15 research outputs found
Quantification of 4-nerolidylcatechol from Pothomorphe umbellata (Piperaceae) in rat plasma samples by HPLC-UV
Get PDFO 4-nerolidilcatecol representa o metabólito secundário mais abundante de Pothomorphe umbellata (Piperaceae), cujo uso terapêutico deve ser fundamentado após a caracterização farmacocinética do mesmo (4-nerolidicatecol). Os níveis séricos de animais tratados com 10 mg/kg do fármaco i.v. foram avaliados por validação analítica em CLAE-UV. As condições cromatográficas empregadas foram fase móvel de acetonitrila:metanol:água (62:20:18), coluna RP-18, fluxo de 1,6 mL/min e detector UV em 282 nm, com tempo total de corrida inferior a 15 minutos. Observou-se linearidade do 4-NRC em plasmas na faixa de 1,0 a 80,0 mcg/mL, com valores de precisão e exatidão entre 14,4-3,0% e 24,0-0,2%, respectivamente. O procedimento de extração líquido-líquido apresentou reprodutível e com recuperação quantitativa (106,5%±3,0%).The oral dosages formulations from Pothomorphe umbellata (Piperaceae) can only be therapeutically evaluated after establishing 4-nerolidylcatechol (4-NRC) pharmacokinetic profile in plasma. For that purpose, a unique analytical method validation using HPLC-UV detection was developed for analysis of rat plasma samples. The animals received 10 mg/kg b.w. of 4-NRC i.v.. Analytical conditions were set with C18 column, methanol: acetonitrile: water (62:20:18) as mobile phase, and a flow rate of 1.6 mL/min. The assay was linear from 1.0 - 80.0 mcg/mL. The recovery procedure was performed by liquid-liquid extraction showing quantitative extraction (106.4±8.7%). Limit of Quantification (LOQ) was found to be 1.0 mcg/mL. Interassay precision and accuracy ranged from values of 14.4-3.0% and 24.0-0.2%, respectively. Recovery after liquid-liquid extraction was found to be 106.5 ± 3%. The method is simple and reliable with total run time of less than 15 min
Global testing of a consensus solubility assessment to enhance robustness of the WHO biopharmaceutical classification system
Get PDFThe WHO Biopharmaceutical Classification System (BCS) is a practical tool to identify active pharmaceutical ingredients (APIs) that scientifically qualify for a waiver of in vivo bioequivalence studies. The focus of this study was to engage a global network of laboratories to experimentally quantify the pH-dependent solubility of the highest therapeutic dose of 16 APIs using a harmonized protocol. Intra-laboratory variability was ≤5 %, and no apparent association of inter-laboratory variability with API solubility was discovered. Final classification “low solubility” vs “high solubility” was consistent among laboratories. In comparison to the literature-based provisional 2006 WHO BCS classification, three compounds were re-classified from “high” to “low-solubility”. To estimate the consequences of these experimental solubility results on BCS classification, dose-adjusted in silico predictions of the fraction absorbed in humans were performed using GastroPlus®. Further expansion of these experimental efforts to qualified APIs from the WHO Essential Medicines List is anticipated to empower regulatory authorities across the globe to issue scientifically-supported guidance regarding the necessity of performing in vivo bioequivalence studies. Ultimately, this will improve access to affordable generic products, which is a critical prerequisite to reach Universal Health Coverage
