Perkinsus beihaiensis infecting the oyster Crassostrea rhizophorae under cultivation and in natural stock in Camamu Bay, Bahia, Brazil

Foi investigada a infecção de Perkinsus beihaiensis (Perkinsozoa) na ostra Crassostrea rhizophorae em um sistema de cultivo do tipo espinhel e em um estoque natural de ostras no manguezal adjacente ambos localizados no estado da Bahia, Nordeste do Brasil. As colheitas foram realizadas em outubro e novembro de 2012 e em janeiro de 2013. As ostras (n = 300) foram medidas, examinadas macroscopicamente quanto a sinais da infecção e submetidas às técnicas laboratoriais: histologia, ensaio em meio de cultivo de tioglicolato de Ray (RFTM), reação em cadeia da polimerase (PCR) e sequenciamento, que confirmou a identificação do patógeno. As análises histológicas e o RFTM mostraram, respectivamente, prevalência média de 93,3% e de 69%. A infecção foi geralmente leve ou muito leve. Não houve diferença significativa (p > 0,05) entre os ambientes em termos de prevalência ou severidade da infecção. Este é o primeiro registro de P. beihaiensis no estado da Bahia e o segundo em ostras do Brasil e América do Sul.This study investigated the infection of Perkinsus beihaiensis (Perkinsozoa) in the oyster Crassostrea rhizophorae, both from a long-line cultivation system and from a nearby intertidal zone of mangrove, both in the state of Bahia, northeastern Brazil. The collections were performed in October and November 2012, and in January 2013. The oysters (n = 300) were measured, examined macroscopically for signs of infection and then submitted to the following laboratory techniques: histology, Ray's fluid thioglycollate medium assay (RFTM), polymerase chain reaction (PCR) and sequencing, which confirmed the identification of the pathogen. Histological and RFTM analyses showed, respectively, a mean prevalence of 93.3% and of 69%. The infection was usually mild or very mild. There was no significant difference (p > 0.05) between the environments in terms of infection prevalence or severity. This is the first record of P. beihaiensis in the state of Bahia and the second in oysters from Brazil and South America

Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) em Mytella guyanensis (Lamarck, 1819) (Bivalvia: Mytilidae) da Região Estuarina do Rio Cachoeira, Ilhéus, Bahia, Brasil

Exemplares do molusco Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) da região estuarina do Rio Cachoeira (Ilhéus, Bahia) foram investigados quanto à freqüência de ocorrência e sítios de infecção por protozoários do gênero Nematopsis Schneider, 1892 (Apicomplexa: Eugregarinida: Porosporidae), no período entre agosto de 2005 e julho de 2006. Em 480 animais analisados, medindo entre 34,5 e 74,9 mm de altura (Média: 55,4 mm; DP ± 6,7), 387 apresentaram em seus tecidos o parasito e nestes, os locais com maior freqüência de ocorrência do Nematopsis foram as brânquias (298 animais) e o manto (248). O parasito foi também observado na glândula digestiva e na musculatura. Alguns indivíduos gravemente infectados apresentaram modificações na conformação das brânquias e do manto.Individuals of the clam Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) from the estuarine region of the Cachoeira river (Ilhéus, Bahia) have been analyzed to detect the frequency of occurrence and infected sites by protozoans of the genus Nematopsis Schneider, 1892 (Apicomplexa: Eugregarinida: Porosporidae), in the period between August 2005 and May 2006. A total of 480 individuals were analyzed, measuring between 34.5 and 74.9 mm of height (Average: 55.4 mm; DP ± 6.7). Nematopsis were found in 387 of them, occurring more frequently within the gills (298 animals) and the mantle (248). The parasite was also observed in the digestive gland and the musculature. Some severely infected individuals presented modifications in the conformation of the gills and the mantle

Micronutrientes metálicos nos moluscos bivalves Crassostrea rhizophorae e Mytella guyanensis

