al ponerse en contacto con el animal enfermo o con sus heces y orina. El virus ingresa por vía oronasal para luego diseminarse. La signología clínica se manifiesta diferente en animales inmunocompetentes y en inmunodeficientes. En general, en los primeros no se manifiesta la enfermedad clínica a menos que estén sometidos a un estrés, mientras que en los segundos es más frecuente observar alteraciones en su comportamiento y en su anatomofisiología. También puede reducir la tasa de crecimiento tumoral directamente o impedir su desarrollo (oncólisis), altera la modulación de la respuesta inmune de las células tumorales, interfiere con la selección de nuevos trasplantes y provoca una reducción química de los tumores. Por todas estas razones, el desarrollo de técnicas de diagnóstico sensibles y precisas permite conocer la eficiencia de los sistemas de barreras sanitarias instaladas en las colonias, obtener datos más representativos de la prevalencia de este virus con el fin de conocer la magnitud de la infección y poner en práctica las medidas de control adecuadas. Actualmente el diagnostico de MVM se realiza a través de la detección serológica de anticuerpos antivirales en el huésped o por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) a partir de muestras de suero, órganos o heces. La prueba de inhibición de la hemaglutinación (IHA) fue la primera técnica utilizada para la detección de anticuerpos (Ac) pero se requiere de grandes cantidades de antígeno viral. Más recientemente, las dos técnicas serológicas más usadas son la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y el inmunoensayo enzimático (ELISA). La técnica de IFI es una prueba fácil de realizar para un pequeño tamaño en las muestras de suero mientras que ELISA es una técnica automatizada alternativa, sensible y específica comúnmente utilizada para un gran número de muestras.El diagnóstico del parvovirus del ratón (MPV) aislado en los últimos años, que también debe estar ausente en ratones utilizados en experimentación, puso en perspectiva los resultados serológicos positivos contra MVM debido a que en la mayoría de la técnicas serológicas presenta reacción cruzada con MVM, siendo necesario contar con técnicas complementarias que permitan discriminar ambos virus. El objetivo de este trabajo es determinar la prevalencia de infecciones por MVM en colonias de ratones de Argentina y estudiar la influencia de este virus en la contaminación de tumores transplantables. Para lograr estos objetivos se procederá a estandarizar una técnica de ELISA para la detección de Ac contra MVM, a determinar la prevalencia de MVM en colonias de ratones en Argentina a través de la comparación de las técnicas de ELISA e IFI, a desarrollar una técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de ADN viral de MVM y MPV que permita discriminar los resultados serológicos de ELISA e IFI en ratones provenientes de diferentes colonias y a estudiar la detección e interferencia de la contaminación por MVM en tumores transplantables en ratones.Facultad de Ciencias Veterinaria

Evaluation of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay for routine screening of Theiler's murine encephalomyelitis virus antibodies in mice colonies

The current study demonstrates the ability of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA) to detect antibodies against Theiler's murine encephalomyelitis virus in mice colonies. The antigen was produced from infected baby hamster kidney (BHK)-21 cells and treated with 1% Nonidet P40 in saline buffer. Control antigen was prepared following the same procedure using uninfected BHK-21 cells. The optimal antigen and serum dilutions were established. The reaction was revealed using an anti-mousehorseradish peroxidase conjugate and 2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid). Optimized iELISA was validated by detection of antibodies in known positive and negative serum samples before testing the samples of unknown status. Performance of the iELISA was compared with the indirect fluorescent antibody test, and the cutoff value was determined by receiver operating curve. Indirect ELISA showed 100% sensitivity, 99.38% specificity, and 97.78% predictive positive value. The antigen used is easy to produce, and no special equipment is required. The iELISA developed is simple and provides a rapid and less costly tool for diagnosis and research.Facultad de Ciencias Veterinaria

Evaluation of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay for routine screening of Theiler's murine encephalomyelitis virus antibodies in mice colonies

