The essential role of DICER in spermatogenesis and male fertility

Male reproductive health has declined in western countries during recent years. Male infertility is often caused by faults in spermatogenesis, leading to a decreased number of spermatozoa in the semen and/or problems in the sperm morphology and motility. That raises the necessity of understanding the basic molecular mechanisms of the testis function. Male germ cell differentiation is a complex, precisely organized process that produces mature spermatozoa from spermatogonial stem cells. All the steps during spermatogenesis are governed by strict regulation of gene expression. Small non-coding RNAs, such as microRNAs (miRNAs), are very important gene regulators that function post-transcriptionally to control the stability or translation of their target mRNAs. A crucial player in miRNA pathway is the endonuclease DICER that processes precursor molecules into mature small RNAs. This study demonstrated the importance of DICER in spermatogenesis and male fertility. By using a conditional knockout mouse model that lacks DICER specifically in post-natal male germ cells, we showed that the absence of functional DICER causes severe defects in male germ cell differentiation. Particularly, the post-meiotic haploid differentiation, including head shaping, chromatin condensation, polarity of developing germ cell, were found to be affected. Dicer1 KO males produced a greatly reduced number of spermatozoa that were all morphologically abnormal, and the males were completely infertile. More detailed analysis revealed that the problems in haploid differentiation were at least partially due to the defects in cell-cell junctions between spermatids and somatic Sertoli cells. Additionally, we characterized the expression of DICER during spermatogenesis, and showed that the DICER expression peaked in meiotic spermatocytes, where it is localized to germ cell-specific RNA granules, germ granules. This research provides novel, important information about the factors required for the maintenance of spermatogenesis, and helps us to understand those factors that are involved in male infertility.DICER-proteiinin rooli siittiön muodostuksessa ja miesten hedelmällisyydessä Miesten lisääntymisterveys on merkittävästi heikentynyt viime vuosien aikana. Miesten hedelmättömyys johtuu usein ongelmista siittiön muodostuksen aikana ja heikentyneestä siemennesteen laadusta. Tämä lisää tarvetta tarkalle kivesten toiminnan tuntemukselle. Spermatogeneesi on kivesten siementiehyissä tapahtuva erittäin monimutkainen tapahtumasarja, jossa sukusolulinjan kantasolusta erilaistuu hedelmöityskykyinen siittiö. Spermatogeneesin aikana geenien ilmentyminen on aktiivista ja vaatii tarkkaa geenien ilmenemisen säätelyä. Muiden RNA-säätelymekanismien ohella pienet RNA-molekyylit, kuten mikroRNA-molekyylit (miRNA) osallistuvat siittiönmuodostuksen aikana tapahtuvaan geenisäätelyyn. miRNA:t säätelevät geenin ilmentymistä sitoutumalla lähetti-RNA:ihin ja aiheuttamalla niiden hajotuksen. DICER-endonukleaasi, joka pilkkoo miRNA:iden esiasteista kypsiä lyhyitä miRNA:ita, on keskeinen entsyymi miRNA:iden prosessoinnissa. Tämä väitöskirjatyö selvittää DICER-proteiinin roolia spermatogeneesin säätelyssä. Työssä käytettiin hyväksi miesten sukusolu-spesifistä poistogeenistä hiirimallia, jossa Dicer1 -geeni on poistettu sukusolujen kehityksen varhaisessa vaiheessa heti syntymän jälkeen. Näytimme, että DICERin poistaminen aiheuttaa vakavia ongelmia sukusolujen erilaistumisessa, erityisesti meioosin jälkeisissä vaiheissa, kuten siittiön pään muodostumisessa, kromatiinin pakkautumisessa ja solun polarisoitumisessa. Dicer1-poistogeeniset urokset tuottivat vain pienen määrän morfologialtaan epänormaaleja siittiöitä ja urokset olivat täysin lisääntymiskyvyttömiä. Tarkempi analyysi osoitti, että virheet haploidien solujen erilaistumisessa ainakin osittain johtuivat viallisista liitoksista somaattisten Sertoli-solujen ja sukusolujen välillä. Lisäksi selvitimme yksityiskohtaisesti DICERin ilmentymistä ja lokalisaatiota erilaistuvissa sukusoluissa, ja näytimme, että DICERin määrä on suurimmillaan meioottisissa spermatosyyteissä, ja näissä soluissa DICER lokalisoituu sukusoluspesifisiin sytoplasmisiin RNA-rakenteisiin (sukusolurakkula). Tutkimuksen tulokset tarjoavat uutta, merkittävää tietoa niistä tekijöistä, jotka ovat tärkeitä onnistuneelle siittiön muodostumiselle sekä auttaa ymmärtämään miesten hedelmättömyyteen liittyviä tekijöitä.Siirretty Doriast

