Identification of Ilarviruses in almond and cherry fruit trees using nested PCR assays

In this study nested PCR assays have been developed for the detection of Prune dwarf virus (PDV), Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV) and Apple mosaic virus (ApMV) modifying a previously reported assay for the generic detection of ilarviruses. In all cases one generic upstream primer was used along with a virus-specific downstream primer in respective nested PCR assays. The application of the same thermocycling profile allowed all amplifications to run in parallel. Ilarvirus isolates from different hosts were used for the evaluation of the detection range of the assays, which were afterwards applied for screening almond and cherry plant material. In almond trees the incidence of PNRSV and PDV was 41% and 21.5%, respectively. In cherry orchards the opposite was observed with PDV (56.6%) being the prevalent virus followed by PNRSV (19.4%). Mixed infections with both viruses were also encountered in approximately 10 and 17% of cherry and almond trees, respectively. ApMV was not detected in any of the samples tested. This is the first extensive survey conducted in Greece in order to monitor the distribution of these viruses using molecular assays. Keywords: Prune dwarf virus, Prunus necrotic ringspot virus, Apple mosaic virus, cherry, almond, nested PC

Study of stem cells associated genes expression in culture of trophoectoderm cells

IntroductionTraditionally, mesenchymal stem cells (MSCs) can be obtained from a big number of human tissues. Recently, MSCs have been isolated from extraembryonic sources, such as cord blood, Wharton’s Jelly, amniotic membranes, amniotic fluid and placenta. MSCs derived from placental chorionic villi of the first trimester are likely to resemble, biologically, embryonic stem cells (ESC), due to the earlier development stage of placenta.In the present study, we are attempting to unravel the common features between the MSCs, obtained from placental chorionic villi of the first trimester, and ESC. In the light of former studies, long-term cultures of MSCs were assessed in order to evaluate MSCs in vitro differentiation potential, molecular features and markers of pluripotency during the period of culture.Materials and MethodsMSCs were obtained from 30 samples of chorionic villus and cultured to estimate their proliferative capacity, karyotyping stability and morphological characteristics. Flow cytometry was used to determine the expression of MSCs-surface antigens. MSCs were differentiated into adipocytes, osteoblasts, chondrocytes and neuronal cells. RT-PCR expression analysis of ESC-gene markers and differentiation-gene markers were followed to evaluate the differentiation success. ResultsChorionic villi cells, which were growing easily in culture conditions, appear to be phenotypically stable and displayed typical fibroblastoid morphology. MSCs cultures were undergone 20 passages during a period of 120 days, maintaining a stable karyotype throughout long term expansion. MSCs expansion rate was stable at the earlier stages (passages 3-12), and drop at the later (passages 13-20).Flow cytometry analysis has shown that the chorionic villi cells were positive, for CD90, CD73, CD105, CD29, CD44, HLA ABC antigens and negative for CD14, CD34, AC133, and HLA DR antigens, over the entire period of culture.Chorionic villi-derived MSCs were successfully differentiated in adipocytes, osteoblasts, chondrocytes and neuronal cells. Differentiation was confirmed by Oil Red O, Alizarin Red S, Alcian Blue and Cresyl Violet staining respectively and expression of PPARγ2, SPP1, Sox9 and Nes respectively.The expression of the ESC-gene markers POU5F1 (Oct-4) and NANOG was observed at earliest stages (4-12 passages), while the late stages (14-20 passages) did not presented any detectable expression levels. ZFP42 and SOX2 expression were not detected. Moreover, MSCs were found to express GATA4 but not NES (Nestin).ConclusionsChorionic villi-derived