Hisztamin hatása a sejtdifferenciációra, összehasonlító vizsgálatok tumor - és embrionális őssejteken = Effect of histamine on cell differentiation, comparative study of tumor-and embronic stem cells

Célkitűzésünk a genetikailag hisztamin hiányos és WT dermatofibrosarcoma tumorsejtek és embrionális őssejtek differenciációs markereinek összehasonlítása volt. Az indukált tumorokból alapított sejttenyészetekből tumor spheroid formájában fenntartható klónokat hoztunk létre, melyek jellemzőikben hasonlítottak az embrionális testet (EB) képző őssejtekre. A továbbiakban microarray analízissel a letapadó, illetve spheroidként/EB-ként növő sejtek génexpressziós mintázatát vizsgáltuk, különös tekintettel az egyedfejlődésben szerepet játszó, és a sejt önmegújulásért felelős transzkripciós faktorokra. Mivel az array adatok igen nagyszámú gén aktivitásában mutattak különbséget, ezért az Ingenuity pathway analízis nyomán csak a Wnt jelátviteli útra koncentráltunk a továbbiakban. Az így kiemelt Id2, Sox2, Nestin, Col2A1 génhálózat expressziós tendenciáit real-time PCR-rel és Western blottal próbáltuk validálni, azonban a 3 módszerrel detektált változások tendenciái nem vagy csak részben mutattak egyezést. Mivel a spheroid- és EB-képzésben a sejt-mátrix kapcsolatoknak is szerepe van (erre utalhat a Col2A1) ezért ebbe az irányba terjesztettük ki kutatásainkat, az adherens és spheroid/EB sejtek adhéziós viselkedését vizsgálva, különös tekintettel egy másik (a hisztaminnal összefüggésben már igazolt szerepű) mátrix komponensre, a fibulin5-re. A HDC KO sejtek fokozottabb adhézióval és fibulin5 expresszióval rendelkeznek, ez összhangban áll a korábban melanoma sejteken tett megfigyelésünkkel. | Our aim was to compare the differentiation markers of BalB/c WT and HDC KO dermatofibrosarcoma tumor cells and embryonic stem cells with the same genetic background. From the induced tumors cell cultures and non-adhesive spheroid forming clones were established, which were similar embryoid bodies (EBs). Subsequently microarray analyses on Agilent platform were carried out to determine the gene expression patterns of the adherent and spheroid or EB forming cells. We focused our interest to those transcription factors involved in cellular self-renewal and in early embryogenesis. As the array data showed differences in hundreds of genes, we concentrated our efforts - after using Ingenuity pathway analysis - the Wnt pathway, important in self-renewal and tumorigenesis. Id2, Sox2, Nestin and Col2A1 elements of this network were used for validation via real-time PCR and Western blotting. Unfortunately the tendencies observed here did not fit well the data derived from microarray analysis. Since cell-matrix connections are important in both spheroid and EB formation (reflected by the Col2A1 expression, too) we expand our efforts to study the adhesive behaviour of adherent and spheroid/body forming cells in connection with an other matrix component fibulin5, its role related to histamine has been proven earlier by us. The HDC KO cells had better adhesion characteristics and increased FBLN5 expression, which is in good correlation our earlier observations made on melanoma cells

Go-6976 reverses hyperglycemia-induced insulin resistance independently of cPKC inhibition in adipocytes.

