Identificação morfológica da espiroqueta Borrelia spp. no exame da hemolinfa de Rhipicephalus microplus

As bactérias Borrelia spp. são transmitidas para humanos, animais domésticos e silvestres por carrapatos da família Ixodidae. Esta espiroqueta pode acometer a doença, borreliose de Lyme-Símile Brasileira e/ou Síndrome Baggio-Yoshinari. No Brasil, a sua epidemiologia e identificação, necessita ser mais bem investigada, pois o exame parasitológico requer acuracidade. Existem evidencias da disseminação deste parasitismo, e consequentemente maior atenção da saúde Pública.  Objetivou-se neste estudo identificar Borrelia spp. na hemolinfa de fêmeas do carrapato Rhipicephalus microplus. Foram coletadas fêmeas ingurgitadas de carrapatos R. microplus de animais bovinos provenientes da fazenda Avaí, do município de Nioaque, Mato Grosso do Sul. As fêmeas foram lavadas com água, desinfectadas superficialmente com álcool a 70°, após foram secas com gases e transferidas para uma placa de Petri e em seguida incubadas para realização da postura. A seguir do início da postura, de 3 dias, a extração de hemolinfa foi realizada a partir de secção dos primeiros pares de patas com auxílio de uma tesoura oftálmica ou através de perfuração superficial na região dorsal com auxílio de agulha de insulina. Gotas da hemolinfa foram transferidas para uma lamina de vidro, após a secagem das amostras, estas foram fixadas com metanol e coradas com May Grünwald-Giemsa. As laminas coradas foram observadas em microscópio de luz, objetiva de 100x. Por meio do exame de hemolinfa foram encontradas as espiroquetas, infectando naturalmente os carrapatos. O exame morfológico do microrganismo e sua visualização em R. microplus sugere ser Borrelia spp

Ocorrência de Borrelia spp. em cultura de células embrionárias do carrapato Boophilus microplus (Acari: Ixodidae) no Estado do Mato Grosso do Sul, Brasil

O presente trabalho teve como objetivo reportar a ocorrência de Borrelia spp. em culturas de células embrionárias de Boophilus microplus infectados naturalmente. Sete dias após o início de uma nova cultura primária de células embrionárias do carrapato B. microplus, incubadas a 31ºC, notou-se que as células começaram a degenerar. Ao exame em microscópio de contraste de fase detectou-se a presença de microrganismos alongado e com grande mobilidade. Lâminas de microscópio confeccionadas com amostras do sobrenadante da cultura, hemolinfa e massa de ovos, coradas pelo May Grünwald-Giemsa, permitiram a visualização de espiroquetas. O exame morfológico do microrganismo e sua visualização em B. microplus sugere ser Borrelia spp

Assessment of weight gain and biological parameters of Rhipicephalus sanguineus females fed artificially via capillary tubes Avaliação do ganho de peso e dos parâmetros biológicos de fêmeas Rhipicephalus sanguineus alimentadas artificialmente por meio de tubos capilares