MSCs possess multipotent properties between embryonic and adult stem cells. In the present study with the use of a wider range of markers, it was found that chorionic villi MSCs display high proliferation rate and self-renew capacity, share common surface antigens with adult MSCs and express certain embryonics stem cells gene markers. These characteristics highlight chorionic villi as an attractive source of MSCs for the needs of regenerative medicineΕισαγωγήΠαραδοσιακά τα μεσεγχυματικά βλαστικά κύτταρα (MSCs) μπορούν να προκύψουν από πληθώρα ανθρώπινων ιστών. Πρόσφατα, MSCs απομονώθηκαν από εξωεμβρυϊκές πηγές όπως το ομφαλικό αίμα και η γέλη του Wharton, οι αμνιακές μεμβράνες, το αμνιακό υγρό και ο πλακούντας. ΜSCs προερχόμενα από πλακουντιακές χοριακές λάχνες πρώτου τριμήνου φαίνεται να ομοιάζουν, βιολογικά, στα εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα (ESCs), λόγω του πρώιμου σταδίου ανάπτυξης του πλακούντα.Στην παρούσα μελέτη, προσπαθήσαμε να διαλευκάνουμε τα κοινά χαρακτηριστικά μεταξύ των MSCs προερχόμενα από πρώτου τριμήνου χοριακές λάχνες και ESC. Με βάση τα δεδομένα προηγούμενων μελετών, πραγματοποιήθηκαν παρατεταμένες χρονικά καλλιέργειες των MSCs με σκοπό να αξιολογηθούν in vitro, πως διαμορφώνονται το δυναμικό διαφοροποίησης, τα μοριακά χαρακτηριστικά και γενικότερα οι δείκτες πολυδυναμοκότητας καθόλη τη περίοδο καλλιέργειας.Υλικά και ΜέθοδοιMSCs ελήφθησαν από 30 δείγματα χοριακών λαχνών και καλλιεργήθηκαν για να εκτιμηθεί η ικανότητα πολλαπλασιασμού τους και τα μορφολογικά χαρακτηριστικά. Κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε για να προσδιοριστεί η έκφραση των αντιγόνων επιφανείας των MSCs. Τα MSCs διαφοροποιήθηκαν σε λιποκύτταρα, οστεοβλάστες, χονδροκύτταρα και νευρικά κύτταρα. Μέσω RT-PCR ανάλυθηκε η έκφραση των γονιδίων-δεικτών των ESC και των γονιδίων δεικτών της διαφοροποίησης.ΑποτελέσματαΤα χοριακά λαχνικά κύτταρα, αναπτύσσονται εύκολα, είναι φαινοτυπικά σταθερά με χαρακτηριστική ινοβλαστοειδή μορφολογία. MSCs ανακαλλιεργήθηκαν για 20 φορές κατά τη διάρκεια περιόδου 120 ημερών. Ρυθμός πολλαπλασιασμού των MSCs παρέμενε σταθερός στα πρώιμα στάδια (3η-12η ανακαλλιέργεια) και παρουσίασε πτώση στα μεταγενέστερα στάδια (13η-20η ανακαλλιέργεια). Καθόλη τη διάρκεια της παρατεταμένης χρονικά καλλιέργειας ο καρυότυπος των κυττάρων δεν τροποποιηθήκε.Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι τα κύτταρα χοριακών λαχνών ήταν θετικά για CD90, CD73, CD105, CD29, CD44, HLA ABC αντιγόνα και αρνητικά για CD14, CD34, AC133, και HLA DR αντιγόνα, για ολόκληρη την περίοδο καλλιέργειας.Τα από χοριακές λάχνες προερχόμενα MSCs διαφοροποιήθηκαν επιτυχώς σε λιποκύτταρα, οστεοβλάστες, χονδροκύτταρα αλλά και σε νευρικά κύτταρα. Διαφοροποίηση επιβεβαιώθηκε με χρώσεις Oil Red Ο, Alizarin Red S, Alcian Blue και Cresyl Violet αντίστοιχα και έκφραση των γονιδίων PPARγ2, SPP1, Sox9 και Νεστίνης αντίστοιχα.Η έκφραση ESCs γονιδίων-δεικτών POU5F1 (Οct-4) και Nanog παρατηρήθηκε σε πρώιμα στάδια (4-12 περάσματα), ενώ τα τελευταία στάδια (14-20 περάσματα) δεν παρουσίασαν ανιχνεύσιμα επίπεδα έκφρασης. ZFP42 και Sox2 έκφραση δεν παρατηρήθηκε. Επιπλέον, MSCs βρέθηκαν να εκφράζουν το γονίδιο GATA4 αλλά όχι το NES (νεστίνη) σε μη διαφοροποιημένα κύτταρα.ΣυμπεράσματαΤα από χοριακές λάχνες προερχόμενα MSCs έχουν πολυδύναμες ιδιότητες μεταξύ εμβρυϊκών και ενήλικων βλαστικών κύτταρα. Στην παρούσα μελέτη με τη χρήση ενός ευρύτερου φάσματος δεικτών, διαπιστώθηκε ότι MSC από χοριακές λάχνες εμφανίζουν υψηλό ρυθμό πολλαπλασιασμού, διατηρώντας αναλλοίωτο το χρωμοσωμικό τους προφίλ, και την αυτό-ανανεωτική ικανότητα τους, μοιράζονται κοινή έκφραση αντιγόνων επιφάνειας με τα ενήλικα MSCs και εκφράζουν ορισμένα γονίδια μάρτυρες των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων. Αυτά τα χαρακτηριστικά θέτουν τις χοριακές λάχνες ως μια ελκυστική πηγή MSC για τις ανάγκες της αναγεννητικής ιατρικής

Molecular characterization, evolutionary relationships andetection of viruses of the family Closteroviridae related with Little Cherry Disease.

