Puesta a punto y validación de un método de análisis de aflatoxinas en frutos secos y cereales

Las aflatoxinas forman parte de un grupo de metabolitos secundarios tóxicos producidos por hongos filamentosos, conocidos genéricamente como micotoxinas. Mohos como Aspergillus flavus y Aspergillus parasiticus son capaces de sintetizar aflatoxinas cuando las condiciones ambientales y nutricionales son las adecuadas. Los hongos del género Aspergillus son muy comunes y están muy distribuidos en la naturaleza, sobretodo en zonas de clima cálido y húmedo. Esto incrementa en gran medida el riesgo de contaminación de alimentos por hongos que son capaces de producir las aflatoxinas, generalmente por condiciones de almacenamiento inadecuadas. La importancia de estos compuestos radica en sus efectos nocivos para la salud humana y animal, ya que pueden actuar como agentes tóxicos, carcinogénicos, teratogénicos e inmunosupresores. Según la RASFF (Rapid Alert System for Food and Feed), en la actualidad se emiten más de 500 alertas alimentarias anuales debido a la contaminación por aflatoxinas en distintos alimentos. Con el propósito de aportar datos fiables sobre la presencia de estos contaminantes en muestras de alimentos, se ha puesto a punto y validado un método para la determinación de aflatoxinas (B1, B2, G1 y G2) en distintas matrices alimentarias (frutos secos y cereales) mediante cromatografía líquida de ultra resolución (UPLC) acoplada a un detector de fluorescencia, basándonos en todo momento en normas reconocidas internacionalmente. Se han optimizado y validado parámetros tanto del análisis cromatográfico, como de la extracción y purificación de las muestras, hasta obtener una metodología que proporciona resultados satisfactorios y cumple con los parámetros de especificidad, linealidad, sensibilidad, exactitud y precisión establecidos por la normativa europea. Una vez validado el método se han analizado muestras de frutos secos y cereales (18 muestras de materia prima y 17 muestras comerciales recubiertas con chocolate)aportadas por una empresa de frutos secos. Todas las muestras presentaron unos valores de contaminación muy bajos y en todos los casos inferiores a los límites máximos establecidos por la legislación, a excepción de una de pistacho que dio un valor muy por encima del límite

Evaluación y control del riesgo de Toxoplasma gondii en el proceso integral de elaboración del jamón curado

