INFLUENCE OF PROBIOTICS ON CYTOKINE PRODUCTION IN THE IN VITRO AND IN VIVO SYSTEMS

Modulatory effects of three probiotic bacterial strains (Lactobacillus rhamnosus K32 (L), Bifidobacterium longum GT15 (B, Enterococcus faecium L-3 (E) on expression level and contents of key cytokines were studied using PCR techniques with reverse transcription, and enzyme-linked immunosorbent assay. Both cell cultures and an experimental model of intestinal dysbiosis were used in this study.The genes encoding bacteriocins, surface membrane component, pili and exopolysaccharides involved in host immune system modulation were previously identified in the B and Ebacterial strains.Investigation of probiotic strains and effects of their supernatants expression of cytokines in cell cultures of promonocyte origin (HTP-1) showed increased expression of TNFα, due to E and L supernatants. Moreover, the Bl culture induced IL-8 and IL-10 expression.In a model of Wistar rats with ampicillinand metronidazole-induced intestinal dysbiosis corrected with probiotics we have shown that the dysbiosis was accompanied by sufficient alterations in microbiota composition (Klebsiella spp. overgrowth and low contents of Faecalobacterium prausnitzii) that were observed only in the animals untreated with probiotics (control), or after administration of L.In contrast to these results, the animals treated with E and B, the following changes were revealed: 1) low expression of proinflammatory cytokines IL-8, TNFα, MCP-1 inmesenteric lymph nodes and appropriate changes of their serum contents, 2) increased serum content of the anti-inflammatory TGFβ cytokine. Hence, the present study, having used two complementary models, has detected some individual features of immune modulation produced by the probiotictic strains of L. rhamnosus K32, B. longum GT15 и E. faecium L-3 which exert differential effects upon the intestinal microbiota

Evaluation of probiotic lactobacillus as adjuvants for nasal immunization with chimeric pneumococcal vaccine

