Biological activity of ethylic acetate, ethanolic and aqueous extracts of timbo (Lonchocarpus floribundus) on cattle tick

Ethylic acetate, ethanolic and aqueous roots extracts of Lonchocarpus floribundus were used to evaluate their biological activity on cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Adult ticks were collected in artificially infested cattle, separated into groups of ten individuals, weighed and immersed separately in the extracts of L. Floribundus roots at concentrations of 5, 25, 50, 75 and 100 mg mL-1. For biological evaluation 14-21-day-old larvae were used, which were immersed in the extracts at concentrations of 1, 5, 10, 15 and 20 mg mL-1. After treatment, each group was placed in a Petri dish and maintained at 27 ± 1 ºC and 80 ± 5% relative humidity. The extracts evaluated were not effective to induce mortality of over 50%-engorged female. The ethylic acetate and ethanolic extracts induced 100% mortality of larvae. The ethanolic extract was more toxic (median lethal concentration, LC50, of 2.1 mg mL-1) than the ethylic acetate extract (LC50 = 4.1 mg mL-1). For the ethanolic extract it was estimated a median inhibitory concentration (IC50) of 3.0 mg mL-1 and it was more toxic than the other extracts on this parameter. Among the three extracts evaluated, the ethylic acetate and ethanolic extracts showed the highest potential for the control of reproduction of R. (B.) microplus, reaching 100% at concentration of 5 mg mL-1. The L. Floribundus root extracts showed biological activity on cattle tick.Os extratos acetato de etila, etanólico e aquoso de raízes de Lonchocarpus floribundus foram utilizados, a fim de avaliar a atividade biológica sobre carrapato bovino. Carrapatos adultos foram coletados em bovinos infestados artificialmente, separados em grupos de dez indivíduos, pesados e imersos, separadamente, nos extratos de raízes de L. Floribundus, nas concentrações de 5, 25, 50, 75 e 100 mg mL-1. Para a avaliação em larvas, foram utilizados indivíduos de 14 a 21 dias, os quais foram imersos nos extratos nas concentrações de 1, 5, 10, 15 e 20 mg mL-1. Após o tratamento, cada grupo foi colocado em placa de Petri e incubado a 27 ± 1 ºC e umidade relativa de 80 ± 5%. Os extratos avaliados não foram eficazes para induzir, acima de 50%, a mortalidade de fêmeas ingurgitadas. Os extratos acetato de etila e etanólico induziram 100% de mortalidade de larvas. Entretanto, quanto aos valores de concentração letal mediana (CL50), o extrato etanólico (CL50 = 2,1 mg mL-1) foi mais tóxico que o extrato acetato de etila (CL50 = 4,1 mg mL-1). O extrato etanólico estimou concentração inibitória mediana (CI50) de 3,0 mg mL-1 e foi mais tóxico que os demais extratos quanto a este parâmetro de avaliação. Entre os três extratos avaliados, os extratos acetato de etila e etanólico apresentaram os melhores resultados quanto ao controle de reprodução de R. (B.) microplus, atingindo 100% na concentração de 5 mg mL-1. Os extratos de raízes de L. Floribundus apresentaram atividade biológica sobre carrapato bovino

Atividade biológica de extratos acetato de etila, etanólico e aquoso de timbó (Lonchocarpus floribundus) sobre carrapato bovino

Os extratos acetato de etila, etanólico e aquoso de raízes de Lonchocarpus floribundus foram utilizados, a fim de avaliar a atividade biológica sobre carrapato bovino. Carrapatos adultos foram coletados em bovinos infestados artificialmente, separados em grupos de dez indivíduos, pesados e imersos, separadamente, nos extratos de raízes de L. Floribundus, nas concentrações de 5, 25, 50, 75 e 100 mg mL-1. Para a avaliação em larvas, foram utilizados indivíduos de 14 a 21 dias, os quais foram imersos nos extratos nas concentrações de 1, 5, 10, 15 e 20 mg mL-1. Após o tratamento, cada grupo foi colocado em placa de Petri e incubado a 27 ± 1 ºC e umidade relativa de 80 ± 5%. Os extratos avaliados não foram eficazes para induzir, acima de 50%, a mortalidade de fêmeas ingurgitadas. Os extratos acetato de etila e