La vitrificación de ovocitos por método de mínimo volumen, método potencial para la criopreservación de la gameta femenina en bovinos

La producción de ganado vacuno es una de las explotaciones más importantes de nuestro país, siendo la de mayor relevancia en la producción pecuaria. Las biotecnologías asociadas a la reproducción permiten obtener mayores progresos genéticos y disminuir la incidencia de enfermedades de transmisión sexual, entre otras aplicaciones. La vitrificación es una biotecnología que permite la criopreservación de ovocitos y embriones. Consiste en el enfriamiento ultra rápido utilizando soluciones con alta concentración de sustancias crioprotectoras que evita la formación de cristales de hielo. Sin embargo, estas altas concentraciones de crioprotectores producen daño celular principalmente por su toxicidad y su efecto osmótico. Esta biotecnología está siendo utilizada ampliamente con éxito para la criopreservación de ovocitos y embriones humanos en las clínicas de fertilidad, habiendo desplazado en la práctica al congelamiento lento. En el bovino todavía no es utilizada de forma rutinaria, a pesar de que se ha demostrado que mejora la sobrevida embrionaria luego de la criopreservación respecto al congelamiento lento tradicional.Fil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Morado, Sergio Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Gadze, Tomás. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Donato, Antonella María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentin

Modulation of glycolisis and the pentose phosphate pathway influences porcine oocyte in vitro maturation

Glycolytic and pentose phosphate pathway (PPP) activities were modulated in porcine cumulus-oocyte complexes (COCs) during in vitro maturation (IVM) by the addition of inhibitors or stimulators of key enzymes of the pathways to elucidate their relative participation in oocyte maturation. The activities of glycolysis and PPP were evaluated by lactate production per COC and by the brilliant cresyl blue test, respectively. Glucose uptake per COC and the oocyte maturation rate were also evaluated. Lactate production, glucose uptake and the percentage of oocytes reaching metaphase II decreased in a dose-dependent manner in the presence of the pharmacological (NaF) or the physiological (ATP) inhibitors of glycolysis (p < 0.05). The addition of the physiological stimulator of glycolysis (AMP) caused no effect on lactate production, glucose uptake or the meiotic maturation rate. The pharmacological (6-AN) and the physiological (NADPH) inhibitors of PPP induced a dose-dependent decrease in the percentage of oocytes with high PPP activity and in the nuclear maturation rate (p < 0.05). The physiological stimulator of PPP (NADP) caused no effect on the percentage of oocytes with high PPP activity. The glycolytic and PPP activities of porcine COCs and maturational competence of oocytes seem to be closely related events. This study shows for the first time the regulatory effect of ATP and NADPH as physiological inhibitors of glycolysis and PPP in porcine COCs, respectively. Besides, these pathways seem to reach their maximum activities in porcine COCs during IVM because no further increases were achieved by the presence of AMP or NADP.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Ferretti, E. L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Pentose phosphate pathway activity: effect on in vitro maturation and oxidative status of bovine oocytes

Abstract. The relationship between pentose phosphate pathway (PPP) activity in cumulus-oocyte complexes (COCs) and oxidative and mitochondrial activity in bovine oocytes was evaluated with the aim of analysing the impact of two inhibitors (NADPH and 6-aminonicotinamide (6-AN)) and a stimulator (NADP) of the key enzymes of the PPP on the maturation rate, oxidative and mitochondrial activity and the mitochondrial distribution in oocytes. The proportion of COCs with measurable PPP activity (assessed using brilliant cresyl blue staining), glucose uptake, lactate production and meiotic maturation rate diminished when 6-AN (0.1, 1, 5 and 10 mM for 22 h) was added to the maturation medium (P , 0.05). The addition of NADPH did not modify glucose uptake or lactate production, but reduced PPP activity in COCs and meiotic maturation rates (P , 0.05). The presence of NADP (0.0125, 0.125, 1.25 and 12.5 mM for 22 h of culture) in the maturation medium had no effect on PPP activity in COCs, glucose uptake, lactate production and meiotic maturation rate. However, in the absence of gonadotropin supplementation, NADP stimulated both glucose uptake and lactate production at 12.5 mM (the highest concentration tested; P , 0.05). NADP did not modify cleavage rate, but decreased blastocyst production (P , 0.05). During IVM, oocyte oxidative and mitochondrial activity was observed to increase at 15 and 22 h maturation, which was also related to progressive mitochondrial migration. Inhibiting the PPP with 6-AN or NADPH led to reduced oxidative and mitochondrial activity compared with the respective control groups and inhibition of mitochondrial migration (P , 0.05). Stimulation of the PPP with NADP increased oxidative and mitochondrial activity at 9 h maturation (P , 0.05) and delayed mitochondrial migration. The present study shows the significance of altering PPP activity during bovine oocyte IVM, revealing that there is a link between the activity of the PPP and the oxidative status of the oocyte