This study assesses the weight gain of partially engorged Rhipicephalus sanguineus females that were artificially fed via capillary tubes and the influence of capillary tube feeding on the biological parameters of the non-parasitic stage of the species. The ticks were sorted into four groups, each containing ten females of a homogeneous weight. The groups were each treated for different feeding times, 2, 6, 12 and 24 hours. The weight gain of the artificially fed females was measured, and the biological parameters of the non-parasitic stage of the tick were observed for each treatment group. The statistical non-parametrical Dunn and Kruskal-Wallis tests were used to compare the results. The mean weights (mg) were 0.2±2.4; 4.3±5.8; 7.4±5.8 and 12.0±11.2 for the 2, 6, 12 and 24 hours feeding groups, respectively. The weight of the fed groups increased as the capillary feeding time increased, and this relationship was highly significant (P0.05) were observed in the parameters of the non-parasitic stage for the artificially fed groups. It can be concluded that artificial feeding via capillary tubes provides an efficient and easy method for the artificial intake of blood by R. sanguineus. Furthermore, it was noted that the ticks fed in vitro were able to establish a new generation. The experimental method shows great promise in studies that aim to investigate biological disease agents.O objetivo deste trabalho foi avaliar o ganho de peso de fêmeas Rhipicephalus sanguineus parcialmente ingurgitadas alimentadas artificialmente por meio de tubos capilares e verificar a sua influência nos parâmetros biológicos da fase não parasitária. Os carrapatos foram separados em quatro grupos de peso homogêneo compostos por 10 fêmeas cada. Os grupos foram submetidos a diferentes tempos de alimentação: 2, 6, 12 e 24 horas. Para comparação dos resultados, foram utilizados os testes estatísticos não paramétricos Dunn e Kruskal-Wallis. Os pesos médios (mg) adquiridos foram de 0,2±2,4; 4,3±5,8; 7,4±5,8 e 12,0±11,2 nos grupos de 2, 6, 12 e 24 horas, respectivamente. O peso dos grupos alimentados foi maior à medida que o tempo de exposição ao tubo capilar aumentou, observando-se diferença significativa (P0,05) nos parâmetros relativos à fase não parasitária entre os grupos submetidos à alimentação artificial. Concluiu-se que a alimentação artificial por meio de tubos capilares é um método de fácil execução e eficiente para ingestão de sangue por carrapatos R. sanguineus. Além disso, verificou-se que os carrapatos alimentados in vitro foram capazes de estabelecer uma nova geração. Esse método tem potencial para o desenvolvimento de estudos que visem a transmissão de bioagentes

First identification of natural infection of Rickettsia rickettsii in the Rhipicephalus sanguineus tick, in the State of Rio de Janeiro

The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonotic disease caused by Rickettsia rickettsii and transmitted by ticks of the genus Amblyomma, more frequently, Amblyomma cajennense. The aim of this paper was to report the first molecular detection of R. rickettsii on R. sanguineus naturally infected in Rio de Janeiro, Brazil. Ticks were collected from dogs in a rural region of Resende municipality, Rio de Janeiro State, Brazil (22º30'9.46"S, 44º42'44.29"WO), where occurred five human cases of BSF in 2006. The ticks were identified under a stereoscopic microscope and separated in pools by stages, species and sex. DNA extraction was carried out using QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN®). The DNA was submitted to PCR amplification using 04 set of primers: Rr190.70p/Rr190.602n (OmpA, 532bp), BG1-21/BG2-20 (OmpB, 650bp), Tz15/Tz16 (17 kDa protein-encoding gene, 246bp) and RpCS.877p/RpCS.1258n (gltA, 381bp). PCR products were separated by electrophoresis on 1% agarose gels and visualized under ultraviolet light with ethidium bromide. PCR products of the expected sizes were purified by QIAquick® and sequenced by ABI PRISM®. The generated nucleotide sequences were edited with using Bioedit® software and compared with the corresponding homologous sequences available through GenBank, using Discontiguous Mega Blast (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). It was confirmed R. rickettsii by sequencing of the material (GenBank FJ356230). The molecular characterization of R. rickettsii in the tick R. sanguineus emphasizes the role of dogs as carriers of ticks from the environment to home. Moreover, this result suggests that there is a considerable chance for active participation of R. sanguineus as one of tick species in the transmission of R. ricketsii to human being in the Brazilian territory

Molecular evidence of Borrelia burgdorferi sensu lato in patients in Brazilian central-western region

Abstract We aimed to detect DNA of Borrelia burgdorferi in whole blood and serum samples of patients with clinical symptoms and epidemiology compatible with Brazilian Lyme-like disease. Four patients with positive epidemiological histories were recruited for the study. Blood samples were collected, screened by serologic testing by ELISA and Western blotting and molecular identification of B. burgdorferi by amplifying a fragment of the conserved gene that synthesizes the hook flagellar flgE. The results showed positive serology and for the first time, the presence of B. burgdorferi sensu lato in humans in the Midwest region of Brazil. The resulting sequences were similar to GenBank corresponding sequences of B. burgdorferi flgE gene. By neighbor-joining the phylogenetic analysis, the flgE sequence of the Brazilian strain clustered in a monophyletic group with the sequence of B. burgdorferi sensu lato under 100% bootstrap support. This study opens up promising perspectives and reinforces the need for additional studies to determine the epidemiological characteristics of the disease, as well as the impact of the prevalence of Brazilian borreliosis in Mato Grosso do Sul State, Brazil

