Experimental Infection of Captive Red Foxes (Vulpes vulpes) with Mycobacterium bovis

[EN] In Europe, animal tuberculosis (TB) due to Mycobacterium bovis involves multi-host communities that include cattle and wildlife species, such as wild boar (Sus scrofa), badgers (Meles meles) and red deer (Cervus elaphus). Red fox (Vulpes vulpes) infections have also been recently reported in some TB endemic regions in the Iberian Peninsula and France, with some of the infected animals shedding M. bovis in urine and feces. In order to understand the pathogenesis of M. bovis infection in foxes and the associated risk of transmission, 12 captive foxes (6 females and 6 males) were inoc-ulated orally with 2 × 107 colony-forming units of a French field isolate of M. bovis. Clinical samples (urine, feces and oropharyngeal swabs) were collected every four weeks and tested for molecular diagnosis and bacteriology. Serological responses were measured by IDEXX M. bovis Ab Test and Multi Antigen Print Immunoassay (MAPIA). At a post-mortem examination performed 12 weeks post infection (wpi), tissues were tested for the presence of M. bovis and associated gross and microscopic TB-like lesions. M. bovis was detected by PCR in bladder swabs of 3 animals at 12 wpi. It was also detected pre-mortem at different time points of the experiment in the oropharyngeal mu-cus of three individuals and in the feces of nine foxes, with two of them confirmed by bacteriology. All 12 foxes had at least 4 PCR positive samples (out of the 23 tested), and all but 1 fox had at least 1 culture positive sample. The culture negative fox was PCR positive in both retropharyngeal and mesenteric lymph nodes, in line with the results of the other animals. Seroconversion was observed in all foxes except one during the experiment, and in nine at the final time point. No gross visible lesions were found in any animal at the post-mortem examination. The histology showed small granulomas within the lymph nodes, tonsils, liver and lungs from eight animals, with the presence of few acid-fast bacilli. These results confirmed that all orally-infected foxes developed mild TB lesions but they were able to shed mycobacteria in about 75% of cases, 1 month post-infection (9 out 12 foxes). These results show that it is possible to induce typical TB infection experimentally in captive foxes, with measurable M. bovis excretion; such an experimental system could be useful for future evaluations of diagnostics and vaccines in this speciesSIThe French Ministry of Agriculture mainly financed the sampling and the analyses in the framework of the RFSA call on TB projects (Anses-DGAl credit agreement RFSA 2017-326). The animals and the running cost of the BSL3 facilities and technical resources were financed by the European Commission in the context of Horizon 2020?Vetbionet Transnational Access Activities (TNA) call. This work is also partially the result of the I+D+i research project RTI2018-096010-B-C21, funded by the Spanish MCIN/AEI/10.13039/501100011033/ Ministry of Science, Innovation and the European Regional Development Funds (FEDER Una manera de hacer Europa), and of PCTI 2021? 2023 (GRUPIN: IDI2021-000102) funded by Principado de Asturias and FEDE

Análisis de la eficacia de la presión positiva continua nasal durante el postoperatorio inmediato en los pacientes con obesidad

“El empleo del CPAP nasal en el postoperatorio inmediato en pacientes obesos evita hipoxemias por anestesia residual. Monitorizar la saturación de oxígeno identifica la adecuada oxigenación. Analizar la eficacia del CPAP nasal en el paciente obeso durante el postoperatorio inmediato, evaluable por oximetria de pulso. La vía aérea superior incluye la boca, la nariz, la nasofaringe, la orofaringe y la laringe, los cuales son indispensables estar libre de lesiones u obstrucciones para el adecuado transporte de oxígeno hasta la unidad alveolar. Es un estudio de tipo descriptivo, observacional, transversal, homodémico, prospectivo y unicéntrico, se aplicó en el área de recuperación, durante el mes de Agosto a noviembre del 2017, en el Centro Médico Nacional, Hospital de Especialidades Puebla. Se incluyeron 39 pacientes de ambos sexos, adultos, con obesidad, programados electivamente para cirugías bajo anestesia general. Las variables evaluadas son edad, saturación de oxígeno previo a la colocación del CPAP nasal en el posoperatorio inmediato y saturación de oxígeno después de la colocación de CPAP nasal en el posoperatorio inmediato, Fc antes y despuesde del CPAP nasal. Se analizó mediante estadística descriptiva para variables cuantitativas. El uso del CPAP nasal demuestra ser eficaz durante el postoperatorio inmediato en los pacientes con obesidad.