Vaccine protection against photogenic gram-positive bacteria including different species ofstreptococci is an important problem of contemporary molecular biology. Streptococcal infections are mostcommon bacterial infections surpassing by the economic losses all the infections excluding influenza. The gatesof streptococcal infection, oral cavity or vagina, are covered with immune and non-immune mucosal cells thatare the first line of defenses. Subcutaneous immunization not always stimulate the local immunity on mucosalsurfaces. On the other hand, mucosal vaccination can provide an appropriate local immune response togetherwith systemic protection. However, mucosal immunization often requires usage of special and effectiveadjuvants especially in case of vaccines based on recombinant proteins.For protection against Streptococcus pneumoniae infection, two chimeric recombinant proteins (PSPF andPSP) have been tested as vaccines. Recombinant proteins PSPF and PSP carry immunogenic epitopes fromthe respiratory pathogen including PspA, Spr1875 and PsaA. PSPF structure also carries a fraction of flagellin-FliC molecule in comparison with PSP, which does not have this fragment. This portion of PSPF was includedas internal adjuvant intended for the stimulation of Toll-like receptor 5.In this work, the adjuvant capacity of two probiotic strains, Lactobacillus rhamnosus CRL1505 andL. rhamnosus L32 was evaluated. It was demonstrated that both lactic acid bacteria strains were able to provideadjuvant effects by enhancing the mucosal and systemic immune responses after their co-administration withthe recombinant chimeric protein PSPF. The adjuvant effect of both Lactobacillus strains was significantlydecreased after their thermal inactivation. However, the cell walls of bacteria showed a marked adjuvant activity.An improved protection against several S. pneumoniae serotypes after mucosal immunization of infant micewith PSPF vaccine with probiotic strains or their cell walls was also demonstrated here.The recombinant chimeric protein PSPF administered with immunomodulatory probiotic strains or theirbacterial components would be a promising vaccine for immunization of humans against S. pneumoniae,particularly in children.Одной из наиболее актуальных задач медико-биологической науки является создание вакцинных препаратов против патогенных стрептококков – самых распространенных бактериаль-ных возбудителей заболеваний человека, экономический ущерб от которых уступает лишь потерям от гриппозной инфекции. Входными воротами стрептококковой инфекции являются слизистые обо-лочки респираторного и мочеполового тракта. Парентеральный способ введения вакцин не всегда позволяет добиваться одинаково эффектив-ной стимуляции местного иммунитета на слизистых оболочках, а вакцины, вводимые через слизи-стые оболочки, способны эффективно стимулировать иммунную защиту в области введения, а также обеспечить развитие системного иммунного ответа. Введение через слизистые оболочки вакцинных препаратов белковой природы требует исполь-зования специальных эффективных и безопасных адъювантов, поскольку рекомбинантные белки обычно проявляют недостаточную ммуногенность при таком способе введения. В работе в качестве вакцинных адъювантов при мукозальной иммунизации лабораторных животных пневмококковыми химерными рекомбинантными белками PSPF и PSP были апробированы два штамма пробиотиков – Lactobacillus rhamnosus CRL1505 и L32. Рекомбинантные химерные белки PSPF и PSP несут в своей структуре несколько иммуногенных эпитопов PspA, Spr1875, PsaA и предназначены для вакцинации против инфекции Streptococcus pneumoniae. Белки, отличие которых связано с присутствием в струк-туре PSPF участка молекулы флагеллина – FliC, по-разному стимулировали иммунный ответ при совместном введении с двумя штаммами пробиотиков. Установлено, что оба исследованных штам-ма L. rhamnosus были способны оказывать адъювантный эффект при интраназальном введении вак-цинных белков, проявлявшийся в усилении секреторного и гуморального иммунного ответа на со-вместно введенный рекомбинантный химерный белок PSPF. Выраженной стимуляции продукции специфических IgA носовых смывов и IgG сыворотки крови на PSP под влиянием L. rhamnosus L32 не происходило. Адъювантный эффект от вводимых лактобациллярных препаратов существенно сни-жался после температурной инактивации бактерий, однако препарат клеточных стенок L. rhamnosus CRL1505 проявлял выраженную активность. Стимуляция иммунного ответа адъювантами приводила к усилению протективного эффекта вакцины в экспериментах на лабораторных животных, инфици-рованных S. pneumoniae. Установлено, что некоторые штаммы лактобацилл, в частности Lactobacillus rhamnosus CRL1505 и L32, могут быть использованы в качестве адъювантов в составе мукозальных вакцин, однако эта способность зависит от свойств вакцинного препарата и формы введения пробиотиков.Fil: Leontieva, G. F.. Institute of Experimental Medicine; RusiaFil: Kramskaya, T. A.. Institute of Experimental Medicine; RusiaFil: Grabovskaya, K. B.. Institute of Experimental Medicine; Rusia; RusiaFil: Filimonova, V. Yu.. Institute of Experimental Medicine; Rusia; RusiaFil: Laiño, Jonathan Emiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Centro de Referencia para Lactobacilos; ArgentinaFil: Villena, Julio Cesar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Centro de Referencia para Lactobacilos; ArgentinaFil: Alvarez, Gladis Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tucumán. Centro de Referencia para Lactobacilos; ArgentinaFil: Danilenko, V. N.. Academy of Sciences. Institute of General Genetics. Head, Division of Fundamental Genetic Studies in Biotechnology; RusiaFil: Suvorov, A. N.. St. Peterburg State University; Rusia. Institute of Experimental Medicine. Head, Division of Molecular Microbiology; Rusi

Eribulin-trastuzumab combination in HER2-positive metastatic breast cancer: updated results from a Russian observational study