Biodisponibilidade oral do 4-nerolidilcatecol isolado e em extrato bruto de Pothomorphe umbellata (L) Miq. administrado a ratos sprague dawley
Get PDFO 4-nerolidilcatecol é o metabólito secundário mais abundante do extrato hidroalcóolico liofilizado de raízes de Pothomorphe umbellata (Piperaceae), representando 21,5% deste. Doses únicas de 10 mg/kg da substância isolada foram administradas via intravascular e oral a ratos Sprague Dawley, pesando entre 300-325 g. Paralelamente à obtenção dos parâmetros farmacocinéticos, realizou-se a avaliação da biodisponibilidade do extrato de raízes com a administração de dose oral única de 100 mg/kg. A quantificação das concentrações plasmáticas foi realizada por CLAE-EM/EM, com limite de quantificação de 2,5 ng/mL. O coeficiente variação da precisão intraensaio e interensaio variou entre 2,9-10,1 e 4,2-16,3 %, respectivamente. A exatidão do método oscilou entre 84,4 e 92,4 %. Os parâmetros farmacocinéticos foram gerados no programa Kinetica 2000 (Innaphase), a partir de dados experimentais. Para administração intravascular do 4-nerolidilcatecol (10 mg/kg) obteve-se um volume de distribuição de 0,47 litro, meia-vida (t½c) e (t½β) de 6,08 e 47,63 min, respectivamente. A área sob a curva de concentração plasmática vs tempo (AUC) foi de 187,06 µg/mL/min e o \"clearance\" de 53,46 mL/min. O pico de concentração plasmática máxima (Cmax) alcançado foi de 34,90 ng/mL, com t max de 23 min após administração oral do 4-NRC isolado. Este apresentou biodisponibilidade oral média de 2,7 %. Valor próximo foi obtido para o extrato de Pothomorphe umbellata com biodisponibilidade de 1,1 %, ou seja, um terço do valor obtido para a substância isolada. Boa correlação entre os dados teóricos e experimentais foi obtida. Tais dados estão de acordo com o perfil de drogas lipossolúveis, as quais apresentam-se amplamente distribuídas e com baixos níveis plasmáticos.4-nerolidylcatechol (4-NRC) is the major constituent of a Piperaceae shrub, Pothomorphe umbellate (L.) Miq. Standardization of dry hydroalcoholic roots extract showed 21,5% of 4-NRC contents. The isolated compound was administrated intravenouslly or orally to rats Sprague Dawley at 10 mg/kg single dose. The crude extract was given at 100 mg/kg. Both pure compound and extract was dissolved in 30 % hydroxypropyl-β-cyclodextrin. The purpose of this work was to investigate the pharmacokinetic profile and the bioavailability of 4-NRC after oral administration. The assessement of plasma concentration was done with CLAE-EM/EM and the quantification limit was found to be 2.5 ng/mL. Linear response was done between 2.5-100 ng/mL and correlation coeficients were not lower than 0.98. Between batch and within-batch variation coeficient ranged from 2,9-10,1 and 4,2-16,3 %, respectively. Accuracy showed values between 84.4-92.4%. The pharmacokinetic parameters following intravenous and oral administration were calculated using Kinetica 2000 (Innaphase). Reported values for i.v. bollus volume of distribution was 0.47 L, and 6.08 min for elimination half-life (t½c). Area under the curve (AUC) was 187.06 µg/mL.min and total body clearance (CL) measured was 53.46 mL/min. The absortion peak plasma concentration (Cmax) was 34.90 ng/mL, reached after 23 min after oral dose administration. The calculated bioavailability for 4-NRC was 2,7%. Despite higher dose of 4-NRC in roots\' extract (21.5 mg/kg), its bioavailability was lower (1.1%). In fact, it was around one third of that one for pure compound. The data could be described with good fits indicating the drug is well distributed and highly metabolized. Plasma levels were found to be low as expected for lipophilic phenolic drug
