Molecular detection and phylogenetic analysis of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) in swabs and lung tissues of adult cattle

Bovine respiratory syncytial viruses virus (BRSV) is one of the etiologic agents of pneumonia in young cattle. Few studies have been made aiming detection of the virus in samples collected from adult animals, especially those asymptomatic bovines. However, it is assumed that infections in these groups may occur mostly asymptomatic and this would be an important mechanism for maintaining of BRSV in herds. In this study, the goal was to conduct an analysis of the occurrence of asymptomatic infections by BRSV in lung samples (n=68) and nasal swabs (209) taken from adult animals collected in abattoirs from Southern and Southeastern Brazil respectively, to detect via polymerase chain reaction the occurrence of infected animals in populations of adult cattle. The samples that resulted positive (6) on RT-PCR were subsequently subjected to cutting with restriction enzymes and sequencing for genetic characterization (2 samples). All samples belongs to subgroup B of BRSV, which is reported as the one circulating in Brazil. The results obtained demonstrate that BRSV may be present in samples taken from adult animals, which is in agreement the hypothesis that infections in adults run in a sub-clinical way that may be of importance as a maintenance mechanism of the virus in bovine herds.O vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) é um dos agentes etiológicos de pneumonias em bovinos jovens. Poucos estudos foram realizados visando à detecção do agente em amostras coletadas de animais adultos, e em especial de bovinos assintomáticos. No entanto, presume-se que as infecções ocorridas nestes grupos possam ocorrer em sua maioria de forma assintomática e este seria um mecanismo importante para manutenção do BRSV nos rebanhos. No presente estudo, o objetivo foi realizar uma análise da prevalência de infecções assintomáticas pelo BRSV em pulmões (n=68) e swabs nasais (209) coletados de bovinos adultos coletadas em frigoríficos da região Sul e Sudeste respectivamente, no sentido de detectar por intermédio de reação da polimerase em cadeia qual a taxa de animais infectados em populações de animais adultos onde não ocorram sinais clínicos da infecção. As amostras positivas à RT-PCR (6) foram posteriormente submetidas ao corte com enzimas de restrição (REA) e sequenciamento para caracterização genética do gene F (2 das amostras). Todas as amostras se enquadram no subgrupo B de BRSV, o grupo circulante no Brasil conforme estudos anteriores. Os resultados obtidos demonstram que o BRSV pode estar presente em amostras obtidas de animais sadios, reforçando a hipótese de que infecções subclínicas fazem parte do mecanismo de manutenção do vírus nos rebanhos.961966Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq

Detection Of Bovine Respiratory Syncytial Virus In Experimentally Infected Balb/c Mice.

The present study used an RT-nested-PCR and an immunohistochemistry assay to detect bovine respiratory syncytial virus in tissues from experimentally infected balb/c mice. As a first step, Chicken Embryo Related (CER) cell monolayers infected with the BRSV-25-BR strain isolated in Brazil were used for antigen production. Then, the infected lung and tracheal tissues of female balb/c mice were collected on 3, 5, 7 and 10 days post-infection and submitted to both techniques. Primers specific to F and G genes that amplify fragments of 481 bp and 371 bp, respectively, were used. The BRSV detection was not successful in all of the animals tested. The genomic fragment of the G gene from the organs of some infected mice on all analyzed post-infection days was amplified. However, in the RT-nested-PCR corresponding to the F gene, it was not possible to observe any amplified fragment. This was probably due to the higher sensitivity of the developed technique to amplify the fragment corresponding to the G gene compared to the F gene. Moreover, only three of the lungs collected five days post-infection were positive by immunohistochemistry. To the author's knowledge, this is the first study reporting bovine respiratory syncytial virus detection in balb/c mice after experimental inoculation.35189-9

Molecular detection and phylogenetic analysis of the gene H from canine distemper virus isolates circulating at the municipality of Campinas, São Paulo

