Effect of tibolone on the morphology of skeletal muscle, liver enzymes and blood glucose level in castrated female rats

INTRODUÇÃO: O fígado é uma estrutura de elevada complexidade e é fundamental entender como determinadas substâncias podem afetar sua estrutura e suas funções. OBJETIVO: Analisar a influência da tibolona no metabolismo hepático por meio da avaliação de enzimas e metabólitos comumente utilizados em provas de função hepática. MÉTODOS: Foram utilizadas dez ratas Wistar, divididas em dois grupos: controle (n = 4) e tibolona (n = 6), em status de menopausa cirúrgica. A tibolona (1 mg) foi administrada diariamente por gavagem durante 20 semanas, com avaliação periódica do peso corporal. Após sedação, efetuou-se coleta de sangue para avaliação bioquímica de albumina (Alb) sérica, fosfatase alcalina (FA), transaminases (aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase [AST/ALT]), gama-glutamiltranspeptidase (GGT) e glicose, mediante espectrofotometria. O músculo esquelético da coxa foi avaliado por histomorfometria em cortes histológicos corados com hematoxilina e eosina (HE). RESULTADOS: Os animais do grupo tibolona mostraram menor peso corporal, alterações musculares esqueléticas e discretas alterações bioquímicas. Além disso, AST e FA estavam diminuídas e GGT estava mais elevada, porém sem significância estatística. A histomorfometria do músculo revelou uma tendência de menor volume celular nesse grupo. CONCLUSÃO: A tibolona, administrada em alta dose e por tempo prolongado, não interfere de forma significativa nas funções metabólicas e de síntese hepáticas, bem como na permeabilidade da membrana celular, entretanto parece modular a expressão genômica da GGT. A tibolona apresenta influência sistêmica associada a menor peso e diminuição da massa muscular e aumento significativo no peso relativo do fígado, além de alteração da glicogenólise hepática e muscular, da gliconeogênese hepática e dos níveis de glicose circulante

Amamentação: relato de experiência sobre projeto de extensão / Breastfeeding: experience report of extension project

A amamentação é um processo fisiológico que promove benefícios para o binômio mãe-bebê. Apesar de fisiológico, não é um processo simples e a lactante pode enfrentar intercorrências durante o aleitamento, o que dificulta sua continuidade. A extensão universitária pode agir em prol da promoção do aleitamento materno e o desenvolvimento de rodas de conversas, eventos e palestras são importantes dispositivos de incentivo à amamentação. O objetivo deste relato é descrever e discutir as ações de promoção ao aleitamento materno do projeto de extensão "Vivências e apoio aos primeiros 1000 dias de vida”. Estas ações permitem grande troca entre profissionais em formação, sociedade e profissionais da saúde. A intenção primordial dos encontros é alcançar outros alunos e professores da Universidade, bem como toda a sociedade, esclarecendo e desmistificando conceitos que colocam a amamentação em risco de insucesso. As ações foram realizadas pelo Germinar (grupo de estudos em reprodução e nascimento) sempre com o auxílio de profissionais da área de aleitamento materno e saúde da mulher. Os temas propostos para as ações de extensão foram normalmente norteados pela Semana Mundial de Aleitamento Materno de cada ano. Concluímos que as mães que adquirem conhecimento por meio das discussões realizadas tornam-se munidas de conhecimento baseadas em evidências científicas, o que contribui para o sucesso da amamentação. Além disso, o envolvimento dos graduandos com os relatos reais, fornece aos mesmos uma experiência única. Nesse contexto, os pilares que sustentam a instituição são fortalecidos