Estrutura e atividade biológica de lignanas ariltetralônicas e derivados de Virola sebifera
Get PDFOs extratos das sementes de Virola sebifera foi fracionado através de técnicas cromatográficas conduzindo ao isolamento de quatro neolignanas ariltetralônicas (7\'R,8 \'S,8S)-7-hidroxi-3,4,3,4-dimetilenodioxi-7-oxo-2,7-8,8-neolignana(1a); (7\'R,8\'S,8S)-3,4,3\',4 \'-dimetilenodioxi-7-oxo-2,7\',8,8\'-neolignana (1b); (8R,7\'S,8\'R)-4,5-dimetoxi-3\' ,4\'metilenodioxi-7-oxo-2,7\' ,8.8\'-neolignana (2a) e (8R,7\'S,8\'R)-7\'-hidroxi-4,5-dimetoxi-3\',4\'metilenodioxi-7-oxo-2,7\',8.8\'-neolignana (2b) e uma neolignana diarilbutânica (8S,7\'S,8\'S)-7-acetoxi-3,4-dimetoxi-3\' ,4\'-metilenodioxi-7.1-seco-6.7\' ,8.8\'-neolignana (4), previamente descritas na literatura. São descritos ainda dois novos produtos naturais com esqueleto ariltetralônico e secotetralínico, respectivamente: (7\'R,8\'S,8S)-2\'-hidroxi-3,4,4\' ,5\'-dimetilenodioxi-7-oxo-2,7\'-8,8\'-neolignana (1c) e (8R,8\'R)-3,4,3\' ,4\' ,7.7\'dioxo, 8.8\'-neolignana (3). As neolignanas isoladas em quantidade foram derivatizadas e avaliadas quanto ao seu potencial biológico. No ensaio antitumoral com leveduras mutantes de Saccharomyces cerevisiae, as neolignanas e os derivados testados foram inativos. No ensaio antifúngico com Cladosporium cladosporioides apenas (1b) e (1c) demonstraram discreta atividade. No ensaio com desovas de Biomphalaria glabrata, a Cl50 para (1b) e (1c) foi 11,7 e 8,5 µg/mL, respectivamente. No ensaio antioxidante, as neolignanas mais ativas apresentaram hidroxilas fenólicas livres 1c, Cat-1a, Cat-2a demonstrando atividade, em média, quarenta vezes maior que o α- tocoferol.Ethyl acetate extract of Virola sebifera seeds was fractionated by chromatographic techniques yielding four aryltetralonic neolignans previously described: (7\'R,8\'S,8S)-7-hydroxy-3,4,3\',4\'-dimethylenedioxy-7-oxo-2,7\'-8,8\'-neolignan (1a); (7\'R,8\'S,8S)-3,4,3\' ,4\'-dimethylenedioxy-7-oxo-2,7\',8,8\'-neolignan (1b); (8R,7\'S,8\'R)-4,5-dimethoxy-3\',4\'-methylenedioxy-7-oxo-2,7\' ,8.8\'-neolignan (2a) e (7\'S,8\'R)-7\'-hydroxy-4,5-dimethoxy-3\',4\'-methylenedioxy-7-oxo-2,7\',8.8\'-neolignan (2b) and one diarylbutanic neolignan (8S,7\'S,8 \'S)-7-acetoxy-3,4-dimethoxy-3\',4\'-methylenedioxy-7.1-seco-6.7\',8.8\'-neolignan (4). Furthermore, a new aryltetralonic and a diarylbutanic neolignans were described: (7\'R,8\'S,8S)-2\'-hydroxy-3,4,4\'5\'-dimethoxy-7-oxo-2,7\'-8,8\'neolignan-(1c) and (8R,8\'R)-3,4,3\',4\',7.7\'-dioxo,8.8\'-neolignan (3). None of the isolated or derivatized neolignans showed antitumoral activity based on the low growth inhibition effect on mutant strains of Saccharomyces cerevisiae. The antifungal assay using Cladosporium cladosporioides showed slight activity for (1b) and (1c) . The moluscicidal assay on Biomphalaria glabrata indicated high activity for (1b)and (1c)with LC50 of 11,7 and 8,5 µg/mL, respectively. As expected, the deprotection of (1a) and (2a) neolignans, yielding the corresponding catechols, increased forty times the antioxidant activity as compared to α-tocopherol. Similar activity was observed to the new neolignan bearing one free hydroxyl group (1c)