Australiaan kohdistuvan matkapaketin tuotteistaminen ja kohdetieto-oppaiden kehittäminen matkatoimisto Kaleva Travelille

Opinnäytetyön tarkoituksena oli tuotteistaa toimeksiantajallemme Matkatoimisto Kaleva Travelille uusi matkailutuote, kahden viikon mittainen Australian-matkapaketti, sekä laatia kohdetieto-oppaat matkailutuotteen kohdekaupunkeihin Sydneyhyn ja Melbourneen. Matkapaketin kohderyhmänä ovat 40–60-vuotiaat omatoimimatkailijat. Kaleva Travel järjestää jo entuudestaan matkoja Australiaan, mutta kahta kaupunkia yhdistävää Australian matkailupakettia ei kuitenkaan löydy toimeksiantajamme matkatarjonnasta. Tutkimusmetodina käytettiin havainnointia niin kohteissa, kohteiden ympäristössä kuin välimatkoillakin. Havainnoinnilla pyrittiin saamaan selville mahdollisimman paljon informaatiota kohteiden tarjonnasta. Matkapakettia sekä kohdetieto-oppaita kootessa käytettiin apuna myös runsaasti erilaisia esitteitä ja Internet-lähteitä havainnoinnin tueksi. Opinnäytetyön toiminnallisen osion eli kohdetieto-oppaiden sekä matkapaketin tueksi teoriaosuudessa käsiteltiin matkailutuotteen, palvelun ja majoituksen laadun sekä kuluttajakäyttäytymisen teoriaa. Opinnäytetyön tuloksena on kahden viikon mittainen matkapaketti Australiaan, Sydneyn ja Melbournen kohdetieto-oppaat sekä Australian yleinen kohdeopas. Matkailutuotteen ja kohdetieto-oppaiden lisäksi opinnäytetyöhön laadittiin kilpailijavertailu Kaleva Travelille.The topic of this thesis was productization of a new product for a Finnish travel agency Kaleva Travel. The new products were a packaged tour and guidebooks to Australia for the main destinations Sydney and Melbourne. Kaleva Travel already had trips to Australia, but they did not have a package tour to Australia in their selection. Kaleva Travel also needed new guidebooks for their customers. The main research method in the thesis was observation. Observation was used in the destinations, when collecting useful information for the package tour and guidebooks. The main issues to observe were accommodation, public transport and recreation. When collection useful information about the destinations, books, brochures and Internet were also used. In the theoretical part of the thesis consumer behaviour, productization and quality of service were discussed. The most important results were a package tour that includes hotel options, flights and proposal excursions and recreations in the destinations, and guidebooks. Guidebooks were designed for the main destinations of the package tour, Sydney and Melbourne, and one of the guidebooks shares general information about Australia for the travellers.Opinnäytetyön liitteet, eli kohdetieto-oppaat ja matkapaketti, eivät ole mukana verkkojulkaisussa

Serum biochemistry and hematology in blue fox (Vulpes lagopus)

201

Effect of carotenoid supplement on production performance in mink (Neovison vison)

201

Norjalaiset ostoksilla Inarin ja Utsjoen rajakaupoissa : ostosmatkailua vai arkirutiinien hoitoa?

