The effects of oleic and linoleic acid on development and quality of in vitro bovine embryos

YÖK Tez ID: 331466Bu çalışma, doymamış yağ asitlerinden oleik asit (18:1 cis-9- oktadekadienoik asit) ve linoleik asidin (18:2 (n?6), 9,12- oktadekadienoik asit) sığır embriyolarının in vitro gelişimi üzerine etkilerini araştırmak amacıyla gerçekleştirildi. Çalışmada kullanılan ovaryumlar, Ankara iline bağlı Çubuk ilçe mezbahasından temin edildi. Toplanan 198 adet ovaryumdan aspirasyon yöntemiyle, 1304 adet oosit elde edildi. Ancak bu oositlerden A ve B kalitede olduğuna karar verilen 1124 adedi çalışmada kullanıldı.Maturasyon, kapasitasyon, fertilizasyon ve embriyo kültürü işlemleri %5 CO2 ve %95 nem içeren 38,5 oC'lik inkübatör ortamında gerçekleştirildi. Maturasyon medyumu olarak doku kültür medyumu 199 (TCM-199) kullanıldı. Bu medyumdan 100 µL'lik maturasyon mikrodamlaları hazırlandı. Damlaların üzeri mineral yağ ile kapatıldı. Her mikrodamlaya ortalama 18'er adet oosit yerleştirildi. Oositler, maturasyon amacıyla 22 saat süreyle inkübe edildi. Kumulus ekspansiyonu görülen oositler mature kabul edildi.Spermatozoonların kapasitasyonu amacıyla heparin (5 U/mL) ve kafein (2 mM) içeren Brackett ve Oliphant (BO) medyumu kullanıldı. Spermatozoonlar 25000/oosit olacak şekilde doze edildi. Oosit ve spermatozoonlar fertilizasyon amacıyla 6 saat inkübe edildi. Ardından Charles Rosecrans (CR1aa) embriyo kültür medyumu ile yıkanan oositler, oleik asit (10 µM, 100 µM ve 1000 µM) ve linoleik asit (10 µM, 100 µM ve 1000 µM) içeren CR1aa medyumunda inkübasyona kaldırıldı. İnkübasyonun 48. saatinde ilk bölünme kontrolü yapıldı. Fertilizasyonu takip eden 168. saatte ise morula-blastosist aşamasına gelen embriyolar tespit edildi. Verilerin istatistiksel analizi khi-kare yöntemiyle yapıldı. Zigotun bölünme oranları; kontrol grubu için %53,64, linoleik asit için %62,59 (10 µM), %50,00 (100 µM) ve %58,55 (1000 µM), oleik asit için ise %62,25 (10 µM), %64,29 (100 µM) ve %71,70 (1000 µM) olarak bulundu. Gruplar arasında yapılan karşılaştırmada, 1000 µM oleik asidin diğer deneme gruplarına göre daha etkili olduğu görüldü (p<0,01). Bölünme oranları ortalaması ise linoleik asitte %57,11, oleik asitte %66,16 olarak bulundu.Zigotun morula-blastosist evresine ulaşma oranları, kontrol grubunda %13,25, linoleik asit için %23,13 (10 µM), %11,81 (100 µM) ve %21,05 (1000 µM), oleik asit için ise %25,17 (10 µM), %28,57 (100 µM) ve %34,59 (1000 µM) olarak bulundu. Morula-blastosist evresine ulaşma ortalaması ise linoleik asitte %18.74, oleik asitte %29,53 olarak hesaplandı.Sonuç olarak, Oleik asitin her üç dozunun zigotun bölünme oranını ve ortalamalarını, morula-blastosist evresine ulaşma oranını ve ortalamalarını arttırdığı ve in vitro embriyo kültüründe antioksidan olarak kullanılabileceği kanısına varıldı. Oleik asidin 1000 µM'lik dozunun en iyi sonucu verdiği görülmüştür. Linoleik asit ile yapılan karşılaştırmalarda oleik asidin anılan parametreler yönünden daha etkili olduğu saptandı.The objectives of this study were to examine effects of unsaturated fatty acids oleic acid (18:1 cis-9-octadecenoic acid) and linoleic acid (18:2 (n?6) 9,12- oktadekadienoik asit), on in vitro bovine embryo development. All of the ovaries were collected from Cubuk slaughterhouse in Ankara. A total of 1304 oocytes were collected from 198 ovary by aspiration methods, but only 1124 oocytes evaluated as A and B quality were used.Maturation, capacitation, fertilization and embryo culture were performed under 5% CO2 and 95% air in 38.5 oC incubator. TCM-199 was used as maturation medium. Maturation microdrops (100 µL) were prepared using this medium. Drops were covered by mineral oil then 18 oocytes were put into the each drop. Oocytes were then cultured for 22 hours in the incubator. Oocytes having cumulus expansion were accepted as matured.Brackett and Oliphant (BO) medium containing (5 U/mL) heparin and (2 mM) caffeine was used for spermatozoa capacitation. Number of spermatozoa was adjusted to 25000/oocytes for final concentration. Oocytes and spermatozoa were incubated together for 6 hours in the incubator for fertilization. After washing the oocytes in Charles Rosenkrans1 amino asit (CR1aa) they were incubated in CR1aa medium containing oleic acid (10 µM, 100 µM, 1000 µM) and linoleic acid (10 µM, 100 µM, 1000 µM). Oocytes were inspected for cleavage incubation after first 48 hours and cleavaged. Morula-blastocyst stages were observed 168 hours after the fertilization. Data were analysed by chi-square test. Cleavage rates of zygotes were calculated as 53.4% for control group, 62.59% (10 µM), 50.00% (100 µM), 58.55% (1000 µM) for linoleic acid and 62.25% (10 µM), 64.29% (100 µM) and 71.70% (1000 µM) for oleic acid. Comparing the other groups, 1000 µM oleic acid was more effective (p<0.01) than other experimental groups. The average cleavage rates were 57.11% and 66.16% for linoleic acid and oleic acid respectively.The morula-blastocyst rates were 13.25% for control group, 23.13% (10 µM), 11.81% (100 µM), 21.05% (1000 µM) for linoleic acid; 25.17% (10 µM), 28.57% (100 µM) and 34.59% (1000 µM) for oleic acid. The average morula-blastocyst rates were calculated as 18.74% for linoleic acid and 29.53% for oleic acid.As a result, It has turned out that all three doses of oleic acid increased the ratio and averages of zygot cleavage and reaching to morula-blastocyte stage respectively and it was concluded that it can be used as an antioxydant in invitro embryo culture. The best result was obtained from the dose of 1000 µM oleic acid. By comparing to linoleic acid, it was deduced that oleic acid is more effective regarding aforementioned parameters

