Ethanolic extract of Copaifera, Croton and Lippia on the control of phytopathogenic fungi

The search for vegetable extracts for phytosanitary control has been expanded to find new active ingredients to control plant diseases. This study aimed to evaluate thein vitroeffect of the fixed constituents of Copaifera luetzelburgii, Croton zehntneriandLippia lasiocalycina, at the concentrations of 2, 20, 200 and 2,000 μg mL-1, on the percentage of mycelial growth inhibition of Colletotrichum siamense, C. truncatum,Fusarium sacchari,F.udum,Lasiodiplodia theobromaeandThielaviopsis ethacetica, as well as the conidium concentration ofC. siamense,F. sacchariandF. udum produced in culture medium with all the extracts. The tested ethanolic extract, especially at the highest concentration, inhibited the percentage of mycelial growth and/or conidium concentration of the evaluated fungi. The other concentrations showed low inhibitory effects or no activity against the fungi. The average values for percentage of mycelial growth inhibition of the ethanolic extract fromL. lasiocalycina,C. zehntneriandC. luetzelburgiiagainst the six fungi were 62.5, 53.4 and 51.0 %, respectively. The ethanolic extract of L. lasiocalycinashowed the most significant effect on the percentage of mycelial growth inhibition and conidia concentration. The fixed constituents ofC.luetzelburgii,C. zehntneriandL.lasiocalycina at 2,000 μg mL-1 showed to be efficient in inhibiting the mycelial growth of C. siamense,C. truncatum,F. sacchari, F.udum, L. theobromaeandT. ethacetica, and inhibit the conidia production ofC. siamense,F. sacchariandF.udum

Viral determinants associated with the distinct biological properties of two isolates of Lettuce mosaic virus (LMV): Kinetics of viral infection and infection of the embrionary tissues

