B-Raf and CRHR1 internalization mediate biphasic ERK1/2 activation by CRH in hippocampal HT22 Cells.

CRH is a key regulator of neuroendocrine, autonomic, and behavioral response to stress. CRH-stimulated CRH receptor 1 (CRHR1) activates ERK1/2 depending on intracellular context. In a previous work, we demonstrated that CRH activates ERK1/2 in limbic areas of the mouse brain (hippocampus and basolateral amygdala). ERK1/2 is an essential mediator of hippocampal physiological processes including emotional behavior, synaptic plasticity, learning, and memory. To elucidate the molecular mechanisms by which CRH activates ERK1/2 in hippocampal neurons, we used the mouse hippocampal cell line HT22. We document for the first time that ERK1/2 activation in response to CRH is biphasic, involving a first cAMP- and B-Raf-dependent early phase and a second phase that critically depends on CRHR1 internalization and ß-arrestin2. By means of mass-spectrometry-based screening, we identified B-Raf-associated proteins that coimmunoprecipitate with endogenous B-Raf after CRHR1 activation. Using molecular and pharmacological tools, the functional impact of selected B-Raf partners in CRH-dependent ERK1/2 activation was dissected. These results indicate that 14-3-3 proteins, protein kinase A, and Rap1, are essential for early CRH-induced ERK1/2 activation, whereas dynamin and vimentin are required for the CRHR1 internalization-dependent phase. Both phases of ERK1/2 activation depend on calcium influx and are affected by calcium/calmodulin-dependent protein kinase II inactivation. Thus, this report describes the dynamics and biphasic nature of ERK1/2 activation downstream neuronal CRHR1 and identifies several new critical components of the CRHR1 signaling machinery that selectively controls the early and late phases of ERK1/2 activation, thus providing new potential therapeutic targets for stress-related disorders.Fil: Bonfiglio, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque. Centenario. Instituto de Investigación En Biomedicina de Buenos Aires - Conicet -; Instituto P; Argentina;Fil: Inda, Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque. Centenario. Instituto de Investigación En Biomedicina de Buenos Aires - Conicet -; Instituto P; Argentina;Fil: Senin, Sergio Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque. Centenario. Instituto de Investigación En Biomedicina de Buenos Aires - Conicet -; Instituto P; Argentina;Fil: Maccarrone, Giuseppina. Max-Planck-Institut Für Psychiatrie; Alemania;Fil: Refojo, Damian. Max-Planck-Institut Für Psychiatrie; Alemania;Fil: Giacomini, Damiana Paula. Consejo Nacional de Invest.cientif.y Tecnicas. Oficina de Coordinacion Administrativa Pque. Centenario. Instituto de Invest.bioquimicas de Bs.as(i); Argentina;Fil: Turck, Christoph W.. Max-Planck-Institut Für Psychiatrie; Alemania;Fil: Holsboer, Florian. Max-Planck-Institut Für Psychiatrie; Alemania;Fil: Arzt, Eduardo Simon. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque. Centenario. Instituto de Investigación En Biomedicina de Buenos Aires - Conicet -; Instituto P; Argentina;Fil: Silberstein, Susana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque. Centenario. Instituto de Investigación En Biomedicina de Buenos Aires - Conicet -; Instituto P; Argentina