Ação da tibolona no epitélio urogenital de ratas castradas

The aim of this study is to determine the effect of prolonged use of tibolone in the urogenital epithelium of ovariectomized rats. Fourteen Wistar rats, aged 8 weeks and average weight of 250g, castrated 30 days before the experiment were used. On day 0 of the experiment, the rats from tibolone group (n=9) were treated per os with 1mg/day. Rats from the control group (n=5) received only the vehicle, 0.5% carboxymethylcellulose. Every week the rats were weighed and food intake was measured every 3-4 days. Vaginal cytology was performed in all rats on days 30, 0, 1 to 6 of the experiment and then every 30 days. Slides were immediately fixed in 95% alcohol and stained by the Papanicolaou technique. At 20 weeks of experiment the animals were anesthetized and sacrificed by cervical dislocation. The urogenital system was removed from each rat, and set at 10% buffered formalin, cleaved after 48 hours and processed for embedding in paraffin. Histological sections of 4µm from vagina, urethra and bladder were stained with hematoxylin and eosin, picrosirius red, PAS and PAS/diastase, and Weigert s resorcin fuchsin. Cell proliferation was analyzed by immunohistochemistry using the ki-67 marker. Furthermore, morphometric analyses were performed for epithelial thickness, percent area of collagen fibers and blood vessels, mast cells and ki-67 positive nuclei per mm basal membrane. Means and standard error of means were calculated in each group. The data were compared using the Mann-Whitney test, with significance level at P<0.05. In control group, all the vaginal smears were compatible to anoestrus till the end of experiment. In the tibolone group, from 3 days in all rats cytology was similar to estrus, which remained without major changes until the end. Significant lower daily food intake and body weight were found in the tibolone when compared to the control group (P<0.0001). In the vagina, epithelial thickness, number of ki-67 positive nuclei per mm basal membrane, number of vessels and number of mast cells were significantly higher in the tibolone group when compared to the control group. In the lower urinary tract, only the number of mast cells was significantly higher in the urethra of treated animals compared to controls. The content of glycogen and glycoproteins in the vaginal epithelium was modified by tibolone; alterations were less frequent in the urethral epithelium and no change was observed in the bladder epithelium. Tibolone administered in high doses and long-term has trophic effect in the vagina and has no dysplastic or neoplastic effect on vagina, urethra and bladder of castrated ratsO objetivo deste trabalho é verificar o efeito do uso prolongado de tibolona no epitélio urogenital de ratas castradas. Usou-se 14 ratas Wistar, com idade de 8 semanas e peso médio de 250g, castradas 30 dias antes do inicio do experimento. No dia 0, a um grupo (n=9) foi administrado tibolona per os na dose de 1mg/dia por animal. As outras constituíram o grupo controle (n=5) que recebeu apenas o veículo, carboximetilcelulose 0,5%. As ratas foram pesadas semanalmente e o consumo de ração foi medido a cada 3-4 dias. Foi coletado material para citologia vaginal de todas as ratas nos dias 30 (prévio à castração), 0 (prévio ao tratamento), 1 a 6 do experimento e, posteriormente a cada 30 dias. As lâminas foram imediatamente fixadas em álcool 95% e coradas pela técnica de Papanicolaou. Com 20 semanas de experimento os animais foram anestesiados e sacrificados por deslocamento cervical. Foi retirado o sistema urogenital de cada rata, sendo fixado em formol a 10% tamponado, clivado após 48 horas e processado para inclusão em parafina. Cortes histológicos de 4µm de vagina, uretra e bexiga, foram corados com hematoxilina e eosina, picrosírius red, PAS e PAS/diastase e resorcina fucsina de Weigert. A análise imuno-histoquímica para observação da proliferação celular foi realizada utilizando o marcador ki-67. Além disso, foram realizadas análises morfométricas para espessura epitelial, área percentual de fibras colágenas e vasos sanguíneos, mastócitos e núcleos ki-67 positivos/mm de membrana basal. Médias e erro padrão das médias foram calculadas em cada grupo. Os dados obtidos foram comparados mediante o teste de Mann-Whitney, com nível de significância em p<0,05. No grupo controle, até o final do experimento todos os esfregaços correspondiam a anestro. No grupo tibolona, a partir do dia 3 em todas as ratas a citologia era similar a estro, o que se manteve sem grandes alterações ate o final. Em relação ao consumo de ração, o grupo tibolona apresentou consumo diário e peso corporal significativamente menores (p<0,0001) quando comparado ao grupo controle. Na vagina, espessura epitelial, número de núcleos ki-67+/mm, número de vasos e número de mastócitos foram significativamente maiores no grupo tibolona em relação ao grupo controle. No trato urinário baixo, somente o número de mastócitos foi significativamente maior na uretra de animais tratados em comparação aos controles. A tibolona modificou o conteúdo de glicogênio e glicoproteinas no epitélio vaginal, no epitélio uretral com menor frequência e não alterou no epitélio vesical. A tibolona administrada em alta dose e por longo prazo tem efeito trófico na vagina e não tem efeito displásico nem neoplásico em vagina, uretra e bexiga de ratas castrada