The current study demonstrates the ability of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA) to detect antibodies against Theiler's murine encephalomyelitis virus in mice colonies. The antigen was produced from infected baby hamster kidney (BHK)-21 cells and treated with 1% Nonidet P40 in saline buffer. Control antigen was prepared following the same procedure using uninfected BHK-21 cells. The optimal antigen and serum dilutions were established. The reaction was revealed using an anti-mousehorseradish peroxidase conjugate and 2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid). Optimized iELISA was validated by detection of antibodies in known positive and negative serum samples before testing the samples of unknown status. Performance of the iELISA was compared with the indirect fluorescent antibody test, and the cutoff value was determined by receiver operating curve. Indirect ELISA showed 100% sensitivity, 99.38% specificity, and 97.78% predictive positive value. The antigen used is easy to produce, and no special equipment is required. The iELISA developed is simple and provides a rapid and less costly tool for diagnosis and research.Facultad de Ciencias Veterinaria

Housing systems evaluation for immunodeficient mice under experience

Las investigaciones que utilizan ratones inmunodeficientes requieren el uso de una infraestructura adecuada y estandarizada, que debe garantizar el mantenimiento correcto de estas cepas y asegurar la obtención de resultados confiables. El desarrollo y uso de equipamientos con tecnología destinada a controlar el macro y microambiente permite mantener pequeños grupos de animales en instalaciones en las que no se cuenta con barreras sanitarias absolutas. Uno es el aislador flexible (AF); y otro las estanterías con cajas individualmente ventiladas (CIV), ambos equipos independizan el microambiente del macroambiente. El objetivo de este trabajo fue evaluar las ventajas y desventajas de cada uno de estos sistemas de alojamiento para ratones inmunodeficientes. Durante un año se mantuvieron dos grupos de ratones de la cepa CBA/N-xid libres de patógenos específicos en un AF y en una ECIV respectivamente. Se realizaron controles microbiológicos del ambiente y de los animales. Se evaluó comparativamente el costo del equipamiento, montaje, mantenimiento, procedimientos de manejo, cuidados, capacidad, controles, durabilidad y espacio requerido. Los resultados demostraron que si bien existen diferencias entre los sistemas y en ambos se puede mantener adecuadamente roedores inmunodeficientes, las ECIV son más ventajosas a pesar de su costo elevado.Immunodeficient mice strains maintenance requires special and standarized equipments in order to assure their quality and to obtain reliable experimental results. The development of new technologies and equipments used to control the animal macro and microenvironment in facilities with no barrier systems allow to house small number of rodents along the experiment. Flexible isolators (FI) and individual ventilated cages (IVC) represents two equipments that are able to control environmental factors. The aim of this study was to evaluate FI and IVC efficiency when they are used to keep immunodeficient mice. Two SPF CBA/N-xid mice groups were housed one year in a FI and in an IVC respectively. Environmental and animals microbiological monitoring was performed. The cost, construction, durability, space requirements, maintenance processes, monitoring and technical procedures were evaluated and compared. The results show that although differences among these equipments, both are suitable for the maintenance of immunodeficient mice. However, the results also show that the IVC, though expensive, have advantages over flexible isolators.Facultad de Ciencias Veterinaria