etanólico induziram 100% de mortalidade de larvas. Entretanto, quanto aos valores de concentração letal mediana (CL50), o extrato etanólico (CL50 = 2,1 mg mL-1) foi mais tóxico que o extrato acetato de etila (CL50 = 4,1 mg mL-1). O extrato etanólico estimou concentração inibitória mediana (CI50) de 3,0 mg mL-1 e foi mais tóxico que os demais extratos quanto a este parâmetro de avaliação. Entre os três extratos avaliados, os extratos acetato de etila e etanólico apresentaram os melhores resultados quanto ao controle de reprodução de R. (B.) microplus, atingindo 100% na concentração de 5 mg mL-1. Os extratos de raízes de L. Floribundus apresentaram atividade biológica sobre carrapato bovino

Estudo comparativo de cinco isolados de baculovirus em Diatraea saccharalis

Orientador : Octavio Henrique de Oliveira PavanTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Com base nos resultados obtidos no presente trabalho, conc1uiu-se que: a)Apesar da diferença de origem quanto ao hospedeiro, o VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP, VPNTnF11 e o VGDs, mostraram comportamento biológico muito semelhante em larvas de D. saccharalis. b)Os experimentos in vitro de estabilidade térmica do VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP, VPNTnF11 e VGDs, demonstraram que: os 5 baculovirus foram completamente inativados em temperaturas de 100ºC, 80ºC e 70ºC; em menos de cinco, dez e trinta minutos respectivamente. Os 5 virus foram capazes de resistir mantendo a infectividade por 2 horas a temperaturas de 60ºC, por 1 dia a 50QC e por até 5 dias a temperaturas de 40ºC. c)Os experimentos in vivo dos efeitos de diferentes temperaturas no desenvolvimento da infecção viral com o VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP e VPNTnF11 em larvas de D. saccharalis, revelaram que: Os 4 baculovirus se desenvolveram normalmente na faixa de temperatura de 17ºC a 39ºC em larvas de D. saccharalis.Para os 4 Virus de Poliedrose Nuclear, a temperatura de 39ºC foi onde ocorreu a menor produção viral.A temperatura ótima foi a ele 28ºC, onde ocorreu a maior produção viral em D. saccharalis, para os 4 virus testados.Com um aumento de 2ºC da temperatura ótima (30ºC), o VPNAgP, VPNAgF10,VPNTnP e o VPNTnF11 apresentaram uma redução na produção viral de 461%, 279%, 139% e 192%, respectivamente. Uma diminuição de 2ºC da temperatura ótima (26ºC), também causou uma redução na producão viral do VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP e o VPNTnF1,os quais respectivamente mostraram uma redução de 107%, 456%, 121% e 383%. d)A inoculação prévia dos 5 virus inativados, inibiu parcialmente o desenvolvimento da infecção dos mesmos quando inoculados 5 dias mais tarde em D. saccharalis. e)Na continuação da passagem seriada dos isolados selecionados, VPNAgF10 e VPNTnF11, constatou-se que: Tanto o VPNAg como o VPNTn foram capazes de infectar e multiplicar-se no hospedeiro alternativo, D. saccharalis. Após vinte passagens seriadas, o isolado F20 do VPNAg mostrou uma redução no valor de DL50 de 1500 vezes para D.saccharalis, quando comparado com o virus original obtido de larvas de A. gemmatalis.O isolado F11 de VPNTn, o qual mostrou uma redução no valor de DL50 de 800 vezes após 11 passagens seriadas em D. saccharalis, quando comparado com o virus original obtido de larvas de T. ni, não mais apresentou alteração a partir da 12º passagem seriada. Os poliedros ou cristais do VPNAg e do VPNTn não apresentaram qualquer modificação no decorrer das passagens seriadas, em D. saccharalis. A análise protéica dos isolados selecionados do VPNAg (F10 F15 e F20) não mostrou diferenças quando comparado com o virus original obtido de larvas de A. gemmatalis.O VPNAgP e os isolados VPNAgF10 VPNAgF15 e VPNAgF20 apresentaram 18 bandas polipeptídicas, cujos pesos moleculares variaram entre 15000 a 92000 daltons.O VPNTnP e o isolado selecionado VPNTnF20 não apresentaram diferenças quanto a seus polipeptídeos quando analisados em gel de SDS e poliacrilamida. O VPNTnP e o