Molecular mechanisms involved in CRH signaling in the central nervous system

La hormona liberadora de corticotrofina (CRH) juega un rol clave en la coordinación de la respuesta neuroendocrina, autonómica, inmune y comportamental frente al estrés. Se ha visto que el receptor de CRH de tipo 1 (CRHR1) estimulado por CRH activa ERK1/2 en función del contexto celular. En trabajos previos realizados en nuestro laboratorio, demostramos que CRH activa ERK1/2 en zonas límbicas del cerebro de ratón (hipocampo y amígdala basolateral). ERK1/2 es un mediador esencial de los procesos fisiológicos del hipocampo, incluyendo el comportamiento emocional, la plasticidad sináptica, el aprendizaje y la memoria. Para dilucidar los mecanismos moleculares mediante los cuales CRH activa ERK1/2 en neuronas del hipocampo, utilizamos una línea celular ampliamente empleada como modelo neuronal hipocampal, las HT22. En este trabajo demostramos por primera vez que la activación de ERK1/2 en respuesta a CRH es de tipo bifásica, con una primera fase mediada por cAMP y B-Raf, y una segunda fase que depende fundamentalmente de la proteína β-arrestina2 y de la internalización de CRHR1. Teniendo en cuenta el hecho de que las interacciones biomoleculares juegan un papel crucial en la mayoría de los procesos celulares, decidimos analizar el interactoma de B-Raf mediante estudios de espectrometría de masa. En una primera etapa describimos el interactoma de B-Raf en células en estado basal. Habiendo encontrado interactores de esta MAPKKK que podrían ser componentes clave en la regulación de la señalización vía B-Raf- MEK1/2-ERK1/2, nos propusimos, en una segunda etapa, estudiar complejos proteicos asociados a B-Raf después de la activación de CRHR1 a tiempos cortos, donde B-Raf juega un rol clave. Usando herramientas farmacológicas y moleculares, evaluamos el impacto funcional de algunas de las proteínas identificadas en asociación a B-Raf en dichos tiempos cortos. Nuestros resultados indican que las proteínas 14-3-3, PKA, y Rap1, son esenciales para la etapa temprana de activación de ERK1/2 inducida por CRH, mientras que dinamina y vimentina son necesarias para la fase dependiente de la internalización de CRHR1. Demostramos que ambas fases de pERK1/2 dependen de la entrada de calcio y se ven afectadas por la inhibición de la CaMKII. Por lo tanto, este trabajo describe la dinámica y la naturaleza bifásica de la activación de ERK1/2 río abajo CRHR1 en un contexto neuronal e identifica nuevos componentes críticos de la maquinaria de señalización de CRHR1 que controlan selectivamente, o bien la fase temprana, o bien la fase tardía de la activación de ERK1/2, proporcionando así nuevos posibles blancos terapéuticos para trastornos relacionados con el estrés.Corticotropin-releasing hormone (CRH) is a key regulator of neuroendocrine, immune, autonomic and behavioral response to stress. CRH-stimulated CRH receptor 1 (CRHR1) activates ERK1/2 depending on intracellular context. In a previous work from our laboratory, we demonstrated that CRH activates ERK1/2 in limbic areas of the mouse brain (hippocampus and basolateral amygdala). ERK1/2 is an essential mediator of hippocampal physiological processes including emotional behavior, synaptic plasticity, learning and memory. To elucidate the molecular mechanisms by which CRH activates ERK1/2 in hippocampal neurons, we employed the mouse hippocampal cell line HT22, widely used as a model of hippocampal neuronal cells. We document for the first time that ERK1/2 activation in response to CRH is biphasic, involving a first cAMP and B-Raf-dependent early phase, and a second phase that critically depends on CRHR1 internalization and β-arrestin2. Considering the fact that biomolecular interactions play a crucial role in many cellular processes, we decided to analyze the B-Raf interactome by means of mass spectrometry analysis. In a first step, we described the B-Raf interactome in non-stimulated cells. Having found interactors of this MAPKKK which could be key components in the regulation of the B-Raf-MEK1/2-ERK1/2 signaling pathway, we decided, in a second stage, to study the B-Raf partners after CRHR1 activation at short times, where B-Raf plays a key role. Using molecular and pharmacological tools, the functional impact of selected B-Raf partners in CRH-dependent ERK1/2 activation was dissected. Our results indicate that 14-3-3 proteins, PKA, and Rap1, are essential for early CRHinduced ERK1/2 activation, whereas dynamin and vimentin are required for CRHR1 internalization-dependent phase. Both phases of ERK1/2 activation depend on calcium influx and are affected by CaMKII inactivation. Thus, this report describes the dynamics and biphasic nature of ERK1/2 activation downstream neuronal CRHR1 and identifies several new critical components of the CRHR1 signaling machinery that selectively controls the early and late phases of ERK1/2 activation, thus providing new potential therapeutical targets for stress-related disorders.Fil:Bonfiglio, Juan José. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina

La federalización del sector agropecuario. Avances y retos en el caso de Nuevo León

A pesar de que México es un país federalista, en la práctica ha prevalecido la centralización política, económica y administrativa. La crisis del estado de bienestar en 1982, disminuyó su capacidad de responder a las crecientes demandas ciudadanas. Desde entonces, la Reforma del Estado ha buscado, entre otras, la creciente descentralización de la administración pública federal. Este trabajo muestra los recientes intentos por reforzar el federalismo mexicano, analizando el caso de la federalización del sector agropecuario de Nuevo León, que si bien se ha quedado en los hechos en una descentralización administrativa y no en un verdadero federalismo, ha logrado mejorar la eficiencia de los programas de atención al campo y a los productores

The corticotropin-releasing hormone network and the hypothalamic-pituitary- adrenal axis: Molecular and cellular mechanisms involved

Corticotropin-releasing hormone (CRH) plays a key role in adjusting the basal and stress-activated hypothalamic-pituitary-adrenal axis (HPA). CRH is also widely distributed in extrahypothalamic circuits, where it acts as a neuroregulator to integrate the complex neuroendocrine, autonomic, and behavioral adaptive response to stress. Hyperactive and/or dysregulated CRH circuits are involved in neuroendocrinological disturbances and stress-related mood disorders such as anxiety and depression. This review describes the main physiological features of the CRH network and summarizes recent relevant information concerning the molecular mechanism of CRH action obtained from signal transduction studies using cells and wild-type and transgenic mice lines. Special focus is placed on the MAPK signaling pathways triggered by CRH through the CRH receptor 1 that plays an essential role in CRH action in pituitary corticotrophs and in specific brain structures. Recent findings underpin the concept of specific CRH-signaling pathways restricted to specific anatomical areas. Understanding CRH action at molecular levels will not only provide insight into the precise CRH mechanism of action, but will also be instrumental in identifying novel targets for pharmacological intervention in neuroendocrine tissues and specific brain areas involved in CRH-related disorders.Fil: Bonfiglio, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Inda, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Refojo, Damian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Holsboer, Florian. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Arzt, Eduardo Simon. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Silberstein Cuña, Susana Iris. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular. Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular; Argentin

Interplay of Histone Marks with Serine ADP-Ribosylation

Summary: Serine ADP-ribosylation (Ser-ADPr) is a recently discovered protein modification that is catalyzed by PARP1 and PARP2 when in complex with the eponymous histone PARylation factor 1 (HPF1). In addition to numerous other targets, core histone tails are primary acceptors of Ser-ADPr in the DNA damage response. Here, we show that specific canonical histone marks interfere with Ser-ADPr of neighboring residues and vice versa. Most notably, acetylation, but not methylation of H3K9, is mutually exclusive with ADPr of H3S10 in vitro and in vivo. We also broaden the O-linked ADPr spectrum by providing evidence for tyrosine ADPr on HPF1 and other proteins. Finally, we facilitate wider investigations into the interplay of histone marks with Ser-ADPr by introducing a simple approach for profiling posttranslationally modified peptides. Our findings implicate Ser-ADPr as a dynamic addition to the complex interplay of modifications that shape the histone code. : Bartlett et al. demonstrate that serine ADP-ribosylation and proximal phosphorylation and acetylation are mutually exclusive at the N-terminal tails of core histones. They also expand the repertoire of ADP-ribosylation target residues by providing evidence for tyrosine ADP-ribosylation on HPF1 and several other proteins. Keywords: PARP1, HPF1, serine ADP-ribosylation, histone code, histone crosstalk, tyrosine ADP-ribosylation, DNA damage, nucleosom

Characterization of a Protein Interactome by Co-Immunoprecipitation and Shotgun Mass Spectrometry