Housing systems evaluation for immunodeficient mice under experience

Las investigaciones que utilizan ratones inmunodeficientes requieren el uso de una infraestructura adecuada y estandarizada, que debe garantizar el mantenimiento correcto de estas cepas y asegurar la obtención de resultados confiables. El desarrollo y uso de equipamientos con tecnología destinada a controlar el macro y microambiente permite mantener pequeños grupos de animales en instalaciones en las que no se cuenta con barreras sanitarias absolutas. Uno es el aislador flexible (AF); y otro las estanterías con cajas individualmente ventiladas (CIV), ambos equipos independizan el microambiente del macroambiente. El objetivo de este trabajo fue evaluar las ventajas y desventajas de cada uno de estos sistemas de alojamiento para ratones inmunodeficientes. Durante un año se mantuvieron dos grupos de ratones de la cepa CBA/N-xid libres de patógenos específicos en un AF y en una ECIV respectivamente. Se realizaron controles microbiológicos del ambiente y de los animales. Se evaluó comparativamente el costo del equipamiento, montaje, mantenimiento, procedimientos de manejo, cuidados, capacidad, controles, durabilidad y espacio requerido. Los resultados demostraron que si bien existen diferencias entre los sistemas y en ambos se puede mantener adecuadamente roedores inmunodeficientes, las ECIV son más ventajosas a pesar de su costo elevado.Immunodeficient mice strains maintenance requires special and standarized equipments in order to assure their quality and to obtain reliable experimental results. The development of new technologies and equipments used to control the animal macro and microenvironment in facilities with no barrier systems allow to house small number of rodents along the experiment. Flexible isolators (FI) and individual ventilated cages (IVC) represents two equipments that are able to control environmental factors. The aim of this study was to evaluate FI and IVC efficiency when they are used to keep immunodeficient mice. Two SPF CBA/N-xid mice groups were housed one year in a FI and in an IVC respectively. Environmental and animals microbiological monitoring was performed. The cost, construction, durability, space requirements, maintenance processes, monitoring and technical procedures were evaluated and compared. The results show that although differences among these equipments, both are suitable for the maintenance of immunodeficient mice. However, the results also show that the IVC, though expensive, have advantages over flexible isolators.Facultad de Ciencias Veterinaria

New data on the geographic distribution of <i>Irenomys tarsalis</i> (Philippi, 1900) (Rodentia: Sigmodontinae) in Argentina

Se brinda una síntesis de las localidades conocidas en Argentina para el roedor sigmodontino Irenomys tarsalis , adicionando los registros más extremos hacia el norte (Pilolil, 39º 38’ 60” S, 70º 57’ 00” O, Catán Lil, Neuquén) y hacia el sur (44º 49’ 25” S, 72º 00’ 26” O, Río Senguerr, Chubut).We summarize the known Argentinean localities for this sigmodontine, adding the northernmost (Pilolil, 39º 38’ 60” S, 70º 57’ 00” W, Catán Lil, Neuquén) and southernmost (44º 49’ 25” S, 72º 00’ 26” W, Río Senguerr, Chubut) records.Facultad de Ciencias Naturales y Muse

Evaluation of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay for routine screening of Theiler's murine encephalomyelitis virus antibodies in mice colonies

The current study demonstrates the ability of an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA) to detect antibodies against Theiler's murine encephalomyelitis virus in mice colonies. The antigen was produced from infected baby hamster kidney (BHK)-21 cells and treated with 1% Nonidet P40 in saline buffer. Control antigen was prepared following the same procedure using uninfected BHK-21 cells. The optimal antigen and serum dilutions were established. The reaction was revealed using an anti-mousehorseradish peroxidase conjugate and 2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid). Optimized iELISA was validated by detection of antibodies in known positive and negative serum samples before testing the samples of unknown status. Performance of the iELISA was compared with the indirect fluorescent antibody test, and the cutoff value was determined by receiver operating curve. Indirect ELISA showed 100% sensitivity, 99.38% specificity, and 97.78% predictive positive value. The antigen used is easy to produce, and no special equipment is required. The iELISA developed is simple and provides a rapid and less costly tool for diagnosis and research.Facultad de Ciencias Veterinaria

New data on the geographic distribution of <i>Irenomys tarsalis</i> (Philippi, 1900) (Rodentia: Sigmodontinae) in Argentina

Se brinda una síntesis de las localidades conocidas en Argentina para el roedor sigmodontino Irenomys tarsalis , adicionando los registros más extremos hacia el norte (Pilolil, 39º 38’ 60” S, 70º 57’ 00” O, Catán Lil, Neuquén) y hacia el sur (44º 49’ 25” S, 72º 00’ 26” O, Río Senguerr, Chubut).We summarize the known Argentinean localities for this sigmodontine, adding the northernmost (Pilolil, 39º 38’ 60” S, 70º 57’ 00” W, Catán Lil, Neuquén) and southernmost (44º 49’ 25” S, 72º 00’ 26” W, Río Senguerr, Chubut) records.Facultad de Ciencias Naturales y Muse