Siirretty Doriast

IAS-standardien suhde muuhun lainsäädäntöön Suomessa

Siirretty Doriast

Analysis of Gq/G11 and G12/G13 mediated signalling in the endothelial functions

In this study, I analyzed the role of GPCR signalling pathways mediated by Gq/G11 and G12/G13 in the functions of the adult endothelium. To achieve endothelium specific deletion of G-alpha-q/11 and G-alpha-12/13, I crossed an inducible Tie2-Cre mouse line with mice carrying floxed alleles of the genes encoding G-alpha-q (Gnaq) and G-alpha-13 (Gna13) in G-alpha-11- or G-alpha-12-deficient backgrounds, respectively. After induction of Cre with tamoxifen, I observed endothelium specific recombination in various organs, excluding brain vessels and aorta. I confirmed the loss of G-alpha-q/11 and G-alpha-12/13 in pulmonary endothelial cells isolated from the respective mouse lines and was able to show that the phosphorylation of MLC in primary pulmonary endothelial cells depended on G-alpha-q/11, while G-alpha-12/13 pathway was less important. When stimulated with histamine or PAF, endothelial NO production was blocked in the absence of G-alpha-q/11. In vivo the lack of G-alpha-q/11 in endothelial cells led to reduced vascular permeability, which was consistent with in vitro MLC phosphorylation results. G-alpha-q/11 was necessary for normal hypotensive response to histamine stimulation, and for PAF-induced shock. Sensitized endothelial cell specific G-alpha-q/11 KO mice were resistant to development of anaphylactic shock when challenged with allergen. In addition, endothelial G-alpha-q/11 KO mice showed reduced leukocyte rolling in trauma induced acute inflammation. In conclusion, I was able to show that endothelial G-alpha-q/11 is a regulator of endothelial cell contraction and endothelial barrier function in response to various inflammatory mediators, and that it is critically involved in systemic anaphylactic reactions. These data suggest that Gq/G11-mediated signalling pathway in endothelial cells is a promising target to prevent or to treat anaphylactic shock

Strateginen toiminnan kehittäminen työpajoissa

Strategiatutkimuksessa on perinteisesti keskitytty ylimmän johdon suunnittelutyöhön, eikä muiden toimijoiden merkitystä sille ole juurikaan tutkittu. Tutkimuksellani pyrin vastaamaan tähän tarpeeseen tarkastelemalla, miten strategiatyötä tehdään yksikkötasolla toimijoiden osallistuessa työpajoihin strategisena käytänteenä. Tutkimukseni kohdistuu suomalaisessa vanhusten palvelutaloyksikössä toteutettuun toiminnan kehittämisprosessiin, joka koostui kolmesta työpajasta ja lopputapaamisesta. Tutkimustani ohjasi strategia käytäntönä -tutkimussuuntaus. Lähestymistapa nostaa tutkimuksen keskiöön käytännöt, käytännön toiminnan ja toimijat. Strategia rakentuu toimijoiden osallistuessa vuorovaikutteiseen yhteistoimintaan tietyissä rakenteissa ja konteksteissa. Laadullisilla tutkimusmenetelmillä toteutetun tutkimukseni pääaineisto muodostuu työpajojen videokuvasta. Tätä tukevana lisäaineistona käytän työpajatyöskentelyjen ja lopputapaamisen muistioita. Tutkimusaineistoni tuotin ja analysoin havainnoimalla työpajatyöskentelyä videomateriaalin avulla sekä seuraamalla työpajatoimintaa käytännössä. Keskeisimpänä tutkimukseni tuloksena on strategisesta toiminnan kehittämisprosessista luotu kuvaus. Tämän lisäksi esitän vuorovaikutteista toimintaa tukevina tekijöinä prosessin suunnittelun ja toteutustavan merkityksen, ulkopuolisten asiantuntijoiden käyttämisen sekä yhdessä tekemisen ja konkreettiset päätökset. Tulkintani mukaan asiakkaat tuovat lisäarvoa peruspalvelua tuottavassa yksikössä toteutettuun strategiaprosessiin sillä, että he pystyvät tarkastelem