Développement et mise en place d’un système de détection moléculaire pour la tuberculose bovine

La tuberculose bovine (TB) est une maladie zoonotique à déclaration obligatoire justifiant un engagement financier et humain de l’Etat sur des actions de surveillance et de lutte en élevage, dont l’agent causal majeur est Mycobacterium bovis. Avec un taux de prévalence au niveau du cheptel faible (< 0.01%), la France est considérée indemne de tuberculose bovine (OIT) par l’Union Européenne depuis 2001. Néanmoins, depuis 2004 avec l’intensification du plan de surveillance, il est observé une recrudescence de la TB dans certaines régions mettant ainsi en péril ce statut OIT. M. bovis, dont le réservoir principal est le bovin, est capable d’infecter un très large spectre de mammifères dont l’homme et de persister dans l’environnement. La circulation de la TB est multifactorielle, le rôle de la faune sauvage et de l’environnement restant à déterminer. Le plan de surveillance de la TB chez les bovins est basé sur un système de dépistage/abattage programmé au niveau national, avec l’inspection/détection de lésions évocatrices de TB à l’abattoir, qui sont prélevées, analysées par histologie et mises en culture (selon la méthode officielle de la Directive européenne 64/432). M. bovis est une bactérie à croissance lente (3 mois), ce qui implique une chaine de diagnostic pouvant aller jusqu’à 6 mois avec des outils diagnostic ante-/post-mortem, qui présentent souvent un manque de spécificité au regard de la diversité du genre Mycobacterium. Dans un contexte de faible prévalence, le diagnostic de la TB doit être rapide, fiable et simple dans le but de faciliter la gestion de la crise et limiter les pertes économiques. Dans ce mémoire de diplôme EPHE, je présente l’élaboration d’un système de détection et d’identification des mycobactéries impliquées ou interférant dans le diagnostic de la TB à l’aide d’une méthode PCR et du spoligotypage. L’identification par PCR en temps réel des bactéries repose sur l’amplification de 9 cibles génétiques selon une validation réalisée suivant la norme NF-U-47-600. L’analyse des échantillons par spoligotypage a été axée sur l’optimisation de la méthode pour la rendre applicable directement à des ADN extraits de prélèvements (animal ou environnemental).L’association des 2 méthodes de détection moléculaire a permis d’une part d’augmenter la sensibilité du diagnostic chez l’animal avec l’identification dans 95% des cas des mycobactéries tuberculeuses incriminées mais également l’identification d’autres actinomycétales responsables de réactions croisées dans les tests ante-mortem. Les méthodes développées ont par ailleurs permis la réalisation d’essais préliminaires dans l’étude de l’élaboration d’un vaccin oral chez les blaireaux. Il a permis également la détection de l’agent causal de la maladie dans des prélèvements de l’environnement prouvant ainsi le rôle de ceux-ci dans des cycles de transmission multifactoriels-multi-hôtes.En conclusion, les méthodes de détection moléculaire développées dans le cadre de ce projet permet au Laboratoire National de Référence (LNR) d’accélérer la chaine de diagnostic et de gestion de la maladie ainsi que d’améliorer les connaissances sur les mécanismes de transmission de la tuberculose bovine

Mycobacterium microti Interferes with Bovine Tuberculosis Surveillance

Mycobacterium microti, a member of the Mycobacterium tuberculosis complex, was originally described as the cause of tuberculosis in wild rodents. However, in the last few years, an increasing number of cases have been reported in wildlife (wild boars and badgers) and livestock (goat and cattle) in the frame of bovine tuberculosis (bTB) surveillance program, demonstrating the risk of interference with bTB diagnosis in France. In 2019, we detected four cattle infected with M.microti, from three different herds in three different distant regions. For all these cases, ante-mortem diagnosis by the skin test (single intradermal comparative cervical tuberculin (SICCT)) was positive. Confirmation of M.microti infection was based on molecular tests, i.e., specific real-time PCR and spoligotyping. These results highlight a non-negligible risk of interference in the bTB diagnosis system and raise concern about the reliability of diagnostic tests used for bTB surveillance. The use of highly specific tests, like the interferon gamma test (IFN-&gamma;) employed in France or new synthetic specific tuberculins for skin testing could alternatively be used to accurately identify M.bovis (or Mycobacterium caprae) infection at ante-mortem examination. At post-mortem diagnosis, the use of specific molecular tools should be considered to accurately distinguish pathogens within the MTBC and to avoid misleading bTB diagnosis