Efeito do uso contínuo de hormônios esteroides sexuais na mama de ratas wistar

Não há consenso sobre o efeito do uso cumulativo de esteroides sexuais no desenvolvimento de neoplasias mamárias. O objetivo deste estudo é verificar, na mama de ratas castradas, o efeito da terapia hormonal (TH) com tibolona (T), estradiol (E2) ou estradiol/progesterona combinado (E2Pg), após uso de anticoncepcional hormonal (AH) durante a vida reprodutiva. Foram utilizadas 50 ratas Wistar, fêmeas, pesando 172,7±2,3 g, divididas aleatoriamente em 10 grupos (n=5/grupo): AH+OVX+T; AH+OVX+E2; AH+OVX+E2Pg; AH+OVX+pl; AH+SHAM+pl; pl+OVX+T; pl+OVX+E2; pl+OVX+E2Pg; pl+OVX+pl; pl+SHAM+p. Cada animal recebeu inicialmente tratamento semanal com AH (Mesigyna®) ou placebo (pl) por via s.c. (0,02 mL) durante 21 dias. Posteriormente, os animais foram ooforectomizados ou sham operados e, após 28 dias, todos receberam tratamento diário por gavagem (0,5 mL) com E2 (1 mg/mL), E2Pg (1 mg/mL+0,5 mg/mL), T (2 mg/mL) ou pl durante 35 dias. Os métodos de avaliação foram citologia vaginal, controle de peso corporal e consumo de ração para cálculo da eficiência alimentar, peso uterino, dosagens de estradiol e progesterona séricas, histopatologia mamária e histomorfometria para áreas percentuais das estruturas mamárias e expressão dos genes c-myc, IGFII, Bcl2, Bax, RE alfa e beta, RP e RA por RT-PCR em tempo real. Médias e erro padrão da média foram calculadas em cada grupo. Efetuou-se análise estatística mediante os testes apropriados, com significância estabelecida em p<0,05. O uso de AH determinou glândulas mamárias bem desenvolvidas, ácinos e ductos com luz dilatada, contendo secreção com gotículas de gordura (aspecto de lactação). Hiperplasia típica de brotos alveolares foi observada em 12 mamas abdominais (três em AH+OVX+T, duas em AH+OVX+E2, duas em AH+OVX+E2Pg, uma em AH+OVX+pl e quatro em AH+SHAM+pl) e em três mamas torácicas (duas em AH+OVX+pl e uma em AH+SHAM+pl). Sem o tratamento AH, e com qualquer tipo de TH, bem como no grupo pl+SHAM+pl, os ductos e ácinos apresentaram luz sem dilatação e sem secreção, na maioria das vezes; em pl+OVX+pl, esse padrão era constante e o aspecto das glândulas, atrófico. Dependendo da intensidade de dilatação ductoacinar e do desenvolvimento glandular houve diferenças nas áreas percentuais luminal e ductoacinar de mama e lóbulos mamários. O uso de AH determinou maiores valores médios desses componentes, comparado aos respectivos grupos sem uso de AH. A expressão dos genes de receptores hormonais e dos associados à proliferação celular, c-myc e IGFII e à apoptose, Bax e Bcl2, não foi modificada significativamente por qualquer um dos tratamentos experimentais, comparado à mama atrófica (pl+OVX+pl). A expressão de c-myc foi significativamente superior em AH+SHAM+pl vs. pl+SHAM+pl, já a expressão de IGFII e de RE alfa e beta foi numericamente superior, e a de bax e RP foi inferior. O uso de qualquer TH aumentou significativamente a expressão de genes associados à proliferação e de RE alfa vs. pl+SHAM+pl. O perfil de modificações da expressão gênica pelo uso de TH com tibolona, com ou sem AH prévio, apresentou-se diferente das outras TH. O uso de anticoncepcional hormonal durante a vida reprodutiva pode aumentar o risco de desenvolvimento de câncer de mama, já que acarreta hiperplasia de brotos alveolares, independente da utilização de terapia hormonal na pós-menopausaThere is no consensus about the effect of cumulative use of sex steroids on mammary tumors development. The aim of this study is to verify the effect of hormone therapy (HT) using tibolone (T), estradiol (E2) or conjugated estradiol / progesterone (E2Pg) after hormonal contraceptive (HC) use during the reproductive life on the mammary gland of ovariectomized rats. Fifty Wistar female rats, weighing 172.7 ± 2.3 g were used. Rats were randomly divided into 10 groups (n = 5/group): HC+OVX+T, HC+OVX+E2, HC+OVX+E2Pg, HC+OVX+pl, HC+SHAM+pl, pl+OVX+T, pl+OVX+E2, pl+OVX+E2Pg, pl+OVX+pl, pl+SHAM+pl. Each animal received weekly treatment with HC (Mesigyna ®) or placebo (pl) via s.c. (0.02 ml) for 21 days. Subsequently, the animals were ovariectomized or sham operated and, after 28 days, rats received 0.5 mL of E2 (1 mg/mL), E2Pg (1 mg/ml +0.5 mg/mL), T (2 mg/ml) or pl for 35 days by gavage. Vaginal cytology, control of body weight and feed consumption to feed efficiency calculation, uterine weight, measurements of serum estradiol and progesterone, mammary gland histopathology and histomorphometry for area percentage of mamma structures and expression of c-myc, IGFII, Bcl2, Bax, alpha and beta ER, PR, and AR genes by RT-PCR in real time were performed. Mean and standard deviation were calculated for each group. Appropriate statistical analysis tests were applied, with significance level at P<0.05. HC use determined full development of mammary glands, ducts and acini with dilated lumen containing fat secretion (lactation aspect). Typical hyperplasia of alveolar buds was observed in 12 abdominal glands (three in HC+OVX+T, two in HC+OVX+E2, two in HC+OVX+E2Pg, one in HC+OVX+pl and four HC+SHAM+pl) and three in thoracic glands (two in HC+OVX+pl and one in HC+SHAM+pl). Rats treated only with HT and pl+SHAM+pl, showed ducts and acini without secretion in most cases. In pl+OVX+pl group, the gland appearance was atrophied. Depending on the intensity of ductoacinar development, differences were seen in glandular luminal and ductoacinar percentage areas of mamma and lobules. The use of HC determined highest mean values of these components compared to the respective groups without HC. Gene expression of hormone receptors and cell proliferation-related genes c-myc and IGFII, and apoptosis-related genes bax and Bcl2 was not significantly altered by experimental treatments compared to the atrophied gland (pl+OVX+pl). C-myc expression was significantly higher in HC+OVX+pl vs. pl+SHAM+pl since the expression of IGFII and ER alpha and beta was numerically higher while Bax and PR was lower. The use of any HT increased significantly the expression of proliferation-related genes and ER alpha vs. pl+SHAM+pl. The gene expression pattern was altered by T use, with or without HC. The hormonal contraceptive use during reproductive life may increase the risk of developing mammary gland cancer since it causes hyperplasia of alveolar buds, regardless of the use of hormone therapy in post-menopause196f