Oleik ve linoleik asidin in vitro sığır embriyo gelişimi ve kalitesine etkileri

Tez (Doktora) -- Kırıkkale Üniversitesi89948

Effect of low doses of FSH and season on the in vitro maturation, fertilization and embryo development of bovine oocytes

This study was aimed at determining the effect of follicle-stimulating hormone (FSH) and season on the in vitro maturation, fertilization and embryo development of bovine oocytes. Bovine ovaries obtained from a local slaughter house were transported to the laboratory within 2–3 h in a thermos flask containing antibiotic-supplemented physiological saline (0.9%) and at a fixed temperature of 30°C. Bovine oocytes collected in spring and autumn were incubated in culture media containing FSH at concentrations of 0.2 and 0.8 μg/ml. After maturation, oocytes were fertilized. Fertilized oocytes were incubated in CR1aa culture medium for 7 days at 38.5°C for in vitro development. The assessment made after the completion of the maturation process revealed that, for both FSH doses, the maturation rates obtained with the oocytes collected in spring were higher than those obtained with the oocytes collected in autumn. The incubation of the oocytes collected in autumn in culture media supplemented with 0.2 μg/ml of FSH resulted in a low level of oocyte maturation. After maturation, oocytes were subjected to fertilization. Fertilized oocytes were incubated in CR1aa culture medium for 7 days at 38.5°C for in vitro development. In both seasons, 0.8 μg/ml FSH application was higher than the maturation values obtained with 0.2 μg/ml FSH in terms of fertilization and embryo development rates. The study was repeated 9 times for each season. Although there was no significant difference between fertilizations and embryo development in the seasons, better results were obtained in spring season