Mycobacterium microti Infection in Red Foxes in France

International audienceMycobacterium microti, member of the Mycobacterium tuberculosis, complex is known to interfere in the screening and diagnosis of bovine tuberculosis. This pathogen is increasingly detected in the frame of surveillance programs for tuberculosis in livestock and wildlife. Recently, red foxes (Vulpes vulpes) were found infected by Mycobacterium bovis in four French endemic areas. M. microti infection was concomitantly found during this investigation. Rates of infection by M. microti and M. bovis are not different except in one of the four areas (lower prevalence for M. microti in Charente). As for M. bovis infection, none of the infected foxes presented gross TB-like lesions. Infection of red foxes by M. microti seems to occur by ingestion of contaminated food, as mesenteric lymph nodes are mostly infected albeit no fecal excretion could be detected. Red foxes appear to be susceptible to Mycobacterium microti infection but seem to play a role of dead-end host for the transmission of this bacillus

Molecular identification of <em>Mycobacterium bovis</em> strains of responsible of bovine tuberculosis outbreaks in France, in livestock and in wildlife

National audienc

Demography and molecular diversity of <em>Mycobacterium bovi</em>s strains isolated in France from 1978 to 2011

International audienc

Comparaison des souches de <em>Mycobacterium bovis</em> isolées en France en élevage et dans la faune sauvage grâce aux techniques d’identification moléculaire

National audienceGenotyping of Mycobactrium bovis strains, responsible of the tuberculosis in mammals, provides valuable information for studying dynamics of this zoonotic disease and better understanding its complexity. In France, the total collection of animal M. bovis strains, from wildlife and livestock, identified from 1978 to 2011, were genotyped by spoligotyping and VNTR typing. Fluctuations in genetic variability, depending on time and geographical localization, were observed with a decrease in the genetic diversity during the past 10 years. However, some strains which are widespread in the whole French territory tend to persist. Three of them, represent more than 50% of the global strains identified: SB0120, SB0134 and the F4-family. VNTR typing is very useful for highlighting their important genotypic diversity and strong regionalization of some strains. Besides, a better genotyping characterization had shown that the same type of strains can be identified both in wildlife and cattle. This observation proves the existence of multi-host M. bovis transmission systems. To conclude, molecular characterization tools in bovine tuberculosis have an important role to complete classical epidemiologic surveys. They permit to improve outbreak investigations, to implement new surveillance schemes, and to evaluate the efficacy of national control programs.Le génotypage de souches de Mycobacterium bovis, la bactérie responsable de la tuberculose chez les mammifères, apporte des données précieuses en permettant d’étudier la dynamique de cette zoonose et de mieux comprendre sa nature complexe. Les génotypes de la collection complète de souches, provenant d’animaux sauvages et de rente, de M. bovis françaises, répertoriées de 1978 à 2011, ont été obtenus par spoligoypage et typage VNTR. Des fluctuations dans la variabilité génétique du bacille au cours du temps et en fonction de la zone géographique étudiée ont été constatées, avec une diminution de la diversité génétique des souches ces dix dernières années. Cependant certaines souches persistent au cours du temps et sont réparties sur l’ensemble du territoire. Trois types de souches représentent plus de 50 % de la totalité des M. bovis françaises : SB0120, SB0134 et la famille F4. Leur typage VNTR permet de mettre en lumière leur grande diversité et la forte régionalisation de certains types. Par ailleurs, la connaissance approfondie du génotype a permis d’identifier des souches régionalisées infectant de manière indifférenciée aussi bien la faune sauvage que les animaux de rente. Ce constat prouve la capacité des souches à proliférer au sein d’un système multi-hôtes. En conclusion, les outils de caractérisation moléculaire de la tuberculose bovine sont d’une très grande utilité pour compléter les approches épidémiologiques conventionnelles. Ils permettent d’améliorer le suivi des foyers, d’orienter la mise en place de nouveaux schémas de surveillance mais également d’évaluer l’efficacité des programmes de contrôle

Mycobacterium microti Infection in Dairy Goats, France

International audienceMycobacterium microti is a member of the Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC). This complex also includes M. tuberculosis, which causes human tuberculosis, and M. bovis and M. caprae, which cause bovine tuberculosis. M. microti was initially described as a pathogen of small rodents and also frequently affects domestic animals, especially cats, and has also been described in wildlife, especially wild boars and badgers (1). This mycobacterium has also been involved in human pulmonary tuberculosis cases, which highlights its potential zoonotic risk (2). We report a case of M. microti infection in a dairy goat herd, which underlines the risk for confounding bovine tuberculosis diagnosis and potential consequences for livestock management