Quantification of 4-nerolidylcatechol from Pothomorphe umbellata (Piperaceae) in rat plasma samples by HPLC-UV Quantificação de 4-nerolidilcatecol de Pothomorphe umbellata (Piperaceae) em amostras de plasma de rato por CLAE-UV
Get PDFThe oral dosages formulations from Pothomorphe umbellata (Piperaceae) can only be therapeutically evaluated after establishing 4-nerolidylcatechol (4-NRC) pharmacokinetic profile in plasma. For that purpose, a unique analytical method validation using HPLC-UV detection was developed for analysis of rat plasma samples. The animals received 10 mg/kg b.w. of 4-NRC i.v.. Analytical conditions were set with C18 column, methanol: acetonitrile: water (62:20:18) as mobile phase, and a flow rate of 1.6 mL/min. The assay was linear from 1.0 - 80.0 mcg/mL. The recovery procedure was performed by liquid-liquid extraction showing quantitative extraction (106.4±8.7%). Limit of Quantification (LOQ) was found to be 1.0 mcg/mL. Interassay precision and accuracy ranged from values of 14.4-3.0% and 24.0-0.2%, respectively. Recovery after liquid-liquid extraction was found to be 106.5 ± 3%. The method is simple and reliable with total run time of less than 15 min.<br>O 4-nerolidilcatecol representa o metabólito secundário mais abundante de Pothomorphe umbellata (Piperaceae), cujo uso terapêutico deve ser fundamentado após a caracterização farmacocinética do mesmo (4-nerolidicatecol). Os níveis séricos de animais tratados com 10 mg/kg do fármaco i.v. foram avaliados por validação analítica em CLAE-UV. As condições cromatográficas empregadas foram fase móvel de acetonitrila:metanol:água (62:20:18), coluna RP-18, fluxo de 1,6 mL/min e detector UV em 282 nm, com tempo total de corrida inferior a 15 minutos. Observou-se linearidade do 4-NRC em plasmas na faixa de 1,0 a 80,0 mcg/mL, com valores de precisão e exatidão entre 14,4-3,0% e 24,0-0,2%, respectivamente. O procedimento de extração líquido-líquido apresentou reprodutível e com recuperação quantitativa (106,5%±3,0%)
PRÉ-VALIDAÇÃO DE MÉTODO ANALITICO PARA PSORALENO E BERGAPTENO EM AMOSTRAS DE MICRODIÁLISE, POR HPLC-PDA
No full textIntrodução e objetivos: Os psoralenos são notáveis fotossensibilizantes químicos1. É necessário um método analítico sensível para quantificar o psoraleno e o bergapteno em amostras de microdiálise obtidas para estudos farmacocinéticos. Este trabalho avaliou os critérios de pré-validação analítica para o método cromatográfico desenvolvido. Metodologia: Amostras analizadas em HPLC-PDA Thermo Accela 600, em 245 nm, coluna ACE C18 (4,0×150 mm, 5 μm), acetonitrila:ácido acético 0,8% (32:68, v/v) e vazão de 1,0 mL/min. A seletividade foi verificada mediante detecção seletiva dos componentes da solução de Ringer nos tempos de retenção dos analitos. Avaliou-se a linearidade em faixa dinâmica (7 pontos, duplicatas diárias); a precisão e exatidão através dos controles de qualidade (0,1; 2,5 e 4,5 μg/mL), triplicatas diárias. O limite de quantificação foi analisado em quintuplicatas de amostras diárias. Resultados e discussões: Durante os dois dias de análise o método apresentou seletividade e linearidade na faixa de concentração avaliada (0,015-5,000 e 0,035-5,000 μg/ml, respectivamente; r> 0,99); Limite de quantificação de 0,015 e 0,035 μg/mL (DPR: 2,88 e 2,71%). Precisão de 1,22-4,89% para psoraleno e 0,76-4,27% para bergapteno. Exatidão de 97,27-98,65% e 95,66-98,72%, respectivamente. Conclusão: O método apresentou seletividade, linearidade, precisão e exatidão, potencial adequação farmacocinéticos após subsequente validação. Agradecimentos