This paper was originally published in PLOS ONE (Robinson KA, Hegyi K, Hannun YA, Buse MG, Sethi JK, PLoS ONE 2014, 9(10): e108963. doi:10.1371/journal.pone.0108963).Chronic hyperglycemia induces insulin resistance by mechanisms that are incompletely understood. One model of hyperglycemia-induced insulin resistance involves chronic preincubation of adipocytes in the presence of high glucose and low insulin concentrations. We have previously shown that the mTOR complex 1 (mTORC1) plays a partial role in the development of insulin resistance in this model. Here, we demonstrate that treatment with Go-6976, a widely used "specific" inhibitor of cPKCs, alleviates hyperglycemia-induced insulin resistance. However, the effects of mTOR inhibitor, rapamycin and Go-6976 were not additive and only rapamycin restored impaired insulin-stimulated AKT activation. Although, PKCα, (but not -β) was abundantly expressed in these adipocytes, our studies indicate cPKCs do not play a major role in causing insulin-resistance in this model. There was no evidence of changes in the expression or phosphorylation of PKCα, and PKCα knock-down did not prevent the reduction of insulin-stimulated glucose transport. This was also consistent with lack of IRS-1 phosphorylation on Ser-24 in hyperglycemia-induced insulin-resistant adipocytes. Treatment with Go-6976 did inhibit a component of the mTORC1 pathway, as evidenced by decreased phosphorylation of S6 ribosomal protein. Raptor knock-down enhanced the effect of insulin on glucose transport in insulin resistant adipocytes. Go-6976 had the same effect in control cells, but was ineffective in cells with Raptor knock-down. Taken together these findings suggest that Go-6976 exerts its effect in alleviating hyperglycemia-induced insulin-resistance independently of cPKC inhibition and may target components of the mTORC1 signaling pathway.This work was supported by grants from the Biotechnology and Biological Sciences Research Council (David Phillips Fellowship, JF16994), Diabetes UK (BDA:RD06/0003237) and British Heart Foundation (PG/10/38/28359) to J.K. Sethi and also from National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (DK-02001) to M.G. Buse

Identification and correction of abnormal, incomplete and mispredicted proteins in public databases

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Despite significant improvements in computational annotation of genomes, sequences of abnormal, incomplete or incorrectly predicted genes and proteins remain abundant in public databases. Since the majority of incomplete, abnormal or mispredicted entries are not annotated as such, these errors seriously affect the reliability of these databases. Here we describe the MisPred approach that may provide an efficient means for the quality control of databases. The current version of the MisPred approach uses five distinct routines for identifying abnormal, incomplete or mispredicted entries based on the principle that a sequence is likely to be incorrect if some of its features conflict with our current knowledge about protein-coding genes and proteins: (i) conflict between the predicted subcellular localization of proteins and the absence of the corresponding sequence signals; (ii) presence of extracellular and cytoplasmic domains and the absence of transmembrane segments; (iii) co-occurrence of extracellular and nuclear domains; (iv) violation of domain integrity; (v) chimeras encoded by two or more genes located on different chromosomes.</p> <p>Results</p> <p>Analyses of predicted EnsEMBL protein sequences of nine deuterostome (<it>Homo sapiens, Mus musculus, Rattus norvegicus, Monodelphis domestica, Gallus gallus, Xenopus tropicalis, Fugu rubripes, Danio rerio </it>and <it>Ciona intestinalis</it>) and two protostome species (<it>Caenorhabditis elegans </it>and <it>Drosophila melanogaster</it>) have revealed that the absence of expected signal peptides and violation of domain integrity account for the majority of mispredictions. Analyses of sequences predicted by NCBI's GNOMON annotation pipeline show that the rates of mispredictions are comparable to those of EnsEMBL. Interestingly, even the manually curated UniProtKB/Swiss-Prot dataset is contaminated with mispredicted or abnormal proteins, although to a much lesser extent than UniProtKB/TrEMBL or the EnsEMBL or GNOMON-predicted entries.</p> <p>Conclusion</p> <p>MisPred works efficiently in identifying errors in predictions generated by the most reliable gene prediction tools such as the EnsEMBL and NCBI's GNOMON pipelines and also guides the correction of errors. We suggest that application of the MisPred approach will significantly improve the quality of gene predictions and the associated databases.</p

Interleukin-1 receptor type 1 is over-expressed in neurons but not in glial cells within the rat superficial spinal dorsal horn in complete Freund adjuvant induced inflammatory pain