Micronutrients, micro or oligo elements, include vitamins and some metals, being that a significant portion of the world population is nutritionally deficient in these elements. This study evaluated the levels of metallic micronutrients in Crassostrea rhizophorae (oyster) and Mytella guyanensis (mangrove mussel) collected in southern Bahia, Brazil, in a stretch of 280 km long. The metal contents (Cu, Fe, Mn and Zn) of the edible part of the species were evaluated with inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP OES). Mean concentrations in mg kg-1 found for C. rhizophorae and M. guyanensis, respectively, were: Cu (2.09 ± 0.90 and 2.31 ± 0.63); Fe (32.03 ± 4.18 and 213.36 ± 51.67); Mn (1.75 ± 0.44 and 13.61 ± 2.83) and Zn (129.54 ± 25.88 and 12.13 ± 1.13). Both bivalves were relevant in the concentration of micronutrients investigated, with emphasis on the high values of Zn in C. rhizophorae and Fe in M. guyanensis.Os micronutrientes, micro ou oligoelementos, incluem vitaminas e alguns metais, sendo que uma parcela significativa da população mundial apresenta deficiência nutricional desses elementos. Este estudo avaliou os teores de micronutrientes metálicos em Crassostrea rhizophorae (ostra) e Mytella guyanensis (sururu) coletados no sul da Bahia, Brasil, num trecho de 280 km de extensão. Os teores dos metais (Cu, Fe, Mn e Zn) da parte edível das espécies foram avaliados em espectrometria de emissão óptica de plasma indutivamente acoplado (ICP OES). As concentrações médias encontradas para C. rhizophorae e M. guyanensis, respectivamente, foram: Cu (2,09 ± 0,90 e 2,31 ± 0,63); Fe (32,03 ± 4,18 e 213,36 ± 51,67); Mn (1,75 ± 0,44 e 13,61 ± 2,83) e Zn (129,54 ± 25,88 e 12,13 ± 1,13), em mg kg-1. Ambos os bivalves foram relevantes na concentração dos micronutrientes investigados, com destaque para os valores elevados de Zn em C. rhizophorae e de Fe em M. guyanensis. Palavras-chave: Cobre, elementos essenciais, ferro, manganês, zinco

Detection of Perkinsus marinus in the oyster Crassostrea rhizophorae in southern Bahia by proteomic analysis

Este estudo relata a presença do patógeno Perkinsus marinus, de notificação obrigatória à Organização Internacional de Epizootias (OIE) na ostra Crassostrea rhizophorae no sul da Bahia, via análise proteômica. Foram analisadas as ostras Crassostrea brasiliana de um cultivo em espinhel e C. rhizophorae de um manguezal adjacente, na localidade de Porto do Campo, Baía de Camamu, Bahia. As coletas (n = 100) foram efetuadas em outubro de 2012. Em laboratório, as ostras foram medidas e abertas para a retirada da carne, que foi macerada em gelo seco. Para a extração das proteínas, foi adotada a adaptação de um protocolo utilizado para mexilhões, após o que foi realizada a separação na primeira dimensão, por focalização isoelétrica (IEF). Os peptídeos foram transferidos para um Espectrômetro de Massas. Os espectros obtidos foram analisados no software ProteinLynx Global Server 4.2 e também pela ferramenta MASCOT (Matrix Science) e comparados com os bancos de dados do SWISSPROT e do NCBI, respectivamente. A identificação foi evidenciada por meio da beta-tubulina, homologia Perkinsus marinus ATCC 50983 e código da proteína no banco de dados NCBI = gi|294889481. Este é o primeiro registro de P. marinus na Bahia e o quarto no Brasil.This study reports the presence of the pathogen Perkinsus marinus, notifiable to the World Organization for Animal Health (Office International des Èpizooties = OIE) in the oyster Crassostrea rhizophorae in southern Bahia via proteomic analysis. We analyzed Crassostrea brasiliana from a long-line cultivation system and C. rhizophorae from an adjacent mangrove in Porto do Campo, Camamu Bay, Bahia, Brazil. The collections (n = 100) were performed in October 2012. In the laboratory, the oysters were measured and opened to remove the meat, which was steeped in dry ice. For extraction of proteins, adaptation of a protocol used for mussels was used, after which separation in the first dimension was taken by isoelectric focusing (IEF). The peptides were transferred to a Mass Spectrometer. The obtained spectra were analyzed with the ProteinLynx Global Server 4.2 software tool and also by MASCOT (Matrix Science) and compared to the databases of the SWISSPROT and NCBI, respectively. The identification was evidenced by beta-tubulin, Perkinsus marinus ATCC 50983 and protein homology code in the database NCBI = gi | 294889481. This is the first record of P. marinus in Bahia and the fourth in Brazil.