Canine distemper virus (CDV), a Morbillivirus of the family Paramyxoviridae, is the etiological agent of neurological and systemic disease in dogs. The laboratory diagnosis of infection requires viral isolation or detection of genetic material of the virus in secretions or tissues of dogs with clinical suspicion of the disease. The genetic diversity among isolates of CDV can be assessed by sequencing and phylogenetic analysis of the gene that encodes the viral hemagglutinin (H gene), and there is currently a special interest in comparing the strains currently circulating in the field with the genogroup America-1, which comprises strains present in vaccines available in the market. In this study, the molecular detection of CDV gene H was performed from biological samples harvested ante-and post-mortem from 15 dogs with clinical signs suggestive of canine distemper in the metropolitan region of Campinas, São Paulo. Ten of the 15 dogs examined had at least one positive organ under molecular detection and the obtained amplicons were sequenced and further analyzed by molecular phylogenetic analysis. Similarly to what has already been reported on previous studies regarding the diversity of the gene H in other countries, the phylogenetic reconstruction obtained for the samples of cases of distemper from Campinas region showed they were grouped with the North American, European and Japanese newly described samples, a genetic group distinguished from classical samples of CDV, named America-1, which encompasses the vaccine strains Snyder Hill, Onderstepoort and Lederle.O vírus da cinomose canina (CDV), um Morbillivirus da família Paramyxoviridae, é o agente etiológico de doença neurológica e sistêmica em cães. O diagnóstico laboratorial da infecção requer o isolamento viral ou detecção do material genético do vírus em secreções ou tecidos de cães com suspeita clínica da doença. A diversidade genética entre os isolados de CDV pode ser aferida pelo sequenciamento efilogenia molecular do gene que codifica a hemaglutinina viral (gene H), havendo atualmente um especial interesse em comparar as amostras circulantes a campo com o genogrupo América-1, que abrange as cepas presentes nas vacinas disponíveis no mercado. No presente estudo, foi realizada a detecção molecular do gene H de CDV a partir de amostras biológicas colhidas ante- e post- -mortem de 15 cães com sinais clínicos sugestivos de cinomose na região metropolitana de Campinas, São Paulo. Dez dos 15 cães analisados tiveram ao menos um órgão positivo na detecção molecular e os amplicons obtidos foram submetidos ao sequenciamento nucleotídico seguido de análise filogenética molecular. De forma semelhante ao que já foi reportado para estudo analisando a diversidade do gene H em outros países, a reconstrução filogenética obtida para as amostras de casos de cinomose da região de Campinas demonstrou as mesmas foram agrupadas junto a amostras norte-americanas, europeias e japonesas recentes, em um grupo genético distinto do grupo de amostras clássicas de CDV, nomeado America-1, o qual engloba as estirpes vacinais Snyder Hill, Onderstepoort e Lederle.7277Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq

Perfil hematológico e bioquímico de tamanduás-mirins (Tamandua tetradactyla) criados ex situ no Estado de Santa Catarina Brasil: Hematological and biochemical profiles of lesser anteaters (Tamandua tetradactyla) raised ex-situ in Santa Catarina State Brazil

O objetivo deste relato foi descrever os resultados do perfil hematológico e bioquímico de tamanduás-mirins (Tamandua tetradactyla) criados ex-situ. Foram relatados os resultados de exames de hemograma total e bioquímico sérico de nove tamanduás-mirins considerados sadios, segundo exame clínico, mantidos ex-situ em um zoológico na cidade de Penha-SC. Uma vez induzidos, com cloridrato de cetamina 10% (5mg/kg) e xilazina 10% (1mg/kg) os animais foram mantidos sob anestesia inalatória com isofluorano para realização da avaliação clínica, exames e coleta de sangue. Os animais variavam de jovens a adultos, sendo sete fêmeas e dois machos. Dentre os parâmetros avaliados do hemograma, foram considerados a contagem total de eritrócitos e leucócitos, o hematócrito, a concentração de hemoglobina, o volume corpuscular médio, a hemoglobina corpuscular média, a concentração de hemoglobina corpuscular média e a proteína plasmática total. A presença de hemoparasitos não foi relatada em nenhum dos indivíduos amostrados. Nos exames bioquímicos, foram analisados os parâmetros de enzimas hepáticas e renais. Os resultados obtidos, de hemograma total, leucograma total, função hepática e função renal pouco diferiram daqueles disponíveis na escassa literatura existente. Os intervalos nos parâmetros bioquímicos e hematológicos aqui apresentados não podem ser considerados como padrão para a espécie, a qual tem uma distribuição geográfica muito ampla. No entanto, podem servir como referência para tamanduá-mirim mantidos nas mesmas condições, ou seja, ex-situ e sob cuidados humanos

Detecção molecular e análise filogenética de vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) em swabs e tecido pulmonar de bovinos adultos

O vírus respiratório sincicial bovino (BRSV) é um dos agentes etiológicos de pneumonias em bovinos jovens. Poucos estudos foram realizados visando à detecção do agente em amostras coletadas de animais adultos, e em especial de bovinos assintomáticos. No entanto, presume-se que as infecções ocorridas nestes grupos possam ocorrer em sua maioria de forma assintomática e este seria um mecanismo importante para manutenção do BRSV nos rebanhos. No presente estudo, o objetivo foi realizar uma análise da prevalência de infecções assintomáticas pelo BRSV em pulmões (n=68) e swabs nasais (209) coletados de bovinos adultos coletadas em frigoríficos da região Sul e Sudeste respectivamente, no sentido de detectar por intermédio de reação da polimerase em cadeia qual a taxa de animais infectados em populações de animais adultos onde não ocorram sinais clínicos da infecção. As amostras positivas à RT-PCR (6) foram posteriormente submetidas ao corte com enzimas de restrição (REA) e sequenciamento para caracterização genética do gene F (2 das amostras). Todas as amostras se enquadram no subgrupo B de BRSV, o grupo circulante no Brasil conforme estudos anteriores. Os resultados obtidos demonstram que o BRSV pode estar presente em amostras obtidas de animais sadios, reforçando a hipótese de que infecções subclínicas fazem parte do mecanismo de manutenção do vírus nos rebanhos