K

Ágy melletti ultrahangvizsgálat az alapellátásban. Irodalmi áttekintés

Mobil ultrahangvizsgálati lehetőség nélkül nehezen képzelhető el ma már modern kórházi osztály, az ágy melletti szonográfia („point-of-care ultrasonography”, POCUS) a 21. század technikája, amely például a sürgősségi ellátás- ban (például az úgynevezett „primary survey” során) esetenként akár kiválthatja a fonendoszkópot is. A sürgősségi orvoslásban – mely az alapellátáshoz legközelebb álló kórházi diszciplína – az ágy melletti ultrahangvizsgálat a napi rutinellátás része, használata magas szintű tapasztalaton alapul. Tekintettel arra, hogy a sürgősségi ambuláns populáció egyre közelebb kerül az alapellátás beteganyagához, elképzelhető, hogy a jelenlegi POCUS-evidenciák nagy valószínűséggel jól alkalmazhatók/vonatkoztathatók a felnőtt háziorvosi ellátásra is. A sürgősségi tapasztalatok alapján feltételezhető ugyanis, hogy az ágy melletti ultrahangvizsgálat a háziorvosi gyakorlatban is segíthet egyes, potenciálisan életet veszélyeztető kórképek diagnózisának felállításában, csökkentheti a definitív ellátásig eltelt időt, növelheti egyes beavatkozások sikerét, javíthatja a betegek ellátási élményét, valamint nem elhanyagolható módon hozzájárulhat az ellátószemélyzet kiégésének mérsékléséhez. A jelen áttekintés összefoglalja a külföldi alapellátásbeli tapasztalatokat, és igyekszik hazai perspektívába helyezni azokat

A gerincvelő felületes hátsó szarvi neuronhálózatok szerveződése és plaszticitása krónikus gyulladásos és neuropátiás fájdalomban = Organization and plasticity of neural microcircuits in the superficial spinal dorsal horn in chronic inflammatory and neuropathic pain

A kutatási terv fő célkitűzéseinek megfelelően tanulmányoztuk a nociceptiv szenzoros ingerület feldolgozás elsődleges központjának, a gerincvelő felületes hátsó szarvi neuronhálózatnak a molekuláris és celluláris szerveződését. Azon túl, hogy vizsgáltuk a nociceptív ingerület feldolgozási mechanizmusokat kontroll körülmények között, adatokat gyűjtöttünk arra vonatkozólag is, hogyan változik a vizsgált gerincvelői neuronhálózat molekuláris és celluláris szerveződése krónikus fájdalom állapotokban. Neuroanatómiai, fiziológiai-farmakológiai és molekuláris biológiai módszerek alkalmazásával nyert vizsgálati eredményeinkkel jelentős, és merőben új adatokat szolgáltattunk, a glutamaterg szinapszisok posztszinaptikus membránjának NMDA és AMPA receptor architektúrájáról, a gerincvelő hátsó szarvi endocannabinoid szignalizációs rendszer molekuláris szerveződéséről, a G-protein-kapcsolt szignalizációs molekulák szerepéről az opioidok által közvetített ingerületáttevődési mechanizmusokban, a kation-klorid kotranszporter molekulák megoszlásáról a gerincvelő hátsó szarvi neuronokon, a fájdalom feldolgozó gerincvelői neuronhálózatok cellularis szerveződéséről és a krónikus fájdalom állapotok által kiváltott neuronalis plaszticitási folyamatokról. Legtöbb eredményünk hasznosítható lehet új és hatékony fájdalomcsillapítási eljárások kidolgozásában. Eredményeinket nemzetközi tudományos folyóiratokban publikáltuk, és bemutattuk hazai és nemzetközi tudományos rendezvényeken is. | According to the major aims of the project we investigated the molecular and cellular organization of neural microcircuits in the superficial spinal dorsal horn representing the first relay station of nociceptive sensory processing. In addition to studying the nociceptive mechanisms under normal conditions, we also elucidated how information processing in nociceptive neural networks of the superficial spinal dorsal horn may change in chronic pain states. With an integrative interdisciplinary experimental approach in which high-resolution neuroanatomical, physiological-pharmacological and molecular biological techniques were used, we provided new insights into the NMDA and AMPA receptor architecture of postsynaptic membranes in glutamatergic synapses, molecular organization of the spinal endocannabinoid apparatus, the role of G protein-coupled signaling molecules in opioid-mediated synaptic transmission, the differential expression of cation-chloride co-transporter molecules in spinal neurons, cellular organization of pain processing spinal microcircuits, fundamental mechanisms of activity-evoked neural plasticity, chronic pain and hyperalgesia. With our findings, we assisted in developing effective therapeutic strategies for chronic pain syndromes. The results were published in peer reviewed international journals and presented at national and international scientific conferences