isolado selecionado VPNTnF20 exibiram 22 bandas polipeptídicas, cujos pesos moleculares variaram de 11000 a 135000 daltons. Tanto o VPNAg como o VPNTn e os seus isolados apresentaram o mesmo peso molecular de 28000 daltons para a poliedrina.A passagem seriada em um hospedeiro alternativo é um método eficiente para indução de alterações genéticas nos vírus de Poliedrose Nuclear (VPNs)Abstract: Based on the results obtained in the present work we were able to conclude: a)Despite the different original hosts and different strains the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV, TnNPVF11 and DsGV all exhibited the same general infection pattern in D. saccharalis, the sugarcane borer. b)The tests of thermal stability for these virus show that all five baculovirus were completely inactivated when exposed to temperatures of 100ºC, 80ºC and 70ºC in less than five, ten and thirty minutes respectively. All these virus stil1 retained infectivity for 2 hours when exposed to a temperature of 60ºC, for 24 hours at 50ºC and up to 5 days at 40ºC. c)The effect of temperature of the virus development in D. saccharalis was analysed for the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV and TnNPVF11 and showed that: All four virus were able to develop normally in temperatures ranging from 17ºC to 39ºC exhibiting development of polyhedra.The greatest reduction in the number of polyhedra produced was observed at 39ºC. The optimal temperature for polyhedral production was 28ºC for all virus.An increase in the optimal temperature of 2ºC (30ºC) caused a reduction on the viral production of 461, 279, 139 and 192% for the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV and TnNPVF11 respectively.The viral production at 2ºC below the optimal temperature (26ºC) also was drastically reduced; this reduction being respectively of 107, 456, 121 and 383% when compared to the production at 28ºC. d)A previous inoculation of the 5 heat-inactivated virus caused a partial inhibition of the infection when active virus was inoculated 5 days after the first treatment in D. saccharalis. e) The continuation of the serial passage on the AgNPVF10 and TnNPVF11 strains resulted in the following observations: No significant alterations were observed in the infection process and polyhedral formation of either virus.The F20 strain of AgNPV after 20 passages through D.saccharal showed a 1500 fold reduction in the LD50 value for the D. saccharalis larvae, when compared with the original inoculum obtained from Anticarsia gemmatalis larvae.The Fll strain of the TnNPV which showed a 800 fold reduction after 11 passages through D. saccharallis when compared to the original inoculum obtained from Trichoplusia ni showed no alteration on passages 12 through 20 in D. saccharalis.The protein analysis of the selected strains of AgNPV showed no differences when compared to the original inoculum obtained from A. gemmatalis.The SDS-PAGE pattern exhibited 18 polypeptide bands with the molecular weight ranging from 15 to 92 K daltons.The protein analysis comparing TnNPV and TnNPVF20 strain showed identical patterns.The SDS-PAGE pattern showed 22 popypeptide bands with the molecular weight ranging from 11 to 135 k daltons.The main protein component of the Nuclear Poolyhedrosis Virus, polyedrin showed for all the strain of both virus the same molecular weight of 28k daltons.The serial passage in an alternate-host has shown to be an efficient method for inducing directed genetic alterations in these NPVsDoutoradoGeneticaDoutor em Ciências Biológica

Seleção genetica e interação de baculovirus em Diatraea saccharalis (F,1794)