Dot-enzyme linked immunosorbent assay as an alternative technique for the detection of bovine respiratory syncytial virus (BRSV) antibodies

A dot-ELISA test for the detection of anti-BRSV antibodies is described. The objective of this study was the standardisation of a test as a fast, inexpensive and effective alternative to detect anti-BRSV antibodies. Its sensitivity, specificity and usefulness were compared to a commercial ELISA-kit and to the standard serum neutralisation (SN) test. The standardisation of the technique was done using nitrocellulose disks soaked with a viral sample isolated in Brazil, BRSV-25-BR. The best results were obtained when the disks were sensitised with a purified antigen at a concentration of 0.7 $\mu$g/disk and the bovine serum was diluted 1 : 200. The experiment used 423 samples of bovine serum collected in the main cattle breeding centres in Brazil. The standard SN, dot-ELISA technique and commercial ELISA kits scored 67.8%, 71.8% and 72.3% of the samples as positive, respectively. When compared to the SN test, the standardised dot-ELISA and the commercial ELISA tests presented relative sensitivities of 92.3% and 91.6% and relative specificities of 71.3% and 68.4% respectively. The results demonstrated that the dot-ELISA test is adequate for the objectives proposed by this study, being easy to use and economically viable. Thus, this test represents an alternative for BRSV serological diagnosis in the substitution of SN and commercial ELISA tests, recommendable for utilisation in laboratories with few resources.Technique immunoenzymatique (dot-ELISA) pour détecter les anticorps contre le virus syncytial respiratoire bovin. Cette étude décrit un test immunoenzymatique (dot-ELISA) pour la détection des anticorps contre le virus syncytial respiratoire bovin (anti-BRSV). Le but de ce travail est de standardiser une technique peu coûteuse et précise pour la détection des anticorps anti-BRSV. La sensibilité, la spécificité et l'utilité du test dot-ELISA ont été vérifiées et comparées à celles d'un kit commercial ELISA et du test de référence de séroneutralization (SN). La standardisation de la technique a été réalisée sur disque de nitrocellulose imprégnée de l'échantillon BRSV-25-BR, isolé au Brésil. Les résultats ont été obtenus avec un disque sensibilisé par l'antigène purifié à la concentration de 0,7 $\mu$g de protéine purifiée et le sérum bovin à la dilution de 1 : 200. Des échantillons (423) de sérum obtenus dans les principaux centres d'élevage de bovins au Brésil ont été utilisés. Des résultats positifs ont été obtenus dans 67,8 % des échantillons par SN, 71,8 % par dot-ELISA et 72,3 % par le kit ELISA commercial. Par comparaison aux tests de SN, les tests dot-ELISA et kit ELISA commercial ont présenté des sensibilités relatives de 92,3 % et 91,6 % et des spécificités relatives de 71,3 % et 68,4 % respectivement. Les résultats montrent que le test dot-ELISA standardisé est approprié au but de cette étude, étant très facile à utiliser, économique et adaptable aux conditions brésiliennes. Ainsi ce test constitue une alternative aux tests de SN et ELISA commercial pour le diagnostic sérologique du BRSV. On peut donc conseiller l'utilisation de ce test pour le diagnostic de BRSV dans les laboratoires dépourvus d'appareils sophistiqués

Detection of bovine respiratory syncytial virus in experimentally infected balb/c mice

The present study used an RT-nested-PCR and an immunohistochemistry assay to detect bovine respiratory syncytial virus in tissues from experimentally infected balb/c mice. As a first step, Chicken Embryo Related (CER) cell monolayers infected with the BRSV-25-BR strain isolated in Brazil were used for antigen production. Then, the infected lung and tracheal tissues of female balb/c mice were collected on 3, 5, 7 and 10 days post-infection and submitted to both techniques. Primers specific to F and G genes that amplify fragments of 481 bp and 371 bp, respectively, were used. The BRSV detection was not successful in all of the animals tested. The genomic fragment of the G gene from the organs of some infected mice on all analyzed post-infection days was amplified. However, in the RT-nested-PCR corresponding to the F gene, it was not possible to observe any amplified fragment. This was probably due to the higher sensitivity of the developed technique to amplify the fragment corresponding to the G gene compared to the F gene. Moreover, only three of the lungs collected five days post-infection were positive by immunohistochemistry. To the author’s knowledge, this is the first study reporting bovine respiratory syncytial virus detection in balb/c mice after experimental inoculation