The objective of this work was to study the presence of Little cherry disease (LChD) in Greece and to characterize the viruses associated with it. For that purpose, field surveys were conducted in stone fruit orchards and samples were tested for the presence of Little cherry virus 1 and -2 (LChV-1 and -2). As long as available in the literature LChV-1 specific RT-PCR assays exhibited limited diagnostic sensitivity, a new nested RT-PCR was developed and used for screening the collected plant material. LChV-2 was not detected in any of the sweet and sour cherries samples tested. On the other hand, LChV-1 was prevalent in sweet cherry, whereas it was also detected for the first time in Greece in sour-cherry, plum and peach trees. The genetic diversification of this virus and the evolutionary mechanisms shaping its population structure were also studied. For that purpose, several LChV-1 isolates from diverse hosts and regions of Greece were collected and used in the present study. Part of their obtained RdRp, HSP70h and CP genes were used, along with homologous sequences from foreign isolates, for phylogenetic, positive selection and recombination analyses. The phylogenetic analysis grouped the isolates in four distinct groups irrespective of their host or geographical origin. The positive selection analysis has shown that although the intraspecies diversity was high, the three genomic regions studied (RdRp, HSP70h, CP) are under strong negative selection. Moreover, a natural homologous recombination event was observed in a Greek isolate with the recombination break-point mapping to the 3΄terminus of the RdRp gene. One isolate (G15 3) found to be the most divergent in the three genomic regions studied, was selected to be further characterized with the next generation sequencing platform (NGS). Comparative analysis of its sequence unveiled an overall nucleotide divergence of 26-27% from all fully sequenced LChV-1 isolates whereas insertion-deletion (indel) polymorphisms were observed at a significant number of positions in its genome. Furthermore, a large part of the genome (10.794 nt) of an apparently distinct LChV-1 isolate (GR) from sweet cherry was also sequenced and was found to be almost identical with a published isolate. In G15 3 and GR isolates, indel polymorphisms and a point mutation observed at the same positions within the genomic ORFs coding for the p4, HSP70h and CPm seem to result in their premature termination thus putatively affecting the size of these proteins. For the detection and quantification of LChV-1 a real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (Real Time RT-qPCR) was developed. Therefore, specific primers and a TaqMan probe were designed, using conserved regions of the capsid protein gene (CP) and their detection range was evaluated using several divergent viral isolates. The amplification efficiency of the developed method was estimated at 96,7%, whereas the quantification limit ranged from 100 to 108 transcript RNA copies. The RT-qPCR was applied for the study of the virus fluctuation within leaves and phloem tissues throughout the growing season and the most appropriate periods and plant tissues were determined for sampling.