Pentose phosphate pathway activity: effect on in vitro maturation and oxidative status of bovine oocytes

Published online: 17 July 2013The relationship between pentose phosphate pathway (PPP) activity in cumulus–oocyte complexes (COCs) and oxidative and mitochondrial activity in bovine oocytes was evaluated with the aim of analysing the impact of two inhibitors (NADPH and 6-aminonicotinamide (6-AN)) and a stimulator (NADP) of the key enzymes of the PPP on the maturation rate, oxidative and mitochondrial activity and the mitochondrial distribution in oocytes. The proportion of COCs with measurable PPP activity (assessed using brilliant cresyl blue staining), glucose uptake, lactate production and meiotic maturation rate diminished when 6-AN (0.1, 1, 5 and 10 mM for 22 h) was added to the maturation medium (P < 0.05). The addition of NADPH did not modify glucose uptake or lactate production, but reduced PPP activity in COCs and meiotic maturation rates (P < 0.05). The presence of NADP (0.0125, 0.125, 1.25 and 12.5 mM for 22 h of culture) in the maturation medium had no effect on PPP activity in COCs, glucose uptake, lactate production and meiotic maturation rate. However, in the absence of gonadotropin supplementation, NADP stimulated both glucose uptake and lactate production at 12.5 mM (the highest concentration tested; P < 0.05). NADP did not modify cleavage rate, but decreased blastocyst production (P < 0.05). During IVM, oocyte oxidative and mitochondrial activity was observed to increase at 15 and 22 h maturation, which was also related to progressive mitochondrial migration. Inhibiting the PPP with 6-AN or NADPH led to reduced oxidative and mitochondrial activity compared with the respective control groups and inhibition of mitochondrial migration (P < 0.05). Stimulation of the PPP with NADP increased oxidative and mitochondrial activity at 9 h maturation (P < 0.05) and delayed mitochondrial migration. The present study shows the significance of altering PPP activity during bovine oocyte IVM, revealing that there is a link between the activity of the PPP and the oxidative status of the oocyte.Cynthia Gutnisky, Gabriel C. Dalvit, Jeremy G. Thompson and Pablo D. Cetic

Regulation of key enzymes of glucose metabolism in bovine COCs

The aim of this work was to study the regulation of PFK 1 and G6PDH, two key enzymes involved in glucose metabolism in cumulus oocyte-complexes (COCs), and its relationship with the oocyte maturation process. It was observed that the activity of PFK 1 in the presence of ATP was inhibited whereas the addition of AMP increased the activity (P < 0.05). To verify the effect of the physiological modulators on the COC glycolytic pathway, the lactate production during IVM and the maturation rate were evaluated. In accordance with the enzymatic activity, the glycolytic activity evaluated by lactate production and the maturation rate diminished (P < 0.05) with the addition of ATP. While the AMP had a dose response effect on the lactate production, the maturation rate remained unaltered. It was observed that NADPH inhibited the activity of the G6PDH and the addition of NADP increased the activity of the enzyme (P < 0.05). To verify the effect of the physiological modulators on the COC pentose phosphate pathway (PPP), the proportion of colourless oocytes evaluated by brilliant cresyl blue (BCB) and the maturation rate were carried out. In presence of NADPH an inhibition (P < 0.05) on PPP and maturation rate was observed. On the other hand, NADP had no effect on PPP activity and maturation rate. The present study shows that the regulation of key enzymes of glucose metabolism in bovine COCs are regulated mainly by the energetic charge and the redox status. We also reported a tight relation between the activity of the PFK 1 and G6PDH enzymes, glycolytic and PPP activities and the oocyte maturation process.Fil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Breininger, Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Relationship between porcine cumulus-oocyte complex energy charge and glycolysis during in vitro maturation