Development of capacitive rotary encoder for robotic applications

Bu projede, endüstriyel uygulamalarda yaygın bir şekilde kullanılan rotary enkoderlere uygulamaya özel değiştirilebilir darbe/tur esnekliği kazandırılmıştır. Genellikle endüstriyel uygulamalarda yüksek çözünürlüklü sensörler tercih edilmekte ve bu sensörler genellikle kapasitelerinin çok altında kullanılmaktadır. Bu proje; düşük maliyetle yapılabilecek uygulamaların, esnek olmayan ve maliyetli ürünlerle gerçekleştirilmesinden dolayı ortaya çıkmıştır. Bu şekilde esnek olmayan kullanımı önlemek adına; düşük maliyet ve yüksek hassasiyetli kapasitif rotary enkoderlere değişken darbe/tur özelliği eklenerek, sayısal elektronik tabanlı kontrol algoritması geliştirilmiştir. Kapasitif rotary enkoder geliştirilmesinde sayısal elektronik tabanlı teknikler denenmiştir. TÜBİTAK projesinde analog elektronik tabanlı tasarım sonuçları değerlendirildikten sonra; çift yan bant demodülasyon ve arctan fonksiyonu gibi aşamalar sayısal elektronik tabanlı olarak gerçekleştirilmiştir. Belirtilen süreçler mikrodenetleyiciye uygulanmadan önce MATLAB ortamında simüle edilmiştir. Algoritmanın her aşaması birbirinden bağımsız olarak test edildikten sonra mikrodenetleyiciye aktarılmıştır. Gerçekleştirilen testler sonucunda, açısal pozisyon bilgisini analog olarak çıkışa aktarabilen ve enkoderin bir turdaki darbe/tur oranı değiştirilebilen opsiyonel bir tasarım geliştirilmiştir. Bu tasarım sayesinde kullanıcı, uygulamasına göre bir turda kaç darbe çıkışı alması gerekiyorsa o değerlere set etmesine imkan sağlanmıştır. Bu esneklik başta robotik olmak üzere pek çok endüstriyel alanda kullanım kolaylığı sunmuştur.In this project, customized pulse/rotation flexibility is provided for application to rotary encoders which are widely used in industrial applications. Generally, high resolution sensors are preferred in industrial applications and these sensors are usually used far below their capacities. This project has emerged due to the fact that applications that can be done at low cost are realized with products with inflexible and cost. In this way, a digital electronic based control algorithm has been developed by adding variable pulse/rotation characteristics to low cost and high precision capacitive rotary encoders to prevent the use of inflexible. In the development of capacitive rotary encoders, digital electronics based techniques have been tried. After evaluating which in the TUBITAK project analogue electronics based design results, steps such as double side-band demodulation and arctan function were realized with digital electronics based. The specified processes were simulated in the MATLAB environment before the microcontroller was implemented. Each stage of the algorithm is tested independently of each other, and then the microcontroller is transferred. As a result of the tests carried out, an optional design has been developed in which the angular position information can be analog generated and the encoders pulse / turn ratio can be changed. This design allows the user to determine the number of pulse required for a turn based on the application. This flexibility offers ease of use in many industrial fields, especially robotic

Modelling and control of dynamics stability of an electric driven caravan systems

Doktora TeziBu tez çalışmasında elektrik tahrikli bir karavan sisteminin modellenmesi ve kontrolü gerçekleştirilmiştir. Taşıt-karavan (TK) sistemleri kayma, osilasyona girme ve katlanma gibi kararsız durumları içermektedir. Belirtilen kararsız durumlardan dolayı aktif şasi kontrol tekniklerine ihtiyaç duymaktadır. Bu çalışmada TK sistemlerinde oluşan kararsız durumları engellemek için bulanık mantık (BM) kontrolcüsü geliştirilmiştir. TK sisteminin hareket denklemleri çıkartılmış ve 3 serbestlik derecesi ile modellenmiştir. MATLAB/Simulink ortamında modellenen sistem CarSim eş zamanlı simülasyonu ile doğrulanmıştır. Simülasyon ortamında doğrusal karesel regülatör (DKR) ve BM kontrolcülerinin performansı çift şerit değiştirme testi ile incelenmiştir. BM kontrolcüsünün üyelik fonksiyonları, giriş ve çıkış parametrelerinin belirlenmesi simülasyon ortamında gerçekleştirilmiştir. Simülasyon ortamındaki çalışmalar tamamlandıktan sonra geliştirilen kontrolcü karavan elektronik kontrol ünitesine (EKÜ) aktarılmıştır. Ardından TK sistemi için saha testleri uygulanmıştır. Elektrik tahrikli karavan için geliştirilen bulanık mantık tabanlı kontrolcü saha testlerinde yanal kararlılığı başarılı bir şekilde sağladığı deneysel olarak gösterilmiştir. Literatürdeki çalışmalar incelendiğinde tez kapsamında gerçekleştirilen aktif karavan kontrol yöntemi elektrikli tahrikli bir sisteme uygulanmasıyla çalışmanın özgünlüğünü oluşturmaktadır.In this thesis, modeling and control of an electrically driven caravan system is carried out. Vehicle-caravan (VC) systems include instability modes such as sway, oscillating and jackknifing. It needs active chassis control techniques due to the stated instability conditions. In this study, a fuzzy logic (FL) controller has been developed to prevent instability situations in VC systems. The equations of motion of the VC system are derived and modeled with 3 degrees of freedom. The system modeled in MATLAB/Simulink environment has been validated with CarSim simultaneous simulation. In the simulation environment, the performance of linear quadrature regulator (LQR) and FL controllers is investigated by double lane change test. Membership functions, input and output parameters of the FL controller are determined in the simulation environment. After the studies in the simulation environment are completed, the developed controller is implemented to the caravan electronic control unit (ECU). Then, field tests are applied for the VC system. The fuzzy logic-based controller developed for the electric drive caravan has been experimentally shown to provide lateral stability in field tests successfully. When the studies in the literature are examined, the active caravan control method carried out within the scope of the thesis creates the originality of the study by applying it to an electrically driven system