Orientador : Octavio Henrique de Oliveira PavanDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: Neste estudo verificaram-se os efeitos de passagens seriadas do Virus de poliedrose Nuclear de Anticarsia gemmalis (VPNAg) e do Vírus de poliedrose Nuclear de Trichoplusiani (VPNTn) sobre o hospedeiro alternativo, Diatraea saccharalis, uma das principais pragas da cana-de-açúcar em toda a América. Para cada um desses experimentos foram analisados individualmente mais de 5000 largatas de D. saccharalis. Pode-se observar através dos valores de DL50 que ocorreu um aumento substancial na virulência destes dois baculovírus após terem sido submetidos ao processo de passagem seriada nas brocas de cana. Na 1ª passagem seriada do VPNag o valor de DL50 foi de 7,87 X 105 cristais/largata enquanto que na 10ª passagem esse valor foi reduzido a 6,65 X 103 cristais/lagarta mostrando que o vírus após ter sido submetido a dez passagens seriadas tornou-se cerca de cem vezes mais virulento para es-ses insetos. O VPNTn apresentou na 1ª passagem seriada o valor de DL50 de 9,68 X 104 cristais/lagarta ao passo que na 11ª passagem seriada o valor de DL50 foi reduzido a 1,20 X 102 cristais/lagarta. Após onze passagens seriadas o VPNTn teve sua virulência aumentada em cerca de oitocentas vezes para as lagartas de D.saccharalis. Verificou-se que o isolado do VPNAg adaptado ao no-vo hospedeiro exibiu uma redução da virulência no hospedeiro original, Anticapvia gemmatalic.Os resultados do presente trabalho não representa-ram o limite das possibilidades de seleção desses vírus (VPNAg e VPNTn) mas demonstraram claramente seu potencial e a necessidade de continuação destes estudos visando uma melhor compreensão do problema. O VPNAg e o VPNTn melhoraram significativamente a sua eficiência através do método de passagem seriada que além de ser um método simples apresenta um baixo custo. Por outro lado, verificou-se ainda nesse trabalho o efeito da inoculação do Vírus de Granulose de Diatraea saccharalis (VGDs) associado aos dois VPN acima referidos. Foram utilizados três tipos de inóculos mistos: 1) VPNAg + VPNAg 2) VPNAg + VGDs e 3) VPNTn + VGDs nas lagartas de D. saccharalis Para esses experimentos foram usadas _ais de 3500 lagar-tas de D. saccharalis. Observou-se que apesar do VPNAg e do VPNTn isoladamente inoculados terem exibidos picos de mortalidade ao redor de 10 dias, o inoculo misto resultante da mistura desses dois vírus (VPNAg e VPNTn) mostrou uma nítida dispersão por volta de 10 a 50 dias. Os dois inóculos mistos resultantes da associação de um VPN e um VG (VPNAg + VGDs e VPNTn + VGDs) apresentaram um nítido pico de mortalidade ao redor de 10 dias e picos menores após 20 dias, com picos principais em torno de 30 e 40 dias. O primeiro pico pode ser relacionado ao efeito do VPNAg e do VPNTn e os picos de mortalidade após 20 dias ao efeito do VGDs. Pode-se observar que o inóculo de VGDs foi mais vi-rulento do que o inóculo de VPNTn que por sua vez foi mais virulento do que o in6culo de VPNAg para as lagartas de D. saccharalis e verificou-se que o mesmo quando em associação essa ordem de patogenicidade foi mantida. Os resultados desse estudo demonstraram de modo quantitativo que ocorreu o fenômeno de interferência ou anta-gonismo nos três tipos de inóculos mistos, visto que, nas várias doses utilizadas, a resposta de mortalidade resultante dos inóculos mistos não foi maior do que essa produzida pela ação de um só vírus nas lagartas de D. saccharalis dos mostram que o VPNAg, VPNTn e o VGDs não podem ser consor-ciados em um mesmo inóculo misto para fins práticos. De modo geral observamos, que os Baculovírus aqui analisados podem ser manipulados geneticamente e que ao serem associados há uma interferência recíproca como se estivessem competindo por mesmos tecidos e recursos no inseto. Essa interferência indicaria uma homologia de sistemas que se manifesta com vírus diferentes e procedentes de famílias diferentes. Podemos concluir que nossos dados sugerem haver uma homologia muito grande nesse grupo de vírus de inseto e que através de métodos relativamente simples tais como de passagem seriada podemos manipular geneticamente estes importantes patógenosAbstract: The effects of serial passages of the Nuclear Polyhedrosys Virus of Anticarsia gemmalis (AgNPV) and the Nuclear Polyhedrosys Virus of Trichoplusia ni (VPNTn) through the alternate