Parasitism by Nematopsis sp. (Apicomplexa: Eugregarinida) in Mytella guyanensis at the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil

Several studies show the presence of protozoa of the genus Nematopsis Schneider, 1892, in many species of bivalves. The pathogenicity of this Apicomplexa is still much debated, which is possibly related to the parasitism degree and host habitat. In this context, this study investigated parasitism by Nematopsis sp. in Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) in a mangrove of the Marine Extractive Reserve Baía do Iguape, Bahia, Brazil. The collections were made monthly, from March 2014 to March 2015, consisting of 30 adults with shell height above 40 mm per month, totaling 360 specimens. The specimens were measured, weighed, opened, and macroscopically examined for identifying parasites and/or signs of morphological changes. After that, they were fixed in Davidson’s solution and processed according to classical histological techniques, with inclusion in paraffin, obtaining 5 μm-thick sections by microtomy, and stained by Harris’ Hematoxylin and Eosin (HE). The water temperature ranged from 25.5 to 33.6 ºC and the salinity from 21.1 to 34.3 Practical Salinity Units (PSU). The specimens measured between 41.1 and 68.6 mm and had an average weight of 7.24 g. Macroscopically, there was no presence of the parasite or any morphological changes related its presence. The frequency percentage of Nematopsis sp. was 99.45%. The mantle was the organ with the highest frequency of infection (46.26%), followed by the gonads (18.36%). Among the analyzed organs, all presented the parasite and, in a few severely infected cases, microscopical changes were observed in the mantle conformation. The infection intensity for most of the sessions analyzed was 1 to 3 oocysts/phagocyte; however, in one of the sessions, 9 oocysts/phagocytes were recorded. The parasite had a negative correlation with salinity. The high frequency of Nematopsis sp. should be considered for the sustainability of natural stocks, especially if such parasitism occurs simultaneously with other pathogens and stressful environmental conditions.Diversos estudos evidenciam a presença de protozoários do gênero Nematopsis Schneider, 1892 em várias espécies de bivalves. A patogenicidade desse apicomplexo ainda é bastante debatida, a qual possivelmente relaciona-se ao grau de parasitismo e habitat do hospedeiro. Nesse contexto, este estudo investigou o parasitismo por Nematopsis sp. em Mytella guyanensis (Bivalvia: Mytilidae) em um manguezal da Reserva Extrativista Marinha Baía do Iguape, Bahia, Brasil. As coletas foram efetuadas mensalmente, de março de 2014 a março de 2015, constando 30 adultos com altura da concha acima de 40 mm, totalizando 360 espécimens. Os espécimens foram medidos, pesados, abertos e examinados macroscopicamente para a identificação de parasitos e/ou sinais de alterações morfológicas, em seguida fixados em solução de Davidson e processados segundo técnica histológica clássica, com inclusão em parafina, obtenção de cortes de 5 μm de espessura por microtomia e coloração por hematoxilina de Harris e Eosina (HE). A temperatura da água variou de 25,5 a 33,6 ºC e a salinidade de 21,1 a 34,3 Unidades Práticas de Salinidade (UPS). Os espécimens mediram entre 41,1 e 68,6 mm e tiveram um peso médio de 7,24 g. Macroscopicamente, não se observou presença do parasito ou qualquer alteração morfológica relacionada à presença do mesmo. A frequência percentual de Nematopsis sp. foi de 99,45%. O manto foi o órgão de maior frequência de infecção(46,26%), seguido das gônadas (18,36%). Entre os órgãos analisados, todos apresentaram o parasito, sendo que, para poucos casos severamente infectados, observaram-se microscopicamente modificações na conformação do manto. A intensidade de infecção para a maioria das sessões analisadas foi de 1 a 3 oocistos/fagócitos, contudo em uma das sessões foram registrados 9 oocistos/fagócitos. O parasito apresentou correlação negativa com a salinidade. A elevada frequência do Nematopsis sp. deve ser levada em consideração para a sustentabilidade dos estoques naturais, principalmente se tal parasitismo ocorrer simultaneamente a outros patógenos e condições ambientais estressantes