The aim of the present work was to evaluate the relationship between COC energy and glycolysis in the porcine species. COCs were individually matured in IVM media supplemented with Gonadotropins, Gonadotropins + 0,1 mM ATP and Gonadotropins + 1 mM ATP and without supplementation (control) to modulate glycolytic activity. Glucose uptake and lactate production per COC were enhanced by the presence of FSH and LH in maturation medium, even in the presence of 0.1 mM ATP. However, 1 mM ATP was effective to inhibit gonadotropin stimulation on glucose consumption, lactate production and nuclear maturation (p < 0.05). Endogenous ATP concentration was similar in immature COCs and those matured in absence of FSH + LH. However, endogenous ATP concentration, increased after 48 h of culture in the presence of gonadotropins (p < 0.05). According to these results, we determined if glycolytic activity is inhibited by a rise in the COC energy charge. Glucose uptake and lactate production increased from 24 to 48 h of culture (p < 0.05), but no difference in these parameters were observed between 48 and 72 h of in vitro culture. This study confirmed the stimulation of glycolysis by gonadotropins in porcine COCs, and the inhibition of this pathway by the addition of exogenous ATP. We demonstrated the relationship between the gonadotropic stimulation of glycolytic activity and the increase in ATP content in porcine COC during IVM. However, the endogenous ATP content reached in the matured COC seems to not decrease glycolytic activity in the COC.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; ArgentinaFil: Paz, Matías. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentin

Phosphofructokinase and Malate Dehydrogenase Participate in the In Vitro Maturation of Porcine Oocytes

Oocyte maturation depends on the metabolic activity of cumulus-oocyte complex (COC) that performs nutritive and regulatory functions during this process. In this work, the enzymes [phosphofructokinase (PFK) and malate dehydrogenase (MDH)] were tested to elucidate the metabolic profile of porcine COCs during the in vitro maturation (IVM). Enzymatic activity was expressed in U/COC and U/mg protein (specific activity) as mean SEM. In vitro maturation was performed with 2-oxoglutarate (5, 10 and 20 mM) or hydroxymalonate (30, 60 and 100 mM) inhibitors of PFK and MDH, respectively. The PFK and MDH activities (U) remained constant during maturation. For PFK, the U were (2.48 0.23) 10 5 and (2.54 0.32) 10 5, and for MDH, the U were (4.72 0.42) 10 5 and (4.38 0.25) 10 5 for immature and in vitro matured COCs, respectively. The specific activities were significantly lower after IVM, for PFK (4.29 0.48) 10 3 and (0.94 0.12) 10 3, and for MDH (9.08 0.93) 10 3 and (1.89 0.10) 10 3 for immature and in vitro matured COCs, respectively. In vitro maturation percentages and enzymatic activity diminished with 20 mM 2-oxoglutarate or 60 mM hydroxymalonate (p < 0.05). Viability was not affected by any concentration of the inhibitors evaluated. The U remained unchanged during IVM; however, the increase in the total protein content per COC provoked a decrease in the specific activity of both enzymes. Phosphofructokinase and MDH necessary for oocyte IVM would be already present in the immature oocyte. The presence of inhibitors of these enzymes impairs the meiotic maturation. Therefore, the participation of these enzymes in the energy metabolism of the porcine oocyte during IVM is confirmed in this study.Fil: Cetica, Pablo Daniel. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Produccion Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Alvarez, Gabriel Martin. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Vecchi Galenda, Bruno. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Breininger, Elizabeth. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Produccion Animal; Argentin

Morphological, biochemical and functional studies to evaluate bovine oocyte vitrification

The aim of the present study was to evaluate the effect of vitrification on morphological, biochemical and functional parameters of matured bovine oocytes at different recovery times. To this end, matured bovine oocytes were vitrified using the Cryotech® kit (a minimum-volume system) and then incubated in maturation medium for different post-warming durations (0 h, 3 h or 21 h). Morphology, viability and biochemical parameters were assessed at each time point mentioned above and the recovery of the metaphase plate was analyzed at 2 h, 3 h and 4 h post-warming. The vitrification-warming process did not affect the viability or morphology of oocytes at any time point. However, the recovery of the metaphase plate occurred mostly between 3 and 4 h rather than at 2 h after warming (P < 0.05). Both control and vitrified-warmed oocytes showed changes in cytosolic oxidative activity, quantification of active mitochondria, reactive oxygen species (ROS) levels and redox status at the different time points studied (P < 0.05). However, differences between control and vitrified-warmed oocytes were found only in the quantification of active mitochondria and ROS production (P < 0.05). Finally, in vitro fertilization and embryo culture were carried out as functional studies to establish whether vitrification-warming affected oocyte competence, and a significant decrease was found both in the cleavage rate and embryo development (P < 0.05). We concluded that major improvements in oocyte vitrification, at list with Cryotech® kit, are still needed to avoid variations in oocyte metabolism which could contribute to the reduction in the developmental competence of bovine oocytes.Fil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Morado, Sergio Adrián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gadze, T.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Donato, A.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Alvarez, Gabriel Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Dalvit, G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Implications of glycolytic and pentose phosphate pathways on the oxidative status and active mitochondria of the porcine oocyte during IVM