Vitrification of bovine embryos developed in vitro in culture medium containing oleic and linoleic acids

WOS: 00036081010028

The effect of oleic and linoleic acids on in vitro bovineembryonic development and embryo quality

Karaşahin, Tahir (Aksaray, Yazar)The present study was aimed at the investigation of the effects of oleic and linoleic acid on the in vitro development of Anatolian native black crossbred bovine embryos. Following the in vitro maturation and fertilization of oocytes, embryonic development stages were monitored using embryo culture medium supplemented with three different doses of oleic and linoleic acid (10, 100, and 1000 µM). Examination of the culture media 48 h after fertilization demonstrated that linoleic acid had no effect on embryo cleavage rates, while oleic acid produced a significant increase in cleavage rates (P < 0.01). It was determined that the highest dose of linoleic acid (1000 µM) and all three doses of oleic acid significantly increased the proportion of cultured oocytes developing to the morulablastocyst stage (P < 0.001). As a result, while oleic acid significantly increased (P < 0.001) the proportion of embryos developing to the morula-blastocyst stage, linoleic acid had limited effects on embryonic development and quality. Thus, it was concluded that the supplementation of Anatolian native black crossbred bovine embryo cultures with oleic acid may induce positive effects on embryonic development and quality

The effects of low doses of FSH and season on the in vitro maturation of bovine oocytes

WOS: 00036081010029

Some haematological and biochemical parameters in hasak and hasmer crossbred sheep

Karaşahin, Tahir ( Aksaray, Yazar )Mevcut çalışma, farklı yaş aralıklarında bulunan Hasak ve Hasmer melez koyun ırklarına ait hematolojik ve biyokimyasal referans kan değerlerinin ortaya koyulması amacıyla yapıldı. Bu amaçla, klinik olarak sağlıklı oldukları belirlenen, yavru (6 ay) ve yetişkin (1-3 yaş) olmak üzere toplam 120 adet Hasak (n=60) ve Hasmer (n=60) koyunundan kan örnekleri alındı. Tam kanda, akyuvar (WBC), lenfosit (LYM), monosit (MON), granülosit (GRA), alyuvar (RBC), hemoglobin (Hb), hematokrit (PCV), ortalama alyuvar hacmi (MCV), ortalama alyuvar hemoglobini (MCH) ve ortalama alyuvar hemoglobin derişimi (MCHC) değerleri belirlendi. Serumda ise alanin aminotransferaz (ALT), aspartat aminotransferaz (AST), gama glutamil transferaz (GGT) enzim aktiviteleri ile üre, kreatinin, albümin, glikoz, total protein ve total kolesterol düzeyleri incelendi. Her iki ırkta da, yetişkin koyunlarda LYM sayısı, AST, GGT aktiviteleri ve glikoz düzeyinin daha düşük, MCV, MCH ve total kolesterol düzeylerinin ise istatiksel olarak daha yüksek olduğu belirlendi. Bununla birlikte, diğer hematolojik ve biyokimyasal parametrelerde, yaşa bağlı istatiksel olarak önemli bir fark bulunmadı. Sonuç olarak, bu çalışmadan elde edilen verilerin, Hasak ve Hasmer melez koyun ırkları için referans kan değerleri olarak kabul edilebileceği düşünülmektedir.The aim of this study was to determine the reference values of haematological and biochemical parameters in Hasak and Hasmer crossbred sheep, covering different age ranges. In this context, a total of 120 blood samples from Hasak (n=60) and Hasmer (n=60) breed were collected from clinically healthy young (6 months) and adult (1-3 years old) sheep. The blood samples were analysed for white blood cells (WBC), lymphocytes (LYM), monocytes (MON), granulocytes (GRA), red blood cells (RBC), haemoglobin (Hb), packed cell volume (PCV), mean corpuscular volume (MCV), mean corpuscular haemoglobin (MCH), and mean corpuscular haemoglobin concentration (MCHC). In the serum, alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), gamma glutamyl transferase (GGT) enzyme activities, urea, creatinine, albumin, glucose, total protein, and total cholesterol levels were observed. In both breeds, the LYM count, AST, GGT activities and glucose level were lower, while MCV, MCH and total cholesterol levels were higher in adult than those in young sheep. However, depending on the age, no statistically significant difference was observed in the rest of the haematological and biochemical parameters. Consequently, the data obtained from this study could be accepted as reference blood values for Hasak and Hasmer crossbred sheep

