Recuperación de embriones en hembras de alpacas y llamas con ovulación única o múltiple

La capacidad reproductiva de los camélidos sudamericanos es baja, con un periodo de gestación de 11,5 meses y sufren pérdidas embrionarias tempranas, por lo que la búsqueda de técnicas exitosas para lograr reproducción asistida, como inseminación artificial, superovulación, transferencia de embriones y fecundación in vitro, es una estrategia que está en constante desarrollo. El objetivo de este estudio fue evaluar la recuperación, la calidad y el tamaño de embriones obtenidos de alpacas y llamas donantes, de ovulación única y superestimuladas (ovulación múltiple), mediante la aplicación de 1000 UI de gonadotropina coriónica equina (eCG), en la cría extensiva de la Estación Experimental Quimsachata del Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA, Puno, Perú). Por una parte, en ambas especies la estimulación ovárica aumentó significativamente el número de folículos, cuerpos lúteos, tasa de ovulación y número de embriones por hembra donante. Sin embargo, la tasa de recuperación fue menor en las llamas tratadas con eCG y entre el 60 y 76% de los embriones colectados fueron clasificados como transferibles (de calidad excelente y buena) de acuerdo a la escala de la Sociedad Internacional de Transferencia de Embriones (IETS). Por otra parte, no se observaron diferencias significativas en el tamaño de los embriones en función de su calidad u origen (ovulación única o de superovulación)

Recuperación de embriones en hembras de alpacas y llamas con ovulación única o múltiple

La capacidad reproductiva de los camélidos sudamericanos es baja, con un periodo de gestación de 11,5 meses y sufren pérdidas embrionarias tempranas, por lo que la búsqueda de técnicas exitosas para lograr reproducción asistida, como inseminación artificial, superovulación, transferencia de embriones y fecundación in vitro, es una estrategia que está en constante desarrollo. El objetivo de este estudio fue evaluar la recuperación, la calidad y el tamaño de embriones obtenidos de alpacas y llamas donantes, de ovulación única y superestimuladas (ovulación múltiple), mediante la aplicación de 1000 UI de gonadotropina coriónica equina (eCG), en la cría extensiva de la Estación Experimental Quimsachata del Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA, Puno, Perú). Por una parte, en ambas especies la estimulación ovárica aumentó significativamente el número de folículos, cuerpos lúteos, tasa de ovulación y número de embriones por hembra donante. Sin embargo, la tasa de recuperación fue menor en las llamas tratadas con eCG y entre el 60 y 76% de los embriones colectados fueron clasificados como transferibles (de calidad excelente y buena) de acuerdo a la escala de la Sociedad Internacional de Transferencia de Embriones (IETS). Por otra parte, no se observaron diferencias significativas en el tamaño de los embriones en función de su calidad u origen (ovulación única o de superovulación).The reproductive capacity of South American camelids is low, with a gestation period of 11.5 months and suffer early embryonic losses, so the search for successful techniques to achieve assisted reproduction, such as artificial insemination, superovulation, embryo transfer and in vitro fertilization, are strategies that are in constant development. The objective of this study was to evaluate the recovery, quality and size of embryos obtained from single ovulated and super-stimulated (multiple ovulation) donor alpacas and llamas, through the application of 1000 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG), in the extensive breeding of the Quimsachata Experimental Station of the National Institute for Agrarian Innovation (INIA, Puno, Peru). In both species, ovarian stimulation significantly increased the number of follicles, corpora lutea, ovulation rate and number of embryos per donor female. However, the recovery rate was lower in the eCG-treated llamas and between 60 and 76% of the embryos collected were classified as transferable (excellent and good quality) according to the International Embryo Transfer Society (IETS) scale. On the other hand, no significant differences were observed in the size of the embryos according to their quality or origin (single ovulation or superovulation).DNA Comunicación InstitucionalFil: Huanca Mamani, Teodosio. Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA). Programa Nacional de Innovación en Camélidos; Perú

Efecto de factores embriotróficos a diferentes tensiones de oxígeno en cultivo in vitro sobre el desarrollo embrionario de alpacas hasta la etapa de blastocisto.