O mosaico da alface, causado pelo potyvírus Lettuce mosaic virus (LMV), é uma das principais doenças da cultura. A estirpe típica do vírus inclui isolados transmitidos pela semente, mas que não infectam cultivares de alface contendo os alelos de resistência recessivos mo11 e mo12. A estirpe Most inclui isolados transmitidos pela semente e que infectam tais cultivares. O isolado brasileiro AF199 pertence à estirpe Most. A taxa de transmissão pela semente desse isolado chega a 16,5%. Esse isolado induz sintomas mais severos em Nicotiana benthamiana e possui período latente mais curto em comparação ao isolado E , coletado na Espanha. Além disso, esse isolado é capaz de induzir necrose sistêmica em certas cultivares de alface. O isolado E infecta cultivares contendo os genes de resistência recessivos, mas não é transmitido pela semente nessas cultivares. O presente trabalho teve como objetivos: (i) analisar os tecidos de óvulos e embriões de alface infectados pelos isolados AF199 e E; (ii) estudar os mecanismos de adaptabilidade dos isolados AF199 e E, e de três recombinantes obtidos entre eles, na cultivar de alface Salinas 88 e em N. benthamiana. O isolado AF199 foi detectado em todos os tecidos de óvulos coletados antes ou após a fertilização. Já o isolado E não foi detectado em nenhum dos tecidos do óvulo, antes ou após a fertilização. Esses resultados indicam que a não transmissão pela semente do isolado E se deve ao fato das partículas virais não serem capazes de atingir o tecido reprodutivo feminino, e sugerem que fatores relacionados ao movimento do vírus na planta podem estar envolvidos no processo de transmissão do LMV pela semente. A cinética de infecção viral foi analisada em plantas nas quais a folha inoculada foi destacada após diferentes períodos de tempo. O acúmulo de RNA viral foi analisado em folhas inoculadas e não-inoculadas. Os resultados indicam que o isolado AF199 atinge maior concentração nas folhas inoculada e não-inoculada mais cedo que o isolado E, em ambos os hospedeiros. O recombinante Rec1 induziu sintomas distintos dos parentais e acumulou mais em N. benthamiana. O recombinante Rec4 apresentou menor acúmulo dentre todos os isolados/recombinantes testados em N. benthamiana. Em alface, os recombinantes Rec3 e Rec4 apresentaram acúmulo cerca de 10 vezes superior ao isolado AF199. Conclui-se que o isolado AF199, e os recombinantes que possuem a região P1/HC-Pro desse isolado, são mais adaptados do que isolados que possuem essa região do isolado E. Essa melhor adaptação poderia estar relacionada à supressão do silenciamento gênico induzida por P1/HC-Pro.Lettuce mosaic, caused by the potyvirus Lettuce mosaic virus (LMV), is one of the main diseases of lettuce. The type strain of the virus includes isolates which are seed borne in lettuce, but which cannot infect lettuce cultivars harboring the recessive resistance aleles mo11 e mo12. The Most strain includes isolates which are also seed borne and can infect cultivars with the recessive resistance genes. The Brazilian isolate AF199 belongs to the Most strain. Its seed transmission rate can be as high as 16,5%. This isolate induces severe symptoms in Nicotiana benthamiana and has a shorter latent period in comparison to isolate E , collected in Spain. Furthermore, this isolate induces systemic necrosis in some lettuce cultivars. Isolate E can infect cultivars with the recessive resistance genes, but it is not seed borne in these cultivars. The objectives of this work were: (i) to analyze the tissues of ovules and embryos from lettuce plants infected by isolates AF199 and E; (ii) to study the fitness mechanisms of isolates AF199 and E, and of three recombinants obtained between these two isolates, in lettuce Salinas 88 and N. benthamiana. Isolate AF199 was detected in all tissues of ovules collected before and after fertilization. Conversely, isolate E was not detected in any ovule tissues, before or after fertilization. These results suggest that the absence of seed transmission of isolate E is due to the inability of viral particles in reaching the reproductive tissues, and that viral factors related to movement within the plant could be involved in seed transmission. The kinetics of systemic infection was analyzed in plants in which the inoculated leaf was removed after different periods of time. Viral RNA accumulation was analyzed in inoculated and non-inoculated leaves. The results indicate that isolate AF199 reaches a higher concentration in both inoculated and non-inoculated leaves, earlier than isolate E, in both hosts. The recombinant Rec1 induced distinct symptoms and reached a higher titer in N. benthamiana compared to the parental isolates. Rec4 reached the lowest concentration among the isolates/recombinants tested in N. benthamiana. In lettuce, the relative concentrations of the recombinants Rec3 and Rec4 was up to 10-fold higher in comparison to the AF199 isolate. It is concluded that isolate AF199, and those recombinants having the P1/HC-Pro coding region derived from this isolate, are better adapted than isolates having the P1-HC/Pro region derived from isolate E. This better adaptability could be related to the suppression of RNA silencing induced by P1/HC-Pro.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Identificação e variabilidade genética de isolados de Colletotrichum causando antracnose em inflorescências de plantas ornamentais tropicais