Investigation of sex distribution and the effect of sex to this distribution on in vivo produced bovine embryos at different stages

Bu çalışmanın konusu, farklı dönemlerdeki in vivo sığır embriyolarının cinsiyetlerinin non elektroforetik PCR yön- temi ile tespit edilerek, cinsiyet dağılımının ve bu dağılımın arasındaki farkların cinsiyetten etkilenip etkilenmediğinin belirlenmesidir. Cinsiyet tayini amacıyla yedi günlük toplam 65 adet in vivo üretilmiş embriyo kullanıldı. Embriyo elde etmek için rutin süperovulasyon yöntemleri kullanıldı. Tohumlamalardan yedi gün sonra cerrahi olmayan yöntemle uterus yıkaması yapılarak embriyolar toplandı. Elde edilen embriyolar kalite değerlendirmesinin ardından cinsiyetleri tespit edildi. Embriyoların trophektoderm kısmından mikro manipülatöre bağlı mikro bıçak ile %10-30 oranında bir par- ça kesilerek biyopsi materyali alındı. Embriyodan biyopsi alma işlemi %20 FCS içeren D-PBS solüsyonu içerisinde yapıldı. Alınan biyopsi parçaları, lizis ve denaturasyon işlemleri amacıyla PCR cihazına yerleştirildi. Lizisi takiben DNA amplifikasyon işlemi 35 döngü olarak gerçekleştirildi. PCR cihazından çıkarılan tüpler, 302-312 nm dalga boyunda ışık veren UV lamba altında incelendi. Pembe renk veren embriyo “erkek embriyo” olarak belirlendi. Cinsiyet tayini yapılan embriyolardan kompakt morula aşamasında olan 30 embriyodan 14’ünün erkek (%46.7; 14/30), 16’sının dişi (%53.3; 16/30) cinsiyette; blastosist aşamasındaki 35 embriyodan 21’inin erkek (%60.0; 21/35), 14’ünün dişi (%40.0; 14/35) cinsiyete sahip olduğu tespit edildi. Blastosist aşamasındaki erkeklerin oranının (%60.0) morula aşamasına (%46.7) göre daha yüksek bulunmasına rağmen aralarındaki farklılık istatistik önemde bulunmamıştır (P0.05).The objective of this study is to investigate whether sex distribution and the variance of this distribution are affected by sex. Sex detection of in vivo produced bovine embryos at different stages was made using non- electrophoretic PCR method. For sexing; in vivo derived day-seven 65 embryos were used. Embryos were obtained from routine superovulation procedure. After seven days of artificial insemination; embryos were collected by nonsurgical uterine flushing technique. The sex of the embryos was determined; following evaluation of the quality of embryos. 10-30% of the trophectoderm of the embryo was excised with a micro blade attached to the micro manipulator. Embryo biopsy procedure was carried out in D-PBS solution containing 20% FCS. The biopsy materials were placed in PCR instrument for lysis and denaturation. After lysis period, DNA amplification process was carried out in 35 cycles. The tubes taken out of the PCR instrument were inspected under UV illumination of 302-312 nm wave length. Pink fluorescence indicates the presence of a male sample. As a result of the sex determination out of 30 embryos; 14 male (46.7%; 14/30), 16 female (53.3%; 16/30) were determined at compact morula stage, out of 35 embryos; 21 male (60.0%; 21/35), 14 female (40.0%; 14/35) were determined at blastocyst stage. Even though the rate of males (60%) at blastocyst stage was higher than that at morula stage (46.7%), the difference was not found statistically significant (P>0.05)