Identifying the partners of a given protein (the interactome) may provide leads about the protein’s function and the molecular mechanisms in which it is involved. One of the alternative strategies used to characterize protein interactomes consists of co-immunoprecipitation (co-IP) followed by shotgun mass spectrometry. This enables the isolation and identifi cation of a protein target in its native state and its interactome from cells or tissue lysates under physiological conditions. In this chapter, we describe a co-IP protocol for interactome studies that uses an antibody against a protein of interest bound to protein A/G plus agarose beads to isolate a protein complex. The interacting proteins may be further fractionated by SDS-PAGE, followed by in-gel tryptic digestion and nano liquid chromatography high-resolution tandem mass spectrometry (nLC ESI-MS/MS) for identifi cation purposes. The computational tools, strategy for protein identifi cation, and use of interactome databases also will be described.Fil: Maccarrone, Giuseppina. Max Planck Institute Of Psychiatry; AlemaniaFil: Bonfiglio, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Silberstein Cuña, Susana Iris. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Turck, Christoph W.. Max Planck Institute Of Psychiatry; AlemaniaFil: Martins de Souza, D.. Universidade Estadual de Campinas; Brasi

Characterization of the B-Raf interactome in mouse hippocampal neuronal cells

B-Raf links a variety of extracellular stimuli downstream of cell surface receptors, constituting a determining factor in the ability of neurons to activate ERK. A detailed study of the B-Raf interactome is necessary to clarify the intricacy of B-Raf-dependent signal transduction. We used a mouse hippocampal cell line (HT22) that expresses B-Raf at high levels, to identify B-Raf associated proteins under endogenous expression conditions, avoiding artificial interactions from overexpression studies. We used stringent procedures to co-immunoprecipitate proteins that specifically associate with endogenous B-Raf with the help of gel electrophoresis separation and off-line LC-MALDI-MS/MS proteomic analysis. Our stringent protein identification criteria allowed confident identification of B-Raf interacting proteins under non-stimulating conditions. The presence of previously reported B-Raf interactors among the list of proteins identified confirms the quality of proteomic data. We identified tubulin and actin as B-Raf interactors for the first time, among structural and accessory proteins of cell cytoskeleton, molecular chaperones (Hsc70, GRP78), and cellular components involved in aspects of mRNA metabolism and translation. Interactions were validated in HT22 cells and in the neuronal cell line Neuro-2a providing further evidence that the identified proteins are B-Raf interactors, which constitute a basis for understanding MAPK pathway regulation in neurons.Fil: Bonfiglio, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Maccarrone, Giuseppina. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Rewerts, Christiane. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Holsboer, Florian. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Arzt, Eduardo Simon. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; ArgentinaFil: Turck, Christoph W.. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Silberstein Cuña, Susana Iris. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Ciudad Universitaria. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias; Argentin

CAMP-dependent cell differentiation triggered by activated CRHR1 in hippocampal neuronal cells

Corticotropin-releasing hormone receptor 1 (CRHR1) activates the atypical soluble adenylyl cyclase (sAC) in addition to transmembrane adenylyl cyclases (tmACs). Both cAMP sources were shown to be required for the phosphorylation of ERK1/2 triggered by activated G protein coupled receptor (GPCR) CRHR1 in neuronal and neuroendocrine contexts. Here, we show that activated CRHR1 promotes growth arrest and neurite elongation in neuronal hippocampal cells (HT22-CRHR1 cells). By characterising CRHR1 signalling mechanisms involved in the neuritogenic effect, we demonstrate that neurite outgrowth in HT22-CRHR1 cells takes place by a sAC-dependent, ERK1/2-independent signalling cascade. Both tmACs and sAC are involved in corticotropin-releasing hormone (CRH)-mediated CREB phosphorylation and c-fos induction, but only sAC-generated cAMP pools are critical for the neuritogenic effect of CRH, further highlighting the engagement of two sources of cAMP downstream of the activation of a GPCR, and reinforcing the notion that restricted cAMP microdomains may regulate independent cellular processes.Fil: Inda, María Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Bonfiglio, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Dos Santos Claro, Paula Ayelen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Senin, Sergio Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Armando, Natalia Giannina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Deussing, Jan M.. Max Planck Institute Of Psychiatry; AlemaniaFil: Silberstein Cuña, Susana Iris. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; Argentin