CONDIÇÕES PRELIMINARES DE VALIDAÇÃO DA SONDA DE MICRODIÁLISE APLICADA A AVALIAÇÃO TÓPICA DO VITICROMIN®
No full textIntrodução e objetivos: A ligação dos fármacos às proteínas plasmáticas é importante paradeterminação das propriedades farmacodinâmicas e farmacocinéticas destes. A microdiáliseconstitui-se numa importante ferramenta de amostragem contínua in vivo da fração livre parasubstâncias relativamente polares e de baixo peso molecular1,2. As condições desta amostragemdevem ser adequadamente validadas previamente aos estudos in vivo3. O objetivo do trabalhofoi investigar a recuperação in vitro do psoraleno e do bergapteno, marcadores químicos doViticromin®, através da sonda per cutanea (CMA 20 linear), sob distintas condições.Metodologia: Uma solução de Ringer foi bombeada através da sonda de microdiálise imersaem solução de psoraleno e bergapteno (1μg/mL). Três diferentes vazões foram investigadas: 2,3 e 5 μl/min. Posteriormente a período de equilíbrio (210, 180 e 120 min, respectivamente) ascoletas foram feitas em intervalos regulares de 15/15 min e analisadas utilizando metodologiapré-validada (C18 150x4,0mm 5μm, ACN:CH3COOH 0,8% 32:68, 1μL/min, 245nm, HPLCPDA).Resultados e discussões: A recuperação obtida para o psoraleno/bergapteno, em cadauma das respectivas vazões, foi de 46,4+1,4%/39,7+1,2% (n=3); 23,2+2,0%/16,1+1,4% (n=3) e,12,9+3,8%/10,0+1,6% (n=2). Os dados evidenciaram que quanto menor a vazão do perfusatoatravés da sonda, maior a recuperação dos analitos3,4,. Conclusões: Após análise das condiçõespreliminares, a calibração da sonda de microdiálise deverá ser conduzida empregando-se avazão de 2 μL/min (n=02)
PRÉ-VALIDAÇÃO DE MÉTODO ANALITICO PARA PSORALENO E BERGAPTENO EM AMOSTRAS DE MICRODIÁLISE, POR HPLC-PDA
Get PDFIntrodução e objetivos: Os psoralenos são notáveis fotossensibilizantes químicos1. É necessário um método analítico sensível para quantificar o psoraleno e o bergapteno em amostras de microdiálise obtidas para estudos farmacocinéticos. Este trabalho avaliou os critérios de pré-validação analítica para o método cromatográfico desenvolvido. Metodologia: Amostras analizadas em HPLC-PDA Thermo Accela 600, em 245 nm, coluna ACE C18 (4,0×150 mm, 5 μm), acetonitrila:ácido acético 0,8% (32:68, v/v) e vazão de 1,0 mL/min. A seletividade foi verificada mediante detecção seletiva dos componentes da solução de Ringer nos tempos de retenção dos analitos. Avaliou-se a linearidade em faixa dinâmica (7 pontos, duplicatas diárias); a precisão e exatidão através dos controles de qualidade (0,1; 2,5 e 4,5 μg/mL), triplicatas diárias. O limite de quantificação foi analisado em quintuplicatas de amostras diárias. Resultados e discussões: Durante os dois dias de análise o método apresentou seletividade e linearidade na faixa de concentração avaliada (0,015-5,000 e 0,035-5,000 μg/ml, respectivamente; r> 0,99); Limite de quantificação de 0,015 e 0,035 μg/mL (DPR: 2,88 e 2,71%). Precisão de 1,22-4,89% para psoraleno e 0,76-4,27% para bergapteno. Exatidão de 97,27-98,65% e 95,66-98,72%, respectivamente. Conclusão: O método apresentou seletividade, linearidade, precisão e exatidão, potencial adequação farmacocinéticos após subsequente validaçã