host, Diatraea saccharalis one of the main pests of sugar cane throughout America, was studied. For each of these experiments more than 5000 larvae of D. saccharalis were individually analysed. It was noted through the reduction of DL50 values that a substantial increase in the virulence of these two baculovírus occurred after being submitted to serial passages through the D. saccharalis. On the first serial passage of the AgNPV the DL50 value was 7,87 X 105) PIBS/larva whereas on the thent passage that value was reduced to 6,65 X 103 PIBs/larva showing that the virus became about one hundred times more virulent to these insects after being submitted times more virulent to these insects after being submitted to ten serial passages. The TnNPV presented in the first serial passage the DL50 value of 9,68 x 104 PIBs/larva whereas in the eleventh serial passages the TnNPV had its virulence increased about eight hundred times when comparted to the original isolate. It was noted that the isolate of the AgNPV adapted to the new host exhibited a reduction of its virulence to the original host, Anticarsia gemmatalis. The isolate of the TnNPV was not tested against its original host, Trichoplusia ni. The results of the present work do not represent the limit of possibilities of selection of these virus (AgNPV and TnNPV), in fact they gave clear evidence of their potential and of the necessity of continuation of these studies aiming a better comprehension of the subject. The AgNPV and the TnNPV had and an expressive improvement of its efficiency by the serial passage method, which represents a simple and low cost method. A study of the effect of the inoculation of the Granulosis Virus of Diatraea aacaharalin (DsGV) associated to both NPV above mentioned was also object of this work. Three types of mixed inocula were used: 1) AgNPV + TnNPV 2) AgNPV + DsGV and 3) TnNPV + DSGV on D. saccharalis larvae. For these experiments more than 3500 larvae of D. saccharalis were individually analysed. Its was observed that, when individually inoculated AgNPV and TnNPV exhibited peaks at around 10 days after ingestion. The inoculum resulting from association of these two viruses (AgNPV + TnNPV) showed a clear dispersion of these peaks from to 10 to 50 days after the inoculation. The two mixed inocula resulting from the association of one NPV and one GV (AgNPV + DsGV and TnNPV + DsGV) presented a clear mortality peak at around 10 days, and other peaks after 20 days with main peaks present at around 30 and 40 days after inoculation. The first mortality peak can be related to the effect of the AgNPV and TnNPV and the peaks after 20 days of inoculation to the effect of DsGV. It was observed that the DsGV is more virulent that TnNPV which, in turn, is more virulent to the larvae of D. saccharalis than the AgNPV; and it was verified that even when in association this pathogenicity order was maintained. The resu1ts of this study demonstrated in a quantitative manner that the interference or antagonism phenomenon occurred in the three types of mixed inocula. For the various combinations of virus and dosagens the resulting mortality response from the associated virus was not higher than that produced on the larvae of D. saccharalis from the action of a single virus. This demonstrates that for practical purposes the AnNPV, TnNPV and the DsGV should not be associated for this type of pest control. Our results showed that the baculovirus here analysed can be genetically manipulated and once associated they show a reciprocal interference as if they were competing for the same tissues and resources of the insect. This interference indicates a homology of systems manifesting in different viruses originated from hosts coming from different Families. In conclusion, our data sugest the existence of great homology in this insect virus group, and that probably due to this fact we can genetically manipulate these important pathogens through relatively simple methodsMestradoMestre em Biologi