Specific discrimination between Taenia saginata and Taenia solium by one step PCR assay and duplex-PCR

Este estudo teve como objetivo a padronização de protocolos e a seleção de novos primers para a identificação espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso n° AB020399 para T. saginata e n° AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5’- ggcttgtttgaatggtttgacg- 3’) foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5’-cgactcatgaagataaacaaggt-3’) e TBR- 5 (5’-cggtcgaacagaccataaatct-3’) e TBR-6 (5’- gctactacacctaaattctaacc- 3’) para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregandose DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificação específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificação, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (n° AB020399 e n° AB020395). As reações apresentaram sensibilidade para detecção de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinação dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na detecção simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reação. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificação cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa.This study was conducted to evaluate a protocol and to select novel primers for the species-specific identification of Taenia saginata and Taenia solium by PCR and duplex- PCR assays. Sequences of the LSU rRNA gene of taenids were obtained from the GenBank (T. saginata access n° AB020399 and T. solium access n° AB020395). The sequences were aligned and then used for primer design. The generic primer TBR3 (5’- ggcttgtttgaatggtttgacg- 3’) was selected from a conserved region. The T. saginata specific primer TBR-4 (5’- cgactcatgaagataaacaaggt-3’) as well as T. solium specific primers TBR-5 (5’-cggtcgaacagaccataaatct-3’) and TBR-6 (5’- gctactacacctaaattctaacc- 3’) were selected from different semiconserved regions. The selected sequences were examined in for similarities with other organisms through the GenBank Blast procedure and experimentally by PCR using total DNA (tDNA)extracted from cysticerci and proglottids from both parasites. The primer pair TBR-3/TBR-4 amplified specific fragments of 328 bp from T. saginata tDNA. The pairs TBR-3/TBR5 and TBR-3/TBR-6 amplified, respectively, the expected and specific fragments of 310bp and 286bp from the T. solium tDNA. Sequencing of the amplicons followed by comparison to GenBank reference sequences confirmed the identities of the PCR products. The detection sensitivity was equivalent to 1fg of T. solium tDNA and 0,2fg of T. saginata tDNA. The combination of primers TBR-3/TBR-4 and TBR3/TBR-6 and the size of amplicons allowed the establishment of a duplex-PCR assay to detect T. saginata and T. solium DNA. No cross reaction was observed with any combination of primers in reactions with tDNA of the parasites Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana and Moniezia expansa, nether from the hosts tDNA Homo sapiens, Bos taurus nor Sus scrofa

Mastite subclínica em rebanhos leiteiros de propriedades rurais de Goiás

A mastite subclínica é um dos principais problemas que afetam a pecuária leiteira, tendo em vista os graves prejuízos acarretados pela diminuição da produção e/ou pela perda dos tetos afetados e aumento da contagem de células somáticas (CCS). Objetivou-se com este estudo identificar as principais bactérias causadoras de mastite subclínica bovina e relacionar os patógenos identificados com a variação da contagem de células somáticas (CCS). Foram analisadas 5.758 amostras de leite de vacas individuais de 7 propriedades localizadas no Estado de Goiás, durante o período de junho de 2010 a junho de 2014, para verificação da CCS e destas 332 amostras foram submetidas a técnica de PCR em tempo real. Concluiu-se que, nas amostras analisadas, houve maior ocorrência de Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Staphylococcus sp e que determinaram maiores valores médios de CCS. A CCS média dos rebanhos com mastite subclínica foi de aproximadamente 743 x 103cel/mL

Mastite subclínica em rebanhos leiteiros de propriedades rurais de Goiás

The subclinical mastitis is a major problem affecting the dairy industry, in view of the severe impairments caused by reduced production and/or affected by the lossof roofs and increased somatic cell count (CCS). The objective of this study to identify the main bacteria that cause bovine subclinical mastitis pathogens identified and relate to the variation of somatic cell count (CCS). We analyzed 5758 samples of milk from individual cows of seven properties located in the State of Goiás, during the period June 2010 to June 2014, for verification of CCS and of these 332 samples were subjected to PRC in real time. It was concluded that in the analyzed samples, a higher occurrence Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis and Staphylococcus sp were the agents most frequently identified and determined higher mean values of CCS. The average CCS of cows with subclinical mastitis was approximately 743 x 103 cel/mLA mastite subclínica é um dos principais problemas que afetam a pecuária leiteira, tendo em vista os graves prejuízos acarretados pela diminuição da produção e/ou pela perda dos tetos afetados e aumento da contagem de células somáticas (CCS). Objetivou-se com este estudo identificar as principais bactérias causadoras de mastite subclínica bovina e relacionar os patógenos identificados com a variação da contagem de células somáticas (CCS). Foram analisadas 5.758 amostras de leite de vacas individuais de 7 propriedades localizadas no Estado de Goiás, durante o período de junho de 2010 a junho de 2014, para verificação da CCS e destas 332 amostras foram submetidas a técnica de PCR em tempo real. Concluiu-se que, nas amostras analisadas, houve maior ocorrência de Streptococcus agalactiae, Streptococcus uberis e Staphylococcus sp e que determinaram maiores valores médios de CCS. A CCS média dos rebanhos com mastite subclínica foi de aproximadamente 743 x 103cel/mL

Diferenciação específica entre Taenia saginata e Taenia solium por ensaio de PCR e duplex-PCR