A antracnose afeta a qualidade de inflorescências de plantas ornamentais tropicais, e a espécie fúngica Colletotrichum gloeosporioides tem sido relacionada a essa doença apenas por análises morfológicas. Por isso, o presente trabalho teve como objetivos identificar isolados de Colletotrichum coletados em plantas de antúrio (Anthurium andraeanum), bastão do imperador (Etlingera elatior) e helicônia (Heliconia spp.), por meio de caracteres morfológicos e reação em cadeia da polimerase (PCR), e avaliar a variabilidade genética por meio de oligonucleotídeos arbitrários (AP-PCR). Pelas características morfológicas de tamanho de conídio e de apressório, todos os isolados foram identificados como C. gloeosporioides. Um fragmento de 450pb específico para C. gloeosporioides foi amplificado em todos os isolados analisados, com exceção de C 23 e C 35. A caracterização molecular realizada com três oligonucleotídeos arbitrários ((GACAC)3, (GACA)4 e (CAG)5) possibilitou a formação de três grupos de isolados, com padrões de bandas distintos. Portanto, conclui-se que as metodologias utilizadas foram eficientes na identificação de isolados de C. gloeosporioides provenientes das espécies ornamentais avaliadas e que, nos isolados analisados, não existe relação entre a similaridade observada no padrão de bandas obtido por AP-PCR e a área de coleta ou a planta hospedeira.Anthracnose affects inflorescences quality of ornamentals tropical plants and the fungi specie Colletotrichum gloeosporioides has been related with this disease based only on morphology. Therefore, the objectives of this research was to identify Colletotrichum isolates collected on anthurium (Anthurium andraeanum), torch ginger (Etlingera elatior) and heliconia (Heliconia spp.) plants by means of morphology and polymerase chain reaction (PCR) and also verify the genetic variability using arbitrary-primed PCR (AP-PCR). All isolates were identified as C. gloeosporioides by conidium and appressorium size. A fragment of 450bp specific for C. gloeosporioides was amplified for all isolates analyzed, except for C 23 and C 35 isolates. The molecular characterization yielded three groups of isolates with different band patterns by using (GACAC)3, (GACA)4 and (CAG)5 AP-PCR. The employed methodologies were efficient to identify the C. gloeosporioides isolates collected on ornamental plants and there isn't relation between similarity of band patterns and geographic region or plant specie on the isolates analyzed

Thielaviopsis musarum causes postharvest crown and fruit rot of banana in Northeastern Brazil

Crown rot is an important postharvest disease of banana fruit caused by a fungal complex. The development of these microorganisms in the banana favors rot of the fruit and crown, affecting fruit quality and rendering the fruit unsafe to eat. Fungi that cause postharvest rot include species of the complex Thielaviopsis paradoxa. In March 2015, symptoms of crown rot were observed in banana grown in the state of Piauí, Northeastern Brazil. The fruits exhibited rot, usually with signs of a dark gray mycelium; fruits at an advanced stage of rot broke from the stem. Microscopic analysis revealed the presence of primary and secondary conidia as well as aleurioconidia, typical for Thielaviopsis spp. The sexual phase was not observed. The ITS and TEF1-α genes were sequenced and subjected to phylogenetic analysis; consequently, the isolates were identified as Thielaviopsis musarum. In inoculated fruits, the fungus caused black rot, followed by a browning and softening of the pulp. This is the first record of postharvest rot in banana caused by T. musarum in Brazil. © 2016, Sociedade Brasileira de Fitopatologia

Seleção de linhagens de melancia resistentes ao Watermelon mosaic virus e ao Papaya ringspot virus Selection of resistant watermelon lines to Watermelon mosaic virus and Papaya ringspot virus

Foram avaliadas 20 linhagens de melancia, provenientes do cruzamento da cultivar comercial suscetível Crimson Sweet e da introdução PI 595201 resistente ao Watermelon mosaic virus (WMV) e Papaya ringspot virus (PRSV-W). As linhagens, e os parentais foram inoculados com o WMV ou com o PRSV-W em casa-de-vegetação distintas. Aos 35 e 49 dias após a primeira inoculação (DAI), as plantas foram avaliadas por meio de uma escala de notas, em que 1 (ausência de sintomas) a 5 (intenso mosaico e deformações foliares). Pelos resultados infere-se que, aos 35 DAI, as linhagens 1, 2 e 20 apresentaram resistência tanto para o WMV como para o PRSV-W, com médias de 1,95, 1,80 e 2,25 para o WMV, e de 2,50, 2,30 e 2,50 para o PRSV-W, respectivamente. As linhagens 5, 7 e 13 foram resistentes somente ao WMV e as plantas das linhagens 3, 10 e 18 para o PRSV-W. A reação das linhagens permaneceu em geral pouco alterada aos 49 DAI. A existência de linhagens resistentes somente ao WMV e somente ao PRSV-W, ao lado de linhagens resistentes a ambos os vírus, é indicativo de que as resistências ao WMV e ao PRSV-W não são controladas pelos mesmos genes.<br>Twenty advanced watermelon breeding lines, derived from the cross between cv. Crimson Sweet (susceptible) and PI 595201 (resistant to WMV and PRSV-W), were screened for resistance to both potyviruses. The twenty lines, among with Crimson Sweet and PI 595201, were inoculated with either WMV or PRSV-W, in two different greenhouse trials. Plants were evaluated for symptoms 35 and 49 days after the first inoculation (DAI), using a scale from 1 (no symptoms) to 5 (severe mosaic and foliar distortion). Evaluations at 35 DAI indicated that lines 1, 2 and 20 had good levels of resistance to both WMV and PRSV-W, with ratings of 1,95, 1,80 and 2,25 for WMV, and of 2,50, 2,30 and 2,50 for PRSV-W, respectively. Lines 5, 7 and 13 were resistant to WMV only, whereas lines 3, 10 and 18 were resistant to PRSV-W only. The reaction of the lines 49 DAI remained essentially unchanged. The existence of lines with resistance to WMV only and to PRSV-W only, along with lines with resistance to both viruses, indicates that resistance to WMV and PRSV-W are under control of different genes

