Ação de esteres de sacarose em cultura de tecido

Orientador: Maria Edwiges HoffmannDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Os ésteres de sacarose apresentam um grande potencial de emprego, constituindo-se numa fonte de matéria-prima renovável de importância para a indústria de alimentos e de cosméticos. Apesar do enorme interesse industrial que os estearatos de sacarose tem despertado nos últimos anos, os seus efeitos em células de mamíferos não foram estudados de modo sistemático e conclusivo. Visando estudar a ação de estearatos de sacarose em células de mamíferos, purificamos e identificamos quimicamente os derivados mono e diestearato de sacarose a partir de uma mistura industrial. Devido às suas estruturas químicas, estes dois derivados apresentam características de agentes anfifílicos, sendo classificados como surfactantes do tipo não iônico. A determinação dos efeitos biológicos do monoestearato de sacarose (MES) e do diestearato de sacarose (DES) foi efetuada em cultura de tecidos in vitro, empregando células humanas (hemácias, linfócitos, fibroblastos primários da derme e fibroblastos de pulmio estabelecidos em cultura) e de roedor (fibroblastos V-79). Vários marcadores da atividade citotóxica foram empregados para a caracterização dos potenciais citotóxicos dos sucroderivados, tais como aIterações na morfologia, perda de viabilidade, perda de adesão,inibição da proliferação e morte das células. Contrariamente ao DES, o MES exibiu uma potente ação citotóxica, constatada em todos os tipos celulares estudados, mostrando, urna atuação não seletiva sobre as células. Os resultados obtidos mostram que o MES apresenta um potencial citotóxico mais elevado que os outros agentes surfactantes avaliados (dodecil sulfato de sódio e Triton X-1OO) que são classificados corno agentes agressivo para as células. O mecanismo de ação do MES foi interpretado corno sendo similar ao descrito para outros surfactantes, causando alterações estruturais e funcionais das membranas celulares. A ausência de citotoxicidade do DES, o qual também apresenta anfifilicidade, foi interpretada corno sendo resultante da modificação das propriedades físico-químicas, decorrentes de urna segunda esterificação na molécula de sacarose. Os efeitos do MES sobre as membranas celulares foram comprovados através da determinação de sua ação hemolítica em eritrócitos e de sua capacidade de inibir a captação de uridina em fibroblastos. Contrariamente ao MES, o DES não causou alterações ao nível das membranas celulares, em concordância com o esperado pela sua ausência de citotoxicidade. Os efeitos deletérios do MES foram consideravelmente atenuados na presença de proteínas séricas, possivelmente devido a formação de um complexo detergente-proteína, inativo sobre a membrana celular. Este achado pode explicar a ausência de efeitos tóxicos do MES em animais, reportada na literaturaAbstract: The food and cosmetic industries have recently focused attention on the possible use of fatty acid sucrose ester as a renewable raw material. Despite the above interest on sucrose esters, their action on mammallian cells was not investigated systematically and conclusively. In order to study the sucrose stearate effect on mammallian cells, the mono-and di-derivatives were separated from an industrial product, purified and chemically identified. The compounds showed properties of amphiphilic agents and were classified as non ionic surfactants. The biological actions of sucrose monostearate ester (SME) and sucrose distearate ester (SDE) were performed on in vitro tissue cultures, using human cells (erythrocytes, limphocytes, dermal fibroblast or a cell line obtained from lung fibroblast) and with rodent cells (fibroblast V-79). Several cytotoxicity end points (morphological alterations, cell viabi!ity, cell detachment, cell growth inhibi tion and cell death) were employed to characterize the cytotoxic potential of those purified sucrose ester derivatives. SME showed a non-selective and a potent cytotoxic action on alI cell types analyzed. None of those effects were obtained with SDE. The results indicated also that SME had the strongest activity when compared to other surfactants known to be aggressive on cells (sodium dodecyl sulfate and Triton X-IOO). The mechanism for the SME action was assumed to be similar to those described for surfactants, causing structural and functional alterations on cell membrane. The absence of cytotoxicity observed with SDE (also an amphiphilic compound) was interpreted as a consequence of changes on the physico-chemical properties resulting from a second esterification in the sucrose molecule. The effects of SME on cell membranes were observed through the determination of the hemolytic potential on erythrocytes and on the fibroblast membrane mediated uridine uptake. The SDE, in opposition to SME, did not induce modifications at the cell membrane level, according to the observed absence of cytotoxicity action. The damaging SME action, both on cells and membranes, were significantly diminished in the presence of serum proteins, probably forming an inactive detergent-protein complex on cell membranes. This finding can explain why SME is normally reported as a nontoxic surfactant in animalsMestradoBioquimicaMestre em Ciências Biológica

Modulacao da patogenicidade dependente de gp43 de Paracoccidioides brasiliensis por anticorpos monoclonais

BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Anticorpos monoclonais para identificar o tobamovírus do mosaico do tomateiro (ToMV)

Monoclonal antibodies were obtained against Tomato mosaic tobamovirus (ToMV) isolated in Brazil. One antibody (8G7G2) isotyped as IgG2b (kappa light chain) showed strong specificity and very low cross reaction with the Tobacco mosaic virus (TMV). It can be used in identification of tomato mosaic virus (ToMV).Foram obtidos anticorpos monoclonais contra o vírus do mosaico do tomateiro (ToMV) isolado no Brasil. O anticorpo 8G7G2 isotipado como IgG2b (cadeia leve kapa apresentou alta especificidade para o ToMV e baixa reação cruzada com o vírus do mosaico do tabaco (TMV) e poderá ser usado na identificação do ToMV.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Universidade de São Paulo Escola Superior de Agricultura 'Luiz de Queiroz' Departamento de GenéticaUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Departamento de Microbiologia, Parasitologia e ImunologiaUNIFESP, Depto. de Microbiologia, Parasitologia e ImunologiaSciEL

CHARACTERIZATION OF GLYCOPROTEIN GP43, THE MAJOR LAMININ-BINDING PROTEIN OF PARACOCCIDIOIDES-BRASILIENSIS

We have demonstrated that laminin mediates the adhesion of P. brasiliensis to monolayers of epithelial cells through specific binding to the surface glycoprotein gp43. This binding seems to be related to the fungal pathogenesis. We now report the confirmation of these findings by scanning electron microscopy and show that some isolates that do not secrete gp43 do express the protein as seen by studying whole cell extracts. These results confirm the ability of these strains to produce paracoccidioidomycosis but should not be used for serological purposes since the absence of gp43 in exoantigens may lead to false negative results.FED UNIV RIO DE JANEIRO,INST BIOFIS CARLOS CHAGAS FILHO,BR-21949900 RIO JANEIRO,BRAZILWeb of Scienc

Estudo in vivo de atividade anti-radicalar por quantificação de peróxidos cutâneos In vivo antiradicalar activity by skin peroxidies quantification

FUNDAMENTOS: O organismo humano possui eficientes mecanismos de defesa contra os radicais livres. A relação causal observada entre estresse oxidativo e diversos processos degenerativos despertou o interesse para a exploração de diversos antioxidantes. OBJETIVOS: Este trabalho propõe um método in vivo para comprovação da eficácia de um novo complexo de alta atividade anti-radicalar (acetato de tocoferila, licopeno e mistura de ácidos clorogênicos rica em ácido caféico). MÉTODOS: Neste ensaio, não invasivo e placebo controlado, a medida da taxa de peróxido cutâneo realizou-se em diferentes áreas - três após a incidência da radiação UV, duas tratadas, uma não tratada, e uma não tratada e não irradiada. A presença do peróxido foi detectada pela aplicação de sonda fluorescente em adesivo específico, que retirou uma amostra do estrato córneo dos sítios supracitados. O cálculo da proteção anti-radicalar dá-se em função das unidades fluorimétricas obtidas. RESULTADOS: Tomando-se como base áreas controles não irradiadas, as áreas irradiadas e tratadas com o complexo estudado apresentaram concentrações 116% menores (p=0,02%) de peróxidos cutâneos, com significância estatística em relação às áreas apenas irradiadas. Já as áreas irradiadas e tratadas com o placebo apresentaram concentrações apenas 49% menores (p=0,501), o que não é estatisticamente significativo em comparação às áreas irradiadas. CONCLUSÃO: Os resultados obtidos indicam que o complexo estudado possui significativa capacidade protetora da pele contra a ação de radicais livres formados a partir da exposição solar.<br>BACKGROUND: Our organism has important defense mechanisms against free radicals. The causal relationship observed among the oxidative stress and degenerative problems in humans, are getting attention for the exploration of antioxidant agents. OBJECTIVES: This study proposes an in vivo methodology for proving the efficacy of a new high-activity antioxidant complex (tocopheryl acetate, licopene and a pool of chlorogenic acids rich in cafeic acid). METHODS: In this non-invasive and placebo controlled assay, the measure of the peroxide rates was performed in different areas, three after UV radiation, two treated, one non-treated, and an other non-treated and non-irradiated. The peroxide presence was detected through a fluorescent probe on samples stripped form the sites above mentioned. The free-radical scavenger activity is calculated through the fluorimetry results. RESULTS: Based on non-irradiated areas data’s, the irradiated and complex-treated areas presented skin-peroxide concentration 116% lower, statistically significant (p=0,02%) compared to the non-treated irradiated areas. Although, placebo-treated irradiated areas presented skin-peroxide concentration 49% lower, a non-statistically significant rate (p=0,501%) compared to the irradiated areas. CONCLUSION: The results indicate that studied-complex, have significant skin-protective action against the free-radicals, usually formed after sun exposure