Glycolysis and the pentose phosphate pathway (PPP) were modulated in porcine cumulus-oocyte complexes during IVM by the addition of inhibitors and stimulators of key enzymes of the pathways to analyze their influence on the oxidative status, active mitochondria, and maturation of the oocyte. The influence of pharmacologic and physiological inhibitors of glycolysis (Sodium fluoride and ATP) and PPP (6-Aminonicotinamide and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate) was validated by assessing glucose and lactate turnover and brilliant cresyl blue staining in oocytes. Inhibitors of glycolysis and PPP activity significantly perturbed nuclear maturation, oxidative metabolism (Redox Sensor Red CC-1), and active mitochondria (Mitotracker Green FM) within oocytes (P < 0.05). In comparison, physiological stimulators of glycolysis (adenosine monophosphate) and PPP (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate) did not affect any of evaluated parameter. In the absence of modulators, fluctuations in the oocyte oxidative activity and active mitochondria were observed during porcine IVM. The inhibition of glycolysis and PPP modified the pattern of oxidation and mitochondrial fluctuation, resulting in impaired meiotic progression. We demonstrated the relationship between carbohydrate metabolism in COC and oocyte redox status necessary for porcine oocyte IVM.Fil: Alvarez, Gabriel Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Casiró, Sebastián. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Dalvit, Gabriel Carlos. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Sutton McDowall, Melanie L.. University of Adelaide; AustraliaFil: Thompson, Jeremy G.. University of Adelaide; AustraliaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Aggregation of Leopardus geoffroyi hybrid embryos with domestic cat tetraploid blastomeres

Heterospecific embryo transfer of an endangered species has been carried out using recipients from related domestic females. Aggregation of an embryo from an endangered species with a tetraploid embryo from the species to be transferred could improve the development of pregnancy to term. The main objective of the present study was to analyze embryo aggregation in domestic cat model using hybrid embryos. For this purpose, we compared in vitro development of synchronic (Sync) or asynchronic (Async) and asynchronic with a tetraploid (Async4n) aggregation of domestic cat IVF embryos. Furthermore, aggregated blastocyst quality was analyzed by evaluation of the total cell number, cell allocation by mitotrackers staining of embryonic cells, expression of Oct4, Nanog, Sox2, Cdx2 genes, number of OCT4+ nuclei, and presence of DNA fragmentation. Additionally, the developmental rates of Async4n aggregation of domestic cat with Leopardus geoffroyi hybrid (hLg) embryos were evaluated. Async aggregation increased blastocyst cell number and the number of OCT4+ nuclei as compared to non-aggregated diploid (2n) and tetraploid (4n) embryos. Moreover, blastocysts produced by Async4n aggregation showed reduced rates of fragmented DNA. No differences were found in the expression of the pluripotent genes, with exception of the Cdx2 expression, which was higher in 4n and aggregated embryos as compared to the control group. Interestingly, hybrids embryos derived by Async4n aggregation with domestic cat embryos had similar rates of blastocysts development as the control. Altogether, the findings support the use of two-cell-fused embryos to generate tetraploid blastomeres and demonstrate that Async4n aggregation generates good quality embryos.Fil: Duque Rodriguez, Matteo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Animal; ArgentinaFil: Gambini, Andres. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Animal; ArgentinaFil: Ratner, Laura Daniela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Sestelo, Adrian J.. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Secretaría de Ambiente. Ecoparque Interactivo; ArgentinaFil: Briski, Olinda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Gutnisky, Cynthia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Rulli, Susana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; ArgentinaFil: Martin Fernández, Rafael. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; ArgentinaFil: Cetica, Pablo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Salamone, Daniel Felipe. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Unidad Ejecutora de Investigaciones en Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Departamento de Producción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Agronomía. Pabellón de Zootecnica. Laboratorio de Biotecnología Animal; Argentin