Στόχος της παρούσας εργασίας ήταν η διερεύνηση της παρουσίας της ασθένειας της μικροκαρπίας της κερασιάς (LChD) στην Ελλάδα και ο χαρακτηρισμός των ιών που σχετίζονται με αυτήν. Για το σκοπό αυτό πραγματοποιήθηκε επισκόπηση οπωρώνων κερασιάς και άλλων ειδών πυρηνοκάρπων για την παρουσία των Little cherry virus 1 και -2 (LChV-1 και -2). Στην περίπτωση του LChV-1, οι διαθέσιμες στη βιβλιογραφία δοκιμές RT-PCR παρουσίασαν περιορισμένη ευαισθησία ανίχνευσης και για το λόγο αυτό αναπτύχθηκε μία νέα εστιασμένη RT-PCR δοκιμή η οποία και χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση του ιού στο φυτικό υλικό που συλλέχθηκε. Κατά τον έλεγχο δεν διαπιστώθηκε η παρουσία του LChV-2 σε κερασιά και βυσσινιά. Αντίθετα, ο LChV-1 είναι αρκετά διαδεδομένος στην κερασιά, ενώ ανιχνεύθηκε για πρώτη φορά στην Ελλάδα σε βυσσινιά, δαμασκηνιά και ροδακινιά. Επιπλέον, μελετήθηκε η γενετική διαφοροποίηση του LChV-1 και προσδιορίστηκαν οι εξελικτικοί μηχανισμοί που διαμορφώνουν τη δομή του πληθυσμού του. Για το σκοπό αυτό συλλέχτηκαν απομονώσεις από διάφορους ξενιστές και περιοχές της Ελλάδος και προσδιορίστηκαν οι αλληλουχίες τμημάτων των γονιδίων RdRp, HSP70h και CP. Οι φυλογενετικές αναλύσεις των περιοχών αυτών κατέταξαν τις Ελληνικές και τις κατατεθειμένες απομονώσεις σε τέσσερις διακριτούς κλάδους ανεξάρτητα από τον ξενιστή ή τη γεωγραφική τους προέλευση. Περαιτέρω ανάλυση θετικής επιλογής με τον υπολογισμό της αναλογίας των μη-συνώνυμων αντικαταστάσεων ανά μη-συνώνυμη θέση (dN) προς τις συνώνυμες αντικαταστάσεις ανά συνώνυμη θέση (dS) έδειξε ότι οι τρεις γονιδιακές περιοχές που μελετήθηκαν υπόκεινται σε ισχυρή πίεση αρνητικής επιλογής. Επιπλέον, προσδιορίστηκε ένα σημείο ανασυνδυασμού στο 3΄ άκρο της RdRp μίας Ελληνικής απομόνωσης (Νο2 ISTO). Μία εκ των απομονώσεων του LChV-1 (G15 3) ήταν γενετικά απομακρυσμένη και στα τρία γονίδια που μελετήθηκαν και επιλέχθηκε να χαρακτηριστεί μοριακά με την πλατφόρμα αλληλούχησης νέας γενιάς (Next Generation Sequencing, NGS). Η συγκριτική ανάλυση της αλληλουχίας της έδειξε ότι η νέα απομόνωση είναι αρκετά διαφοροποιημένη από τις ήδη γνωστές με την παραλλακτικότητα σε νουκλεοτίδια στο σύνολο του γονιδιώματος της να κυμαίνεται από 26-27%, ενώ παρατηρήθηκαν σε σημαντικό αριθμό θέσεων πολυμορφισμοί τύπου προσθήκης ή/και απαλοιφής. Επιπλέον, προσδιορίστηκε τμήμα μήκους 10.794 νουκλεοτιδίων της αλληλουχίας μίας ακόμη διαφοροποιημένης Ελληνικής απομόνωσης (GR), η οποία παρουσίασε υψηλή εξελικτική συγγένεια με μία δημοσιευμένη απομόνωση. Στις απομονώσεις G15 3 και GR παρατηρήθηκε πολυμορφισμός στις ίδιες ακριβώς θέσεις μέσα στα ΑΠΑ που ενδέχεται να επηρεάζουν το μέγεθος των κωδικοποιούμενων πρωτεϊνών p4, HSP70h και CPm με πρόωρο τερματισμό της έκφρασής τους. Επιπλέον, αναπτύχθηκε μία δοκιμή πραγματικού χρόνου αντίστροφης μεταγραφής-αλυσιδωτής αντίδρασης της πολυμεράσης (Real Time RT-qPCR) για την αξιόπιστη ανίχνευση και τον ποσοτικό προσδιορισμό του LChV-1. Για το σκοπό αυτό σχεδιάστηκαν εξειδικευμένοι εκκινητές και ιχνηλάτης Taqman από συντηρημένες περιοχές του γονιδίου της καψιδιακής πρωτεΐνης (CP) και το εύρος ανίχνευσής τους αξιολογήθηκε με τη χρήση γενετικά διαφοροποιημένων απομονώσεων του ιού. Η απόδοση της αντίδρασης που αναπτύχθηκε ήταν 96,7%, ενώ το δυναμικό εύρος του ποσοτικού προσδιορισμού της ήταν 100-108 αντίγραφα RNA. Η μέθοδος αυτή εφαρμόστηκε για τη μελέτη της διακύμανσης της συγκέντρωσης του ιού στη διάρκεια του έτους σε βλαστό και φύλλα και προσδιορίστηκαν οι καταλληλότερες περίοδοι και φυτικοί ιστοί για δειγματοληψία