Toxoplasma gondii es un protozoo de distribución mundial, que afecta a los félidos como hospedadores definitivos, y a los animales de sangre caliente, incluído el hombre, como hospedadores intermediarios. Se estima que entre el 25 % - 40 % de la población humana está infectada. La toxoplasmosis, normalmente cursa de forma leve o asintomática, pero en personas inmunocomprometidas y en mujeres embarazadas puede llegar a producir una enfermedad severa.Dado su carácter omnívoro, los cerdos tienen una gran posibilidad de infectarse con T. gondii. Además, los quistes del parásito que se forman en sus tejidos pueden persistir durante varios años, siendo el consumo de carne cruda, poco cocinada o curada de esta especie una de las fuentes más importantes de infección en el hombre.España es un país con una gran tradición en la elaboración y consumo de productos cárnicos curados. De los elaborados con carne de cerdo, el jamón curado es uno de los productos más representativo de la gastronomía española, siendo nuestro país el primer productor mundial de jamones y paletas. Por ello, los consumidores demandan jamones curados libres de T. gondii y esto ha llevado a las empresas del sector cárnico a la necesidad de obtener datos científicos sobre el efecto de los tratamientos tecnológicos que aplican en la viabilidad del parásito, y así, poder garantizar la seguridad alimentaria.Por todo ello, los objetivos de esta Tesis Doctoral se han centrado en el estudio de T. gondii en el proceso integral de elaboración del jamón curado; en la producción primaria, en el matadero y en la industria de elaboración del jamón curado.Se ha realizado un estudio de la seroprevalencia porcina en 161 granjas de la Comunidad Autónoma de Aragón. El número de muestras analizadas se ha calculado estadísticamente para conseguir datos representativos del total de los animales. Se han analizado 1.200 sueros porcinos mediante la técnica de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI), calculándose una seroprevalencia de T. gondii en cerdo del 24,5 %.Asimismo, se han estudiado los principales factores de riesgo presentes en las granjas que favorecen el contacto de los cerdos con T. gondii. Para ello se han realizado encuestas epidemiológicas en todas las instalaciones incluidas en el trabajo, así como visitas a las explotaciones para ver su estado. Tras su análisis estadístico se ha comprobado que los factores que tiene influencia en la infección son la presencia de gatos dentro o fuera de las granjas, la presencia de otros animales como perros en el exterior de las instalaciones, el censo porcino, el incorrecto mantenimiento y el desorden de las instalaciones, y el no usar cebos para el control de roedores.Del total de los animales analizados se han seleccionado 38 animales con diferentes títulos serológicos y 3 como controles negativos. Los animales se han sacrificado y uno de los perniles y los órganos diana (lengua y corazón) se han analizado en fresco para detectar al parásito en los tejidos porcinos. La presencia de T. gondii se ha evaluado mediante bioensayo en ratón y por qPCR, obteniéndose valores del 73,7 %. La viabilidad del parásito en tejidos porcinos frescos se ha comprobado detectando DNA de T. gondii en los cerebros de los ratones seropositivos. El parásito era viable en el 42,1 % de los tejidos analizados.Con los resultados anteriores se ha comprobado que existe una relación estadísticamente significativa entre el título serológico del cerdo y la detección del parásito en sus tejidos. Se ha observado una mayor presencia del parásito en los tejidos de cerdos con títulos serológicos iguales o mayores a 1:80.Asimismo, también se ha realizado un estudio estadístico para comparar los resultados obtenidos en cada uno de los tejidos porcinos (pernil y órganos diana). Se ha llegado a la conclusión que no hay diferencias entre los valores observados de presencia y viabilidad del parásito entre ambos tejidos. La constatación de que no existen diferencias significativas en estos resultados, existiendo concordancia entre ambas muestras, nos permite proponer como herramienta de control de materia prima la selección y análisis de órganos diana, de menor valor comercial que los perniles.El pernil homólogo de cada uno de los cerdos se ha sometido al proceso de curación, dividiéndose en dos tiempos de curado (9 y 12 meses). Tras el procesado se ha realizado un estudio para evaluar la presencia y viabilidad de T. gondii en los jamones y así comprobar la eficacia del curado en la supervivencia del parásito. Se ha observado que este tratamiento tiene eficacia contra T. gondii pero no lo destruye totalmente, ya que se ha detectado presencia del parásito en 11 jamones y viabilidad en 4 de los mismos. Asimismo, se ha determinado que el tiempo de curado de 12 meses tiene mayor efecto frente al parásito que el tratamiento de 9 meses.Por último, otro de los hitos que se han conseguido en este trabajo ha sido el estudio de los factores fisicoquímicos de los jamones para evaluar su influencia en la presencia y viabilidad del parásito en el producto final. Se ha determinado una relación estadística entre la concentración de grasa del jamón curado y la viabilidad del parásito.Con los resultados obtenidos, se han propuesto medidas de gestión del riesgo de T. gondii en la industria de elaboración de jamón curado, como la aplicación de Buenas Prácticas de Higiene en granjas, la selección de cerdos seronegativos o con titulaciones que impliquen una baja probabilidad de encontrar el parásito en su carne, la realización del control de T. gondii en órganos diana con un menor valor comercial o el aumento del tiempo de curado del jamón.<br /

Evaluation of the Spanish population coverage of a prospective HLA haplobank of induced pluripotent stem cells

Background: iPSC (induced pluripotent stem cells) banks of iPSC lines with homozygous HLA (human leukocyte antigen) haplotypes (haplobanks) are proposed as an affordable and off-the-shelf approach to allogeneic transplantation of iPSC derived cell therapies. Cord blood banks offer an extensive source of HLA-typed cells suitable for reprogramming to iPSC. Several initiatives worldwide have been undertaken to create national and international iPSC haplobanks that match a significant part of a population. Methods: To create an iPSC haplobank that serves the Spanish population (IPS-PANIA), we have searched the Spanish Bone Marrow Donor Registry (REDMO) to identify the most frequently estimated haplotypes. From the top ten donors identified, we estimated the population coverage using the criteria of zero mismatches in HLA-A, HLA-B, and HLA-DRB1 with different stringencies: high resolution, low resolution, and beneficial mismatch. Results: We have calculated that ten cord blood units from homozygous donors stored at the Spanish cord blood banks can provide HLA-A, HLA-B, and HLA-DRB1 matching for 28.23% of the population. Conclusion: We confirm the feasibility of using banked cord blood units to create an iPSC haplobank that will cover a significant percentage of the Spanish and international population for future advanced therapy replacement strategies