Efeito da tibolona sobre o endométrio de ratas castradas Effect of tibolone on endometrium of castrated rats

OBJETIVO: avaliar o efeito do uso prolongado de alta dose de tibolona na morfologia do endométrio em ratas castradas. MÉTODOS: foram utilizadas 15 ratas Wistar, fêmeas, com idade de oito semanas e peso médio de 250 g. Todas as ratas foram submetidas à ooforectomia bilateral e 30 dias depois foi coletada citologia vaginal, verificando-se o status de menopausa. As ratas foram divididas aleatoriamente em dois grupos: o tratado (n=9) recebeu via oral 1 mg tibolona/dia; o controle (n=6) recebeu apenas solução do veículo carboximetilcelulose. Após 20 semanas de tratamento, todos os animais foram sedados e sacrificados por deslocamento cervical. Os úteros foram retirados e fixados em formol 10% tamponado. Ambos os cornos uterinos foram clivados em três regiões (proximal, medial, distal) e processados para inclusão em parafina. Cortes histológicos corados com hematoxilina-eosina foram submetidos à análise morfológica e morfométrica. Foram avaliados os seguintes parâmetros: espessura do epitélio superficial endometrial, espessura do estroma endometrial, área endometrial, número absoluto de glândulas endometriais e número de glândulas/área endometrial. Os dados obtidos foram comparados mediante o teste t de Student. RESULTADOS: no Grupo Tibolona os úteros se apresentaram bem desenvolvidos e houve aumento significativo (pPURPOSE: to evaluate the effect of long-term use of a high dose of tibolone on the morphology of the endometrium of castrated female rats. METHODS: fifteen female Wistar rats, aged eight weeks and weighting about 250 g were used. All the female rats were submitted to bilateral oophorectomy and 30 days afterwards, vaginal cytology was collected, to verify the menopause status. The female rats were randomly divided in two groups. The Treatment Group (n=9) received 1 mg of tibolone/day orally; the Control Group (n=6) received a solution of carboxymethylcellulose vehicle. After 20 weeks of treatment, all the animals were sedated and sacrificed by cervical dislocation. The uterus was removed and fixated in 10% buffer formaldehyde. Both uterine horns were divided in three regions (proximal, medial and distal) and processed to be included in paraffin. Histological sections, stained with hematoxylin-eosin were submitted to morphological and morphometrical analysis. The following parameters have been analyzed: thickness of the endometrial superficial epithelium, thickness of the endometrium stroma, endometrial area, absolute number of endometrial glands and number of glands/endometrial area. The data obtained were compared by the t-Student test. RESULTS: in the Tibolone Group, the uteri were well developed and there was a significant increase (p<0.01) of all the histomorphometric parameters. In some cases, the cylindrical epithelium became stratified, pavimentous and covered the internal portions of the glands, as well as of the endometrium cavity. Rats from the Control Group presented uterine atrophy. There were few tubular-like glands and scarce intercellular substance. Glands were covered by cubic epithelium which extended itself to the endometrial cavity. CONCLUSIONS: high doses of tibolone, given for long periods of time to castrated female rats, have an estrogenic effect which can be dose-dependent, causing proliferation in the endometrium and causing changes in the cell differentiation (squamous metaplasia), but do not lead to hyperplasia