Minority women in the political arena: life stories

The main focus of this dissertation is the active engagement in politics of the minority women in Thrace. It draws upon the theoretical background of the social gender theories, feminism and the theory of empowerment within social work. This research is based on the qualitative method and uses personal narrative and the biography of four minority women who were actively involved as candidates in elections, became locally elected representatives and administrative officers, as the method of data collection and production. The biographical method constitutes a useful tool in social work and is used in a wide range of studies in the field. After all, the personal narratives and biographical descriptions of those who turn to social services are what provide the social worker with the opportunity to obtain the overall picture so as to be able to collaborate with them and create a more individualized plan for their active engagement in facing the obstacles presented. Furthermore, the biographical method gives those served the chance to link the past with the present and re-evaluate the facts and experiences of their life. It is used by social workers working with women, elderly, socially vulnerable or marginalized groups. The aim of this dissertation is to achieve understanding and ‘cross-sectoral’ analysis of the social gender and the minority identity of women’s integration and political engagement through their narratives and biographical descriptions. Another principle target of this research is to shed light, through the participants’ narratives, on all those factors that drove them to different choices, like their involvement in politics and their engagement as candidates in regional elections and spotlight the difficulties along with the obstacles they faced in their social path. Four biographical interviews of minority women, who developed or are still developing their path in the public political life, were conducted for this particular reason. Τhe processing of this empirical data shows that the obstacles women faced were gender-specific and were related to those faced due to their minority identity. The patriarchal hierarchy which is a foundation stone in the Greek community in general, but also in the closed minority society in particular, as well as the stereotypes concerning the political engagement of the minority members were the most important obstacles they had to face during this political involvement. All these factors which, according to them, are the only way towards their social integration and the involvement of more minority women in politics, are underlined in their narratives. Those women who participated in the research describe the ways of empowerment they adopted in order to convince more minority women to become actively involved in politics, aiming to increase the power of minority women’s voice and eradicate their low - representativeness.Η παρούσα διατριβή επικεντρώνεται στην ενεργό πολιτική δράση των γυναικών της μειονότητας της Θράκης. Αντλεί το θεωρητικό της υπόβαθρο από τις θεωρίες του κοινωνικού φύλου, του φεμινισμού και τη θεωρία της ενδυνάμωσης στην κοινωνική εργασία. Πρόκειται για μια μελέτη που βασίζεται σε ποιοτική μεθοδολογία έρευνας και χρησιμοποιεί ως μέθοδο συλλογής και παραγωγής δεδομένων τις αφηγήσεις ζωής και τη βιογραφία τεσσάρων γυναικών από τη μειονότητα που είχαν ενεργό συμμετοχή ως υποψήφιες σε εκλογικές διαδικασίες, εκλέχτηκαν ως αιρετές στην Τοπική Αυτοδιοίκηση και σε θέσεις διοίκησης. Η βιογραφική μέθοδος αποτελεί χρήσιμο εργαλείο στην κοινωνική εργασία και αξιοποιείται σε πλήθος ερευνητικές μελέτες στο πεδίο. Εξάλλου οι αφηγήσεις ζωής και οι βιογραφικές εξιστορήσεις των απευθυνόμενων στις κοινωνικές υπηρεσίες παρέχουν στον κοινωνικό λειτουργό την ευκαιρία να αποκτήσει μία ολοκληρωμένη εικόνα και να μπορεί σε συνεργασία μαζί τους να δημιουργήσει ένα εξατομικευμένο πλάνο ενεργοποίησής τους για την αντιμετώπιση των παρουσιαζόμενων δυσκολιών. Η βιογραφική μέθοδος δίνει επίσης τη δυνατότητα στους εξυπηρετούμενους να συνδέσουν το παρελθόν με το παρόν και να επαναξιολογήσουν τα γεγονότα και τις εμπειρίες της ζωής τους. Χρησιμοποιείται από τους κοινωνικούς λειτουργούς που εργάζονται με γυναίκες, με ηλικιωμένους, με κοινωνικά ευάλωτες ή περιθωριοποιημένες ομάδες. Στην παρούσα διδακτορική διατριβή στόχος είναι μέσα από την ανάδειξη του ‘’λόγου’’ και των βιογραφικών αφηγήσεων των γυναικών, η κατανόηση και «διατομεακή ανάλυση» του κοινωνικού φύλου και της μειονοτικής ταυτότητας των γυναικών στην ένταξή τους και στην πολιτική συμμετοχή τους. Ένας άλλος βασικός στόχος της έρευνας είναι να αναδειχθούν, μέσα από τον λόγο των μετεχουσών, όλοι εκείνοι οι παράγοντες που τις ώθησαν σε επιλογές διαφορετικές, όπως αυτή της πολιτικής δράσης και της συμμετοχής τους ως υποψήφιες σε αυτοδιοικητικές εκλογές, καθώς επίσης και οι δυσκολίες και τα εμπόδια που συνάντησαν στην κοινωνική τους διαδρομή. Για τον σκοπό αυτό πραγματοποιήθηκαν τέσσερις βιογραφικές συνεντεύξεις με γυναίκες της μειονότητας που ανέπτυξαν ή συνεχίζουν να αναπτύσσουν μία διαδρομή στον δημόσιο πολιτικό βίο. Από την επεξεργασία του εμπειρικού υλικού προκύπτει ότι τα εμπόδια των γυναικών ήταν έμφυλα και συνδυαζόταν με εκείνα που προέκυπταν από την μειονοτική τους ταυτότητα. Η πατριαρχική ιεραρχία με την οποία είναι δομημένη η ελληνική κοινωνία ευρύτερα, αλλά και η κλειστή κοινωνία της μειονότητας ειδικότερα, καθώς και τα στερεότυπα για την πολιτική δραστηριότητα των μελών της μειονότητας αποτέλεσαν τα κυριότερα εμπόδια που κλήθηκαν να αντιμετωπίσουν κατά τη διάρκεια της πολιτικής τους διαδρομής. Μέσα από τον λόγο τους αναδεικνύονται όλοι εκείνοι οι παράγοντες που σύμφωνα με τις ίδιες, αποτελούν μονόδρομο για την κοινωνική ένταξη και την ενασχόληση περισσότερων γυναικών της μειονότητας με την πολιτική. Οι ίδιες οι μετέχουσες στην έρευνα περιγράφουν τους τρόπους ενδυνάμωσης που ακολουθούν προκειμένου όλο και περισσότερες γυναίκες της μειονότητας να εμπλακούν ενεργά και ουσιαστική με την πολιτική, στοχεύοντας στην αύξηση της δύναμης της φωνής των γυναικών της μειονότητας και στην εξάλειψη της υπό- αντιπροσωπευτικότητάς τους