La alpaca es el camélido sudamericano doméstico de mayor importancia para Perú, país que cuenta con el 87% de la población a nivel regional. Las formas tradicionales de reproducción, no garantizan la calidad genética de los animales, por lo que la reproducción in vitro es una alternativa para su mejoramiento. El objetivo de la investigación fue analizar cómo influyen factores embriotróficos y tensiones de oxígeno en el desarrollo in vitro de ovocitos de alpaca hasta etapa de blastocistos. Se recolectaron ovarios de animales sacrificados y los ovocitos madurados en medio TCM-199, piruvato de sodio, glutamina, estradiol, hormona folículo estimulante, hormona luteinizante, factor de crecimiento epidermal, suero fetal bovino y gentamicina, por 32 horas a 38.5 ºC, al 5% CO2 y humedad relativa mayor de 95%, se fecundaron con semen fresco y cultivado en medio KSOMaa durante 48 h. Se utilizaron dos factores embriotróficos (EGF y IGF-I), dos tensiones de O2 (5 y 20%), más un grupo control sin factor embriotrófico y tres variables respuesta (ovocitos, divisiones y blastocistos). Se aplicó la técnica estadística de análisis de conglomerados para establecer diferencias entre los tratamientos con ? = 0,05. Se observaron diferencias significativas para cada variable respuesta, con máxima producción de divisiones de 24,88% para EGF a 6% O2 y blastocistos 18,4% para IGF-I a 6% O2. Se concluye que la adición de los factores embriotróficos a los medios de cultivo embrionario in vitro y una baja tensión de oxígeno 6% son favorables para el desarrollo embrionario en alpacas

EFECTO DE FACTORES EMBRIOTRÓFICOS A DIFERENTES TENSIONES DE OXÍGENO EN CULTIVO IN VITRO SOBRE EL DESARROLLO EMBRIONARIO DE ALPACAS HASTA LA ETAPA DE BLASTOCISTO

La alpaca es el camélido sudamericano doméstico de mayor importancia para el Perú, país que a nivel regional cuenta con el 87% de estos animales. Ya que las formas tradicionales de reproducción no garantizan su calidad genética, la reproducción in vitro es una alternativa para su mejoramiento. Este estudio evaluó la influencia de los factores embriotróficos de desarrollo epidérmico (EGF) y de crecimiento insulínico (IGF-1) y tensiones de oxígeno en el desarrollo in vitro de ovocitos de alpaca hasta la etapa de blastocistos. A partir de ovarios de animales sacrificados, se obtuvieron ovocitos que se colocaron en medio TCM-199, suplementado con piruvato de sodio, glutamina, estradiol (E2), hormona folículo estimulante (FSH), hormona luteinizante (LH), factor embriotrófico (EGF o IGF-1), 5% de suero fetal bovino y gentamicina (10μL/mL) durante 32 horas, a 38,5 C, con 5% de CO2 y humedad relativa mayor de 95%, con tensiones O2 entre 6 y 20%. Posteriormente, los ovocitos fueron fecundados con semen fresco y cultivados en medio KSOMaa durante 48 horas. Los cultivos fueron diferenciados por factores de crecimiento (EGF e IGF-1) y tensiones de O2 (6% y 20%), más el grupo control sin suplementar con EGF o IGF-I, para valorar las tasas de división de ovocitos y blastocistos a partir de ovocitos. Mediante análisis de conglomerados, se establecieron diferencias significativas entre los tratamientos con a = 0,05 para cada variable de respuesta, observándose la mayor tasa de divisiones de ovocitos (24,8%) con EGF a 6% de O2 y la mayor producción de blastocistos/ovocito (18,4%) con IGF-1 a 6% de O2 . Se concluye que la adición de factores embriotróficos y una baja tensión de O2 son favorables para el desarrollo embrionario in vitro en alpacas./ The alpaca is the most important South American domestic camelid for Peru, a country that regionally has 87% of these animals. Since traditional forms of reproduction do not guarantee its genetic quality, in vitro reproduction is an alternative for its improvement. This study evaluated the influence of embryotrophic factors of epidermal development (EGF) and insulin-like growth factor (IGF-1) and oxygen tension on the in vitro development of alpaca oocytes up to the blastocyst stage. From ovaries of sacrificed animals, oocytes were obtained and placed in TCM-199 medium, supplemented with sodium pyruvate, glutamine, estradiol (E2), follicle stimulating hormone (FSH), luteinizing hormone (LH), embryotrophic factor (EGF or IGF-1), 5% fetal bovine serum and gentamicin (10μL/mL) for 32 hours, at 38.5 C, with 5% CO2 and relative humidity greater than 95%, with O2 tensions between 6 and 20%. Subsequently, the oocytes were fertilized with fresh semen and cultured in KSOMaa medium for 48 hours. Cultures were differentiated by growth factors (EGF and IGF-1) and O2 tensions (6% and 20%), plus the control group without EGF or IGF-I supplementation, to assess oocyte and blastocyst division rates from oocytes. By cluster analysis, significant differences were established between treatments with a = 0.05 for each response variable, with the highest rate of oocyte divisions (24.8%) with EGF at 6% O2 and the highest blastocyst/oocyte production (18.4%) with IGF-1 at 6% O2. It is concluded that the addition of embryotrophic factors and low O2 tension are favorable for in vitro embryo development in alpacas