RSUME inhibits VHL and regulates its tumor supressor function

Somatic mutations or loss of von Hippel-Lindau (pVHL) happen in the majority of VHL disease tumors, which present a constitutively active Hypoxia Inducible Factor (HIF), essential for tumor growth. Recently described mechanisms for pVHL modulation shed light on the open question of the HIF/pVHL pathway regulation. The aim of the present study was to determine the molecular mechanism by which RSUME stabilizes HIFs, by studying RSUME effect on pVHL function and to determine the role of RSUME on pVHL-related tumor progression. We determined that RSUME sumoylates and physically interacts with pVHL and negatively regulates the assembly of the complex between pVHL, Elongins and Cullins (ECV), inhibiting HIF-1 and 2alpha ubiquitination and degradation. We found that RSUME is expressed in human VHL tumors (renal clear-cell carcinoma (RCC), pheochromocytoma and hemangioblastoma) and by overexpressing or silencing RSUME in a pVHL-HIF-oxygen-dependent degradation stability reporter assay, we determined that RSUME is necessary for the loss of function of type 2 pVHL mutants. The functional RSUME/pVHL interaction in VHL-related tumor progression was further confirmed using a xenograft assay in nude mice. RCC clones, in which RSUME was knocked down and express either pVHL wt or type 2 mutation, have an impaired tumor growth, as well as HIF-2alpha, vascular endothelial growth factor A and tumor vascularization diminution. This work shows a novel mechanism for VHL tumor progression and presents a new mechanism and factor for targeting tumor-related pathologies with pVHL/HIF altered function.Fil: Gerez, Juan Atilio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Tedesco, Lucas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Bonfiglio, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Fuertes, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Barontini, Marta Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada". Fundación de Endocrinología Infantil. Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergada"; ArgentinaFil: Silberstein Cuña, Susana Iris. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Wu, Y.. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Renner, U.. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Paez Pereda, M.. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Holsboer, F.. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Stalla, G. K.. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Arzt, Eduardo Simon. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; Argentin

Protein stabilization by RSUME accounts for PTTG pituitary tumor abundance and oncogenicity

Increased levels of the proto-oncogene pituitary tumor-transforming gene 1 (PTTG) have been repeatedly reported in several human solid tumors, especially in endocrine-related tumors such as pituitary adenomas. Securin PTTG has a critical role in pituitary tumorigenesis. However, the cause of upregulation has not been found yet, despite analyses made at the gene, promoter and mRNA level that show that no mutations, epigenetic modifications or other mechanisms that deregulate its expression may explain its overexpression and action as an oncogene. We describe that high PTTG protein levels are induced by the RWD-containing sumoylation enhancer (RWDD3 or RSUME), a protein originally identified in the same pituitary tumor cell line in which PTTG was also cloned. We demonstrate that PTTG and RSUME have a positive expression correlation in human pituitary adenomas. RSUME increases PTTG protein in pituitary tumor cell lines, prolongs the half-life of PTTG protein and regulates the PTTG induction by estradiol. As a consequence, RSUME enhances PTTG transcription factor and securin activities. PTTG hyperactivity on the cell cycle resulted in recurrent and unequal divisions without cytokinesis, and the consequential appearance of aneuploidies and multinucleated cells in the tumor. RSUME knockdown diminishes securin PTTG and reduces its tumorigenic potential in a xenograft mouse model. Taken together, our findings show that PTTG high protein steady state levels account for PTTG tumor abundance and demonstrate a critical role of RSUME in this process in pituitary tumor cells.Fil: Fuertes, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Sapochnik, Melanie Denise. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Tedesco, Lucas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Senin, Sergio Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Attorresi, Alejandra Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Ajler, Pablo. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Carrizo, G.. Hospital Italiano; ArgentinaFil: Cervio, A.. Fundación para la Lucha contra las Enfermedades Neurológicas de la Infancia; ArgentinaFil: Sevlever, Gustavo. Fundación para la Lucha contra las Enfermedades Neurológicas de la Infancia; ArgentinaFil: Bonfiglio, Juan José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; ArgentinaFil: Stalla, G. K.. Max Planck Institute of Psychiatry; AlemaniaFil: Arzt, Eduardo Simon. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Investigación en Biomedicina de Buenos Aires - Instituto Partner de la Sociedad Max Planck; Argentin