Prospecção de moluscos bivalves no estudo da poluição dos rios Cachoeira e Santana em Ilhéus, Bahia, Brasil

Um levantamento sobre o nível de poluição dos Rios Cachoeira e Santana (Ilhéus, Bahia, Brasil) foi realizado durante um trimestre, por meio da avaliação da qualidade microbiológica da água e de frutos do mar (Crassostrea rhizophorae - ostra-do-mangue e Tagelus plebeius - moapem) extraídos desses rios. Tradicionais indicadores de poluição como coliformes totais (Ct) e coliformes termotolerantes (CT), além de contagem padrão de microrganismos, com isolamento e identificação das enterobactérias, foram determinados nas amostras dos rios, os quais exibiram diferentes níveis de poluição fecal. Foram isolados 68 microrganismos, distribuídos em dez espécies, dentre elas, Salmonella typhi, Escherichia coli e Shigella sp., alertando para o risco do consumo in natura desses moluscos, mesmo quando em conformidade com a legislação estabelecida para CT. A prospecção de moluscos para o acompanhamento dos índices de poluição não se mostrou efetiva considerando a pesquisa de CT em ostras e moapens. Verificou-se também o maior grau de contaminação no Rio Cachoeira, o qual serve de base para distribuição de água na região e como fonte de subsistência, por meio da atividade extrativista, para a população ribeirinha.A survey about the pollution level of the Cachoeira and Santana Rivers (Ilheus, Bahia, Brazil) was performed for a quarter, through the assessment of the microbiological quality of water and seafood (Crassostrea rhizophorae - oyster and Tagelus plebeius - razor clam) extracted from these rivers. Traditional indicators of pollution such as total coliforms (Ct) and thermtolerant coliforms (CT), and total count of micro-organisms, with isolation and identification of Enterobacteriaceae were determined in rivers samples, which exhibited different levels of faecal pollution. An amount of 68 micro-organisms was isolated, distributed in ten species, among them, Salmonella typhi, Escherichia coli and Shigella sp., warning about the risk of consuming these shellfish in nature, even when there is accordance with the laws established for CT. The bivalve prospection to monitor pollution levels was not effective considering CT detection in oysters and moapens. There was also the highest contamination degree in the Cachoeira River, which is used for water distribution in the region and as livelihood source through extractive activities for the riverside population

Ciclo reproductivo del ostión de manglar Crassostrea rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) en la Bahía de Camamu, Bahia, Brasil

El ostión de manglar es un importante recurso pesquero que se distribuye por toda la costa brasileña y una de las especies nativas con mayor potencial para maricultura. Este estudio tuvo como objetivo conocer las características reproductivas del ostión de manglar Crassostrea rhizophorae en el estero del Río Maraú, Bahía de Camamu, Bahia, Brasil. Las muestras fueran recolectadas mensualmente, entre agosto de 2006 y septiembre de 2007, en dos sitios. Las metodologías utilizadas fueron el análisis histológico de las gónadas y el cálculo de rendimiento de carne. La temperatura del agua durante el período de estudio varió de 23.5°C a 30°C y la salinidad osciló entre 15 y 35ups. La altura de los ostiones examinados varió de 27 a 102mm (n=437). Hubo predominancia de hembras en las poblaciones de ambos sitios. Los análisis de estadios gonádicos demostraron que el proceso de reproducción de C. rhizophorae en el estero del Río Maraú es continuo durante el año, sin período de reposo sexual. El rendimiento de carne (R) fue de 8.0% a 17.7% (n=669). Los resultados de este estudio proveen informaciones para la captación de semilla e implantación de la ostricultura en la Bahía de Camamu.Reproductive cycle of the mangrove oyster Crassostrea rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) in Camamu Bay, Bahia, Brasil. The mangrove oyster Crassostrea rhizophorae is important fishery resource along the entire Brasilian coast with excellent potential for marine culture. The purpose of this paper was to examine the reproductive characteristics of the oyster of the Maraú river estuary in Camamu Bay, Bahia, Brasil. The samples were collected monthly, from September 2006 to August 2007, at two points (I and II) in Camamu Bay. At each site 20 oysters were collected for histological analysis, fixed in Davidson’s solution, embedded in paraffin, dehydrated in an ethanol series, sectioned (7μm thick) and stained with Harris hematoxylin and Eosin (HE). Additionally, 30 oysters were sampled, at each point, for a condition index analysis. The water temperature ranged from 23.5°C to 30°C and the salinity from 15 to 25 ups at Point I (Maraú) and from 25 to 35 at Point II (Tanque Island). The oyster’s height ranged from 30 to 92mm at Point I and from 27 to 102mm at Point II, with an average of 49.0mm±9.1 (n=230) and 49.9mm±9.9 (n=237), respectively. Among the sampled oysters at Point I, 59.1% were females, 31.3% males, 1.3% hermaphrodites and 8.2% of the oysters of undetermined sex. At Point II, 66.2% were females, 30.4% males, 0.8% hermaphrodites and 2.5% (n=237) of undetermined sex. The gonadic stage analysis indicated that the reproduction period of the C. rhizophorae in the Maraú Peninsula was continuous all year, without any regressive phase. The condition index (R) ranged from 8.0% to 17.7%. The peak periods of R coincided with the expressive oyster’s percentage in the maturation and liberation gametic stages. The results of these findings will contribute information for the oyster spat collection and to the process installation of the oyster culture in Camamu Bay. Rev. Biol. Trop. 59 (1): 137-149. Epub 2011 March 01