Modelling of growth curves and estimation of genetic parameters for growth curve parameters in Peruvian young llamas (Lama glama)

The objectives of this study were to describe the growth of young llamas by the application of four non-linear functions (Gompertz, Logistic, Von Bertalanffy and Brody), evaluate the importance of fixed (environmental) effects (sex, type of llama, month and year of birth) on growth curve parameters and finally estimate the genetic parameters for growth curve parameters (A: asymptotic body weight and k: specific growth rate). A total of 35,691 monthly body weight records from birth up to 16 months of age from 2675 young llamas, collected from 1998 to 2008 in the Quimsachata Experimental Station of the Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA) in Peru were used. Growth curve parameters were estimated by non-linear procedures while genetic parameters were estimated by application of a bivariate animal model and the restricted maximum likelihood (REML) method. All non-linear functions closely fitted actual body weight measurements, while the Gompertz function provided the best fit in describing the growth data of young llamas. All environmental effects significantly influenced the asymptotic weight (A), while the specific growth rate (k) was only affected by the month and year of birth. Heritability estimates for parameters A and k were 0.10 and 0.01, respectively. Genetic correlation between A and k was high and negative (−0.82), indicating that a rapid decrease in growth rate after inflection point is associated with higher mature weight. Despite the low heritability estimates obtained herein, slight genetic gain(s) were observed in the current study suggesting that a selection program to change the slope of the growth curve of llamas may be feasible

Ovulation rate using GnRH, seminal plasma and GnRH + copula in alpaca and llama of the CIP Quimsachata INIA - Puno

Los camélidos sudamericanos son especies de ovulación inducida, las cuales necesitan del estimulo de la cópula para desencadenar el proceso de ovulación (Fernández-Baca et al., 1970). El crecimiento folicular hasta llegar a tamaños preovulatorios se presenta en ambos ovarios de manera alternada, tanto en la llama como en la alpaca, la repuesta ovulatoria se presenta después de la primera cópula, no teniendo efecto en cópulas subsecuentes (Bravo et al., 1991). El tratamiento con 8 μg de buserelina (GnRH) intravenosa desencadenó la ovulación en el 75% de las llamas hembras que poseían folículos dominantes en fase de crecimiento (Ferrer et al., 2002), mientras que Bravo et al. (1991) indican que el análogo de GnRH indujo 75% y 100% de ovulaciones en alpacas y llamas. Ratto et al., (2006) indican que la aplicación de 50 μg buserelina intramuscular producen 80% de las ovulaciones en llamas, con la subsecuente formación de cuerpos lúteos con 11.9 mm en promedio. La existencia del factor inductor de ovulación (OIF) fue evidenciado realizando aplicaciones intramusculares de plasma seminal en alpacas y llamas, lográndose 93% y 90% de ovulaciones en alpacas y llamas, respectivamente, obteniéndose cuerpos lúteos de 12.2mm y 13.5mm para alpacas y llamas, respectivamente (Adams et al., 2005), mientras que Ratto et al. (2006) indican 100% de ovulaciones en llamas y alpacas, con formación de cuerpos lúteos de 10.4 mm y 10.1 mm, respectivamente. En esta perspectiva, este estudio permitirá determinar la tasa de ovulación y formación de cuerpos lúteos utilizando GnRH, plasma seminal de alpaca y GnRH+cópula en alpacas y llamas

Spermatozoa Obtained From Alpaca vas deferens. Effects of Seminal Plasma Added at Post-thawing