Regulation of mouse microglia activation and effector functions by bone marrow-derived mesenchymal stem cells

Mesenchymal stem or stromal cells (MSCs) are rare multipotent cells with potent regenerative and immunomodulatory properties. Microglial cells are specialized tissue macrophages of the central nervous system (CNS) that continuously survey their environment with highly motile extensions. Recently several studies have shown that MSCs are capable of reprogramming microglia into an “M2-like” phenotype characterized by increased phagocytic activity and upregulated expression of anti- inflammatory mediators in vitro. However, the precise polarization states of microglia in the presence of MSCs under physiological or under inflammatory conditions remain largely unknown. In this study, we found that MSCs induce a mixed microglia phenotype defined as Arg-1-high, CD86-high, CD206-high, IL-10-high, PGE2-high, MCP-1/CCL2-high, IL-1β- moderate, NALP-3-low, and TNF-α-low cells. These MSC-elicited microglial cells have high phagocytic activity and antigen-presenting ability. Lipopolysaccharide (LPS) is able to shape this microglia phenotype quantitatively, but not qualitatively in the presence of MSCs. This unique polarization state resembles a novel regulatory microglia phenotype, which might contribute to the resolution of inflammation and to tissue repair in the CNS

Az újkori külföldi magyar egyetemjárás adattárának összegyűjtése és kiadása = Assembling and Publishing of Documentation Concerning the Peregrination of Hungarians to Abroad Universities

A kutatás 4 éve alatt két egyetemi város (Bécs 1867-1890) és Graz (1867-1918) , valamint a Brünni Műegyetem kivételével teljes egészében befejeztük az európai újkori egyetemjárás adattárának készítését. A munka természetesen nemcsak az elmúlt 4 évben, hanem az azt megelőző évtizedben is folyt, és jelenleg mintegy 85000 külföldi beiratkozást regisztráltunk, amelyeket egységes elektronikus adatbázisba vittünk. A fent említett hiányok pótlása folyamatban van, tehát remélhető, hogy 2007 folyamán a francia nyelvterület kivételével teljessé válik a magyarországi egyetemjárás 1526 és 1919 közötti adatainak feltárása. A francia és belga egyetemekre járt magyarok kutatásához tekintettel a teljesen más forrástípusokra, az eddigiektől eltérő módszert kell alkalmazni, és komoly helyszini kutatást végezni, amelynek érdekében új OTKA pályázatot kívánok benyújtani. A beiratkozókról esetenként 10-10 adat áll rendelkezésre, ezekből ''A magyarországi diákok egyetemjárása az újkorban'' című sorozatunkban eddig 14 kötetet jelentettünk meg, és további 6 van előkészületben. Ezek felsorolását mellékelten nyújtom be. A fenti nagyon konkrét ereddményeken kívül mintegy 12 nemzetközi konferencián tájékoztattuk a résztvevőket kutatásaink eredményeiről, többek között Svájcban, Németországban, Ausztriában, Ukrajnában, Romániában, Dániában és Olaszországban. Köteteinket több külföldi szaklapban ismertették illetve előadásaink konferenci kötetekben jelentek meg. | During the four years of research ? except for the universities of Vienna (1867-1890) and Graz (1867-1918) ? we have successfully completed the repertory of Hungarian university peregrination to Europe at the early modern period. The work was being done not only during the past for years, but also in the preceding decade, so as a result we have recorded 85,000 registrations, all of which are processed into an electronic database. Quest after Hungarian students at the universities of France and Belgium requires a completely new method and a deeper local research, for the aim of which I would like to apply for another OTKA-support with a new project. Eventually there are 10 items available for each registrated student in our database, on the basis of which we have already published 14 volumes as parts of our series Hungarian peregrination to foreign Universities in Modern Times?, and there are six more volumes in preparation for the future, a list of which is attached. Beside these concrete results we presented papers at 12 different international conferences, e.g. in Switzerland, Germany, Austria, Ukraine, Romania, Denmark and Italy. The published volumes were reviewed in several international journals and the papers given were published in the acts of the conferences we had participated in