First Report of Apple Stem Pitting Virus on Pear and Quince Orchards in Northern Turkey

[No Abstract Available

"Language is freedom": A multimodal literacy intervention empowering the muslim minority in Greece

The project on the inclusion and education of Muslim minority children is a twenty-year multimodal educational intervention that aims to fight school failure and promote social inclusion. The project in question comprises activities that belong to both formal and nonformal education. This article concentrates on those activities conducted outside the formal classroom. Set within the cross-fertilization of practice-invested theory with theoretically oriented practice, we focus on out-of-school second language acquisition, teaching Greek as a second language to learners up to the age of twelve, compensatory classes for secondary school students, and adult literacy, all framed within the concepts of community learning and of literacies as multiple and varied, relative to sociocultural context. © Common Ground, Thalia Dragonas, Chara Dafermou, Maria Zografaki, Irini Assimakopoulou, Anastasia Dimitriou, Olga Katsiani, Victoria Lagopoulou

Chorionic villi derived mesenchymal like stem cells and expression of embryonic stem cells markers during long-term culturing

Mesenchymal stem cells (MSCs) can be obtained from a variety of human tissues. MSCs derived from placental chorionic villi of the first trimester are likely to resemble, biologically, embryonic stem cells (ESC), due to the earlier development stage of placenta. In the present study long-term cultures of MSC-like cells were assessed in order to evaluate MSCs multipotent characteristics and molecular features during the period of culture. CV-cells obtained from 10 samples of chorionic villus displayed typical fibroblastoid morphology, undergone 20 passages during a period of 120 days, maintaining a stable karyotype throughout long term expansion. The cells were positive, for CD90, CD73, CD105, CD29, CD44, HLA ABC antigens and negative for CD14, CD34, AC133, and HLA DR antigens as resulted from the flow cytometry analysis. CV-cells were differentiated in adipocytes, osteoblasts, chondrocytes and neuronal cells under specific culture conditions. The expression of the ESC-gene markers POU5F1 (Oct-4) and NANOG was observed at earliest stages (4–12 passages) and not at the late stages (14–20 passages) by RT-PCR analysis. ZFP42 and SOX2 expression were not detected. Moreover, CV-cells were found to express GATA4 but not NES (Nestin). Chorionic villi-derived cells possess multipotent properties, display high proliferation rate and self-renew capacity, share common surface antigens with adult MSCs and express certain embryonics stem cells gene markers. These characteristics highlight chorionic villi as an attractive source of MSCs for the needs of regenerative medicine. © 2016, Springer Science+Business Media Dordrecht