The viscous seminal plasma (SP) is currently a major impediment to the handling of ejaculate and the development of some biotechnologies in South American camelids. The vas deferens-collected spermatozoa of alpacas is a useful technique to avoid this problem. On the other hand, SP contains a large protein component that has been implicated in the function of spermatozoa within the female reproductive tract. In this sense, the low fertility achieved using transcervical insemination with frozen-thawed spermatozoa in alpacas could be improved by adding SP. This study aimed to evaluate the effect of the whole SP on some in vitro parameters of alpaca spermatozoa after the freezing-thawing-process and the fertility after artificial insemination. It would contribute to a better understanding of the interaction between thawed sperm cells and SP. Spermatozoa were obtained by surgically diverted vas deferens. The samples were diluted with a Tris-based extender, packaged in straws, and frozen. At thawing, each straw was divided into two post-thawing conditions: with the addition of 10% of PBS (control) or with 10% SP (treatment). The sperm cells were evaluated using dynamic parameters, sperm cell morphology, and morphometry. Fertility was assessed by an artificial insemination trial. All in vitro parameters were analyzed by ANOVA. A heterogeneity test was scheduled for the fertility trial. After the freezing-thawing process, motility and plasma membrane functionality was improved when SP was added. No differences were found for post-thaw viability between the control and treatment samples. The percentage of normal cells was higher with SP at post-thawing, and a decrease of the presence of bent tailed spermatozoa with a droplet in the SP group was observed. The length of the head spermatozoa was 3.4% higher in the samples with PBS compared to those in which SP was added. Females pregnant at day 25 post-insemination were 0/12 (with SP inside the straw) and 1/10 (without SP inside the straw). In conclusion, the presence of 10% SP at post-thawing improves sperm cells' motility, functionality, and morphology, indicating that it would be beneficial to improve the frozen-thawed alpaca's physiology spermatozoa. More fertility trials must be developed to increase this knowledge

Analysis of genetic distance between Peruvian Alpaca (Vicugna Pacos) showing two distinct fleece phenotypes, Suri and Huacaya, by means of microsatellite markers

Two coat phenotypes exist in Alpaca, Huacaya and Suri. The two coats show different fleece structure, textile characteristics and prices on the market. Although present scientific knowledge suggests a simple genetic model of inheritance, there is a tendency to manage and consider the two phenotypes as two different breeds. A 13 microsatellite panel was used in this study to assess genetic distance between Suri and Huacaya alpacas in a sample of non-related animals from two phenotypically pure flocks at the Illpa-Puno experimental station in Quimsachata, Peru. The animals are part of a germplasm established approximately 20 years ago and have been bred separately according to their coat type since then. Genetic variability parameters were also calculated. The data were statistically analyzed using the software Genalex 6.3, Phylip 3.69 and Fstat 2.9.3.2. The sample was tested for Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) and after strict Bonferroni correction only one locus (LCA37) showed deviation from equilibrium (P<0.05). Linkage disequilibrium (LD) was also tested and 9 loci associations showed significant disequilibrium. Observed heterozygosis (Ho= 0.766; SE=0.044), expected heterozygosis (He=0.769; SE=0.033), number of alleles (Na=9.667, SE=0.772) and Fixation index (F=0.004; SE=0.036) are comparable to data from previous studies. Measures of genetic distance were 0.06 for Nei’s and 0.03 for Cavalli-Sforza’s. The analysis of molecular variance reported no existing variance between populations. Considering the origin of the animals, their post domestication evolution and the reproductive practices in place, the results do not show genetic differentiation between the two populations for the studied loci

TASA DE OVULACIÓN UTILIZANDO LIBERADOR DE GONADOTROPINAS Y PLASMA SEMINAL EN ALPACAS Y LLAMAS

The aim of the present study was to determine the ovulation rate using GnRH (buserelin) and seminal plasma of alpaca as ovulation inductors in alpacas and llamas. For this, 93 alpacas and 92 llamas were distributed in two groups: a group treated with buserelin (42 μg) IM, and a group treated with 1 ml of seminal plasma IM (50/50% seminal plasma of alpaca and PBS + antibiotics). The ovulation rate was 78.7 and 88.9% in alpacas and 80.6 and 70.0% in llamas using buserelin and seminal plasma respectively; and without statistical differences due to type of ovulation inductor, ovary carrying the preovulatory follicle or species.Se trabajó con 93 alpacas y 92 llamas a fin de determinar el porcentaje de ovulación utilizando GnRH (buserelina) y plasma seminal de alpaca como inductor de ovulación en alpacas y llamas. Los animales se distribuyeron en dos grupos, un grupo tratado con 42 μg de buserelina intramuscular y otro grupo tratado con 1 ml de plasma seminal intramuscular (50/50% de plasma seminal y PBS + antibióticos). La tasa de ovulación fue de 78.7 y 88.9% en alpacas y 80.6 y 70.0 en llamas con buserelina y plasma seminal, respectivamente, no encontrándose diferencias estadísticas entre tipo de inductor, ovario con presencia de folículo preovulatorio o especie