Rickettsiae of the Spotted Fever group in dogs, horses and ticks: an epidemiological study in an endemic region of the State of Rio de Janeiro, Brazil

Submitted by sandra infurna ([email protected]) on 2015-10-13T13:54:21Z No. of bitstreams: 1 elba_lemos_etal_IOC_2014.pdf: 206509 bytes, checksum: 6b69109e051f0d74835c5880eea3c73b (MD5)Approved for entry into archive by sandra infurna ([email protected]) on 2015-10-13T13:54:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 elba_lemos_etal_IOC_2014.pdf: 206509 bytes, checksum: 6b69109e051f0d74835c5880eea3c73b (MD5)Approved for entry into archive by sandra infurna ([email protected]) on 2015-10-13T14:15:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 elba_lemos_etal_IOC_2014.pdf: 206509 bytes, checksum: 6b69109e051f0d74835c5880eea3c73b (MD5)Made available in DSpace on 2015-10-13T14:15:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 elba_lemos_etal_IOC_2014.pdf: 206509 bytes, checksum: 6b69109e051f0d74835c5880eea3c73b (MD5) Previous issue date: 2014Universidade Federal Fluminense. Faculdade de Veterinária. Departamento de Saúde Coletiva Veterinária e Saúde Pública. Niterói, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Hantaviroses e Rickettsioses. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Hantaviroses e Rickettsioses. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Universidade Federal Rural do Estado do Rio de Janeiro. Instituto de Veterinária. Curso de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias (CPGCV).Seropédica, RJ, Brasil.Universidade Federal Rural do Estado do Rio de Janeiro. Instituto de Veterinária. Curso de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias (CPGCV).Seropédica, RJ, Brasil.Escola Superior Batista do Amazonas. Curso de Medicina Veterinária. Manaus, AM, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Hantaviroses e Rickettsioses. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Universidade Federal do Estado do Rio de Janeiro. Departamento de Microbiologia e Parasitologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Universidade Federal Rural do Estado do Rio de Janeiro. Instituto de Veterinária. Curso de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias (CPGCV).Seropédica, RJ, Brasil.Universidade Federal Rural do Estado do Rio de Janeiro. Instituto de Veterinária. Departamento de Epidemiologia e Saúde Pública. Seropédica, RJ, Brasil.Spotted fever is a disease of which Rickettsia rickettsii is the most pathogenic agent. Its transmission is by tick bites and the infected ticks can act as vectors, reservoirs or amplifiers. The purpose of this paper is to assess the potential of dogs and horses as sentinels for brazilian spotted fever (BSF) emergence and become acquainted with the tick species in a municipal region of Resende, Rio de Janeiro State, Brazil, where five BSF cases in man were registered. Dog and horse blood samples were collected from rural and periurban properties to assess IgG anti-Rickettsia rickettsii, using the indirect immunofluorescence assay (IFA). First, an analysis was conducted to detect association between IFA results and answers obtained from a questionnaire. Afterwards, a multivariate investigation was undertaken that presented significant statistical differences. Ticks were collected directly from dogs and horses for taxonomic identification. Out of the 107 canine serum samples, 30 (28.0%) were reactive, with titers varying from 1:64 to 1:4096, and 77 (72.0%) were not reactive. Of 96 animals in the serum analysis of horses, 9 (9.4%) were reactive, all with titers of 1:64, and 87 (90.6%) were non-reactive. The tick species collected from dogs were Rhipicephalus sanguineus, Amblyomma sculptum, Amblyomma aureolatum, Amblyomma ovale, Rhipicephalus microplus and nymphs of Amblyomma sp., R. sanguineus and R. microplus. Adult ticks gathered from horses were A. cajennense, R. microplus and Dermacentor nitens, in addition to nymphs of Amblyomma sp., R. microplus and D. nitens. The results suggest that: (i) the habit of dogs entering forests and living in rural environments positively influenced the presence of anti- -rickettsiae of the spotted fever group serum antibodies, (ii) horses were not good sentinels for this study area and (iii) R. sanguineus as well as A. cajennense ticks were the most prevalent ixodidae fauna of the region