Introduction. The standard of 1st line treatment of HER2+ metastatic breast cancer (mBC) is double blockade with trastuzumab and pertuzumab + taxane, 2nd line – Trastuzumab-emtazine. There are no standards for further treatment, as well as the optimal drug sequence. Expansion of the arsenal of therapeutic possibilities and the use of new combinations will certainly improve the results of treatment of this category of patients and increase their life expectancy.Aim. We sought to describe treatment patterns of  eribulin  and clinical outcomes of  metastatic HER2-positive breast cancer treated with eribulin  plus trastuzumab combination in  academic institutions and community oncology practices across the Russian Federation.Materials and methods. Patients treated with eribulin anytime between Jan, 2014 and Sep, 2019 with a diagnosis of MBC were identified by 23 providers from Russia. Providers retrospectively reviewed the health records and abstracted selected data points into an electronic case report form for each eligible patient.Results. 100 HER2-positive pts received eribulin in combination with trastuzumab. Median age was 55 (31–80) yrs and ECOG status 0–3. 67% pts had visceral metastases. Eribulin was administered as 1st and 2nd line to 23 (23%) pts, 3rd line to 31 (31%) pts, 4th line and later to 46 (46%). Median number of cycles was 5 (2–27). ORR was 12%, SD – 72%, SD > 6 months – 23%, PD – 16%. Clinical efficacy rate achieved in 35%. Median PFS was 5.07 months (95% CI 4.021–6.119). According to the ER-status the response to eribulin and trastuzumab was different. ORR was 18.8%, SD 72.9% in pts with ER-positive MBC (n = 48) and 5.8% and 71.2% respectively in ER-negative MBC (n = 52). Median PFS was 6.97 months (95% CI 3.924–10.016) in pts with ER-positive MBC and 4.67 months (95% CI 3.841–5.499) in ER-negative MBC (р = 0.3). The combination was well tolerated: dose reductions were required in 12% pts, withdrawal due to toxicity in 4% pts. The most common type of toxicity was hematological with neutropenia Gr III-IV in 14 (14%) pts. Peripheral neuropathy Gr III was observed in 5 (5%) pts. No cardiotoxicity was detected.Conclusions. This is the real-life data of clinical outcomes for patients receiving eribulin plus trastuzumab for HER2-positive MBC throughout the Russian Federation. Our experience with eribulin plus trastuzumab demonstrates that this combination may be a potential effective treatment option for HER-2 positive MBC patients

СОБСТВЕННЫЙ ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ЭРИБУЛИНА В УСЛОВИЯХ РЕАЛЬНОЙ КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКИ Г. МОСКВЫ И МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ

Introduction. Eribulin, an non-taxane microtubule inhibitor, has been registered in Russia for patients with locally advanced or metastatic breast cancer (mBC) who received at least one chemotherapy regimen for a advanced disease, previous therapy should include anthracyclines and taxanes in adjuvant or metastatic setting, except the patients who could not be prescribed these drugs. We present our experience with eribulin in real clinical practice in Moscow and the Moscow Region.Patients and methods. We conducted a retrospective analysis of the experience with the use of eribulin in Moscow and the Moscow Region in 202 patients with mBC from January 2016 to February 2017 to assess the effectiveness and safety of the drug. All patients received previous therapy with anthracyclines and taxanes for locally advanced and / or metastatic cancer. The average age of patients at the time of inclusion in the analysis was 5 years (28–81). The status of the general condition on the ECOG 0-1 scale was registered in 81.3 % (100 / 123) of patients, the status of ECOG 2-3 in 18.7 % (23 / 123) of patients. The median of the number of courses of chemotherapy with eribulin is 4 (2–17). Patients received eribulin in 1-7 chemotherapy lines for metastatic disease. The average number of affected organs is 2 (1–5).Results. Complete response (CR) was in 3 (2 %) patients. Partial response (PR) was in 24 (15.7 %) patients, stabilization of the disease – in 89 (58. 2 %). Progression of the disease was recorded in 37 (24.1 %) patients. The median of progression-free survival (PFS) on the therapy was 4.64 (95 % CI 2.97-6.87) months. Stabilization of the disease for more than 6 months was registered in 28 (18.3 %) patients. The most significant toxicity was neutropenia and polyneuropathy (21 patients (10.4 %) and 7 patients (3.5 %), respectively).Dose reduction due to neutropenia was required by 26 patients (12.9 %). The objective response rate (ORR) depended on the chemotherapy line: in 1-3 lines the efficacy of the treatment was higher: the ORR was 21.6 %, compared to the 4th and subsequent lines – 12.3 %, respectively. With HER2-positive mBC, eribulin showed clinically significant results in combination with trastuzumab.Conclusions. Our analysis confirms that eribulin has a predictable and manageable safety profile, is an effective drug for the treatment of patients with different subtypes of mBC in a real clinical setting.Введение. Эрибулин – ингибитор динамики микротрубочек нетаксанового ряда, зарегистрирован в России для пациентов с местнораспространенным или метастатическим раком молочной железы (мРМЖ), получившим ранее не менее одного режима химиотерапии по поводу распространенного заболевания; предшествующая терапия должна включать антрациклины и таксаны в адъювантном режиме или в условиях метастатической формы заболевания, за исключением тех пациентов, которым не могли назначаться данные препараты. В настоящей работе представлен собственный опыт применения эрибулина в условиях реальной клинической практики г. Москвы и Московской области.Пациенты и методы. Проведен ретроспективный анализ опыта применения эрибулина в г. Москве и Московской области у 202 пациентов с мРМЖ с января 2016 по февраль 2017 г. для оценки эффективности и безопасности препарата. Все больные получили предшествующую терапию с использованием антрациклинов и таксанов по поводу местнораспространенного и / или метастатического рака. Средний возраст пациентов на момент включения в анализ составил 58 лет (28–81). Статус общего состояния по шкале ECOG 0–1 зарегистрирован у 81,3 % (100 / 123) больных, статус ЕCOG 2–3 – у 18,7 % (23 / 123) пациентов. Медиана числа проведенных курсов химиотерапии эрибулином – 4 (2–17). Пациенты получали эрибулин в 1–7 линиях химиотерапии по поводу метастатической формы заболевания. Среднее количество пораженных органов – 2 (1–5).Результаты. Полные регрессии (ПР) отмечены у 3 (2 %) больных, частичная регрессия (ЧР) – у 24 (15,7 %) пациентов, стабилизация заболевания – у 89 (58,2 %). Прогрессирование болезни зафиксировано у 37 (24,1 %) пациентов. Медиана выживаемости без прогрессирования (ВБП) на терапии эрибулином мРМЖ составила 4,64 мес. (95 % ДИ 2,97–6,87). Стабилизация заболевания более 6 мес. зарегистрирована у 28 (18,3 %) больных. Наиболее значимой токсичностью стали нейтропения и полинейропатия (21 (10,4 %) и 7 (3,5 %) пациентов соответственно). Редукция дозы эрибулина в связи с развитием нейтропении потребовалась 26 (12,9 %) больным.Частота объективного ответа (ЧОО) при терапии эрибулином зависела от линии химиотерапии: в 1–3 линиях эффективность лечения была выше – ЧОО составила 21,6 % по сравнению с 4-й и последующими линиями с ЧОО в 12,3 %. При HER2-положительном мРМЖ эрибулин продемонстрировал значительно лучшие результаты по ВБП в комбинации с трастузумабом по сравнению с монотерапией (медиана 4,64 мес. (95 % ДИ 2,94–6,6) и 2,58 мес. (95 % ДИ 2,15–3,6) соответственно).Выводы. Проведенный анализ подтверждает, что эрибулин, обладая предсказуемым и управляемым профилем безопасности, является эффективным препаратом для терапии пациентов с различными подтипами мРМЖ в условиях реальной клинической практики

Combined immunization with attenuated live influenza vaccine and chimeric pneumococcal recombinant protein improves the outcome of virus-bacterial infection in mice.

Influenza and its bacterial complications are a leading cause of morbidity and mortality worldwide. The effect of combined immunization with live influenza vaccine and recombinant chimeric pneumococcal protein in dual infection caused by influenza H1N1 and S. pneumoniae (serotype 3) has been studied. The combined vaccine consisted of the strain A/California/2009/38 (H1N1) pdm and chimeric recombinant protein PSPF composed of immunodominant fragments of the surface virulence factors of S. pneumoniae-PsaA, PspA, and Shr1875-associated with modified salmonella flagellin. Vaccinated mice were infected with the influenza virus 24 hours before or 24 hours after the onset of pneumococcal infection. The protective effect of combined vaccination was shown on both models of viral-bacterial infection

Development of experimental GBS vaccine for mucosal immunization

<div><p><i>Streptococcus agalactiae</i>, or group B streptococcus (GBS), is an important pathogen as it is the leading cause of neonatal deaths due to sepsis, meningitis or bacterial pneumonia. Although the development of an effective and safe GBS vaccine is on the agenda of many research labs, there is no GBS vaccine on the market yet. In the present study we attempted to engineer a live vaccine strain based on Bac, a surface protein of GBS, incorporated into a surface fimbrial protein of probiotic Enterococcus. The resulting strain induced specific systemic and local immune responses in mice and provided protection against GBS when administered via the intranasal, oral or intravaginal immunization routes.</p></div