Este estudo teve como objetivo a padronização de protocolos e a seleção de novos primers para a identificação espécie-específica de Taenia saginata e Taenia solium através da reação em cadeia da polimerase (PCR) e duplex-PCR. Inicialmente, foram recuperadas seqüências depositadas no GenBank (acesso ndegrees AB020399 para T. saginata e ndegrees AB020395 para T. solium) referentes ao gene da subunidade maior do ribossomo (LSU RNAr) de tenídeos. A partir do alinhamento das seqüências, um primer genérico denominado TBR-3 (5'-ggcttgtttgaatggtttgacg- 3') foi selecionado de região conservada e, de diferentes regiões semi-conservadas, os primers específicos TBR-4 para T. saginata (5'-cgactcatgaagataaacaaggt-3') e TBR-5 (5'-cggtcgaacagaccataaatct-3') e TBR-6 (5'-gctactacacctaaattctaacc- 3') para T. solium. Os primers foram avaliados quanto à especificidade através da PCR empregando-se DNA total (DNAt) de amostras de cisticercos e proglotes dos parasitos, previamente identificadas por critérios morfológicos. O par de primers TBR-3/TBR-4 permitiu a amplificação específica do fragmento esperado de 328 pb a partir do DNAt de T. saginata. Os pares TBR-3/TBR-5 e TBR-3/TBR-6 permitiram a amplificação, respectivamente, dos fragmentos específicos de 310pb e 286pb a partir do DNAt de T. solium. A identidade dos produtos de PCR foi comprovada comparando-se a seqüência dos amplicons obtidos às seqüências de referência do gene LSU RNAr registrado no GenBank (ndegrees AB020399 e ndegrees AB020395). As reações apresentaram sensibilidade para detecção de até 1fg do DNAt de T. solium e 0,2fg do DNAt de T. saginata. A combinação dos primers TBR-3/TBR-4 e TBR3/TBR-6 e o tamanho dos fragmentos gênicos obtidos permitiram o estabelecimento de ensaios de duplex-PCR, eficaz na detecção simultânea do DNA de T. saginata e T. solium em sistema único de reação. Os primers utilizados não geraram qualquer produto de amplificação cruzada quando testados com DNAt de Taenia hydatigena, Taenia taeniaeformis, Hymenolepis diminuta, Anoplocephala magna, Paranoplocephala mamillana e Moniezia expansa, nem frente ao DNAt dos hospedeiros Homo sapiens, Bos taurus e Sus scrofa

The effect of parenteral administration of copper on the weight gain, erithrograme and the hepatic and renal parenchymas in crossbred (Zebu x European) confined bovines

Submitted by Franciele Moreira ([email protected]) on 2018-01-19T13:01:03Z No. of bitstreams: 2 Artigo - Luiz Antônio Franco da Silva - 2004.pdf: 544446 bytes, checksum: 4f006d0eaf155995f20e8b33d298f84b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)Approved for entry into archive by Luciana Ferreira ([email protected]) on 2018-01-19T14:55:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Artigo - Luiz Antônio Franco da Silva - 2004.pdf: 544446 bytes, checksum: 4f006d0eaf155995f20e8b33d298f84b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)Made available in DSpace on 2018-01-19T14:55:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Artigo - Luiz Antônio Franco da Silva - 2004.pdf: 544446 bytes, checksum: 4f006d0eaf155995f20e8b33d298f84b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2004-09Nesse estudo avaliou-se o efeito da administração parenteral de etilenodinitrilo tetracetato de cálcio e cobre sobre o ganho de peso, eritrograma e parênquimas, hepático e renais, em bovinos confinados, utilizando-se 200 animais, alocados em quatro grupos (G) de 50 (I, II, III e IV). Os grupos I e II foram compostos por bovinos com 24 meses e os grupos III e IV por animais de doze meses, sendo que o GI recebeu 100 mg de cobre ativo e o GIII 75 mg, ambos por via subcutânea ao início do estudo. Os demais grupos foram utilizados como controle. A pesagem dos animais de todos os grupos foi realizada a cada 28 dias durante os 112 dias de confinamento. Realizou-se o eritrograma em dez bovinos de cada grupo e a determinação das concentrações de cobre hepático e renal, bem como a avaliação histológica em dez animais dos grupos I e II. Os valores obtidos para o eritrograma apresentaram-se dentro da normalidade e as concentrações, hepática e renal do cobre nos bovinos na faixa etária de 24 meses indicaram níveis de depleção. Não foram verificadas diferenças quanto aos achados histológicos entre os grupos I e II. Houve diferença significativa entre as médias de ganho de peso entre os grupos I (93.38Kg) e II (88,15 Kg). Nos grupos III e IV não se observou diferença entre os ganhos médios de peso.This study evaluated the effect of the parenteral administration of etilenodinitrile tetracetate of calcium and copper on the weight gain, eritrograma and the hepatic and renal parenchymas in confined bovines, using 200 animals, distributed in four groups (G) of 50 (I, II, III and IV). The groups I and II were constituted by bovines with the age of 24 months and the groups III and IV by animals of 12 months, which GI was given 100mg of active copper and GIII 75mg, both by subcutaneous way by the beginning of the study. The other groups were used as the control. The weight measure of the animals of all groups was done from 28 to 28 days during the 112 days of confinement. It was done the eritrograma in ten bovines of each group and the dosage of the hepatic and renal concentration of copper and the hystological evaluation, in the animals of the groups I and II. The values found on the eritrograma showed normality and the hepatic and renal concentrations of copper in bovines with the age of 24 months showed depletion levels. It was not verified differences about the hystological evaluation between the groups I and II. There was significant difference on the weight gain media between the groups I and II. On the groups III and IV, it was not observed difference over the weight gain media