Imunogenicidade de proteínas do capsídeo do Cowpea severe mosaic virus (CPSMV) Capsid protein immunogenicity of Cowpea severe mosaic virus (CPSMV)

A análise SDS-PAGE do Cowpea severe mosaic virus (CPSMV) purificado revelou a migração de três frações protéicas estimadas em 43, 23 e 21 kDa, correspondentes às proteínas do capsídeo: denominadas proteína maior (43 kDa) e menor (23 kDa; intacta e 21 kDa; clivada). As proteínas do capsídeo, na sua forma nativa, foram utilizadas na imunização de camundongos pelas vias oral e nasal, durante 10 dias consecutivos. As frações protéicas de 43 e 23 kDa, em sua forma desnaturada, foram utilizadas para imunização subcutânea. A resposta imunológica da mucosa foi avaliada pela proliferação celular das placas de Peyer de camundongos imunizados pela via oral com o CPSMV purificado. Ficou demonstrado que o CPSMV induz resposta imunológica, evidenciada pela síntese de anticorpos séricos, quando administrado na sua forma nativa pelas vias oral e nasal ou através de suas proteínas do capsídeo desnaturadas, pela via subcutânea. Não foi necessário o uso de adjuvantes, quer por via oral quer por via nasal. As frações protéicas de 43 e 23 kDa mostraram-se responsáveis pela imunogenicidade do vírus, como foi evidenciado pela síntese de anticorpos específicos detectados por ELISA. A análise da proliferação celular da placas de Peyer revelou um aumento (r=0,88) do número de leucócitos ao longo de 42 dias após a imunização. Esses resultados reforçam a possibilidade do uso do CPSMV como vetor seguro de antígenos de doenças humanas/animais pouco imunogênicos para produção de vacinas.<br>SDS-PAGE analysis of purified Cowpea severe mosaic virus (CPSMV) revealed the migration of three protein fractions of 43, 23 and 21 kDa, corresponding to the capsid protein called large protein (43 kDa) and small protein (23 kDa; intact and 21 kDa; cleaved). The capsid proteins, in their native form, were used to immunize mice through oral and nasal routes for ten consecutive days. The denatured form of the 43 and 23 kDa protein fractions were used for subcutaneous immunization. The mucosal immune response was detected by the cellular proliferation of the Peyer's patches of mice immunized by oral route with CPSMV. It was demonstrated that CPSMV induces immune response, evidenced by the synthesis of specific antibodies, when administered in the native form by the oral and nasal routes or with two denatured capsid proteins by the subcutaneous route. The use of adjuvants in the oral and nasal immunizations was not necessary. The 43 and 23 kDa protein fractions were responsible for the immunogenicity of the virus, evidenced by the synthesis of specific antibodies detected by ELISA test. The cellular proliferation analysis of the Peyer's patches revealed an increase (r=0.88) of leucocytes along 42 days after immunization. The results reinforce the possibility of the use of CPSMV as a safe vector of antigens for human/animal diseases of low immunogenicity for the production of vaccines