Variação temporal e espacial de larvas de Crassostrea (Sacco, 1897) (Pterioida: Ostreidae) na Baía de Paranaguá, Paraná

Orientadora: Prof.ª Dr.ª Theresinha Monteiro AbsherDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Curso de Pós-Graduação em ZoologiaInclui referências: p. 50-62Resumo: Larvas de ostras do gênero Crassostrea (Sacco, 1897) foram coletadas quinzenalmente em dois locais da Baía de Paranaguá, Paraná (entrada e interior da baía) e em duas profundidades (superficie e fundo), no período de outubro de 1990 a outubro de 1991, com o objetivo de verificar os padrões de variabilidade temporal e a distribuição horizontal e vertical das larvas de ostras próximas à metamorfose. Foram feitos arrastos horizontais de 1 minuto de duração, com rede planctônica de 180 pm de malha. O material coletado foi preservado em formaldeído a 4%, neutralizado. As larvas foram posteriormente contadas, por amostragem total, sob microscópio estereoscópico. Os dados das contagens, previamente transformados em log(x+1), foram submetidos à análise de variância (ANOVA). As principais tendências de variabilidade do número de larvas com relação aos parâmetros hidrológicos (temperatura, salinidade, transparência da água e pH) foram postas em evidência pela análise em componentes principais (PCA). Constatou-se que o padrão de reprodução das ostras é o tipicamente encontrado em regiões tropicais (contínuo e com picos ao longo do ano). Acentuadas diferenças no número de larvas ocorreram entre o período quente e o de temperaturas mais baixas, no qual menores freqüências foram observadas. Maiores quantidades de larvas foram associadas, pela análise em componentes principais, à águas mais quentes, mais alcalinas e menos salinas. Os maiores picos de larvas foram observados nos meses de novembro e de abril. Diferenças significativas (ANOVA p<0,03) foram verificadas entre o numero de larvas na superfície e no fundo nos dois locais. Foi observada uma tendência à maior concentração de larvas junto ao fundo, principalmente na entrada da baía. É discutida a influência de fatores como estágio da maré, luz, feromônios e a velocidade de natação das larvas sobre a distribuição larval, bem como a discrepância entre o número de larvas das duas repetições. A homogeneidade no número de larvas entre os dois locais leva à suposição de que as larvas estão dispersas na baía, favorecendo o fluxo genético no ambiente. Ao mesmo tempo,as quantidades um pouco maiores de larvas no interior da baía, fazem supor que mecanismos de retenção larval estão ocorrendo no estuário, contribuindo para a manutenção das populações na região.Abstract: The present work analyzes horizontal and vertical distribution patterns together with temporal variation of oysters* larvae of the genus Crassostrea (Sacco, 1897) in Paranaguá Bay, Paraná. A conical net, 180 µm mesh size, was horizontally towed, fortnightly, during 1 minute, at two sites (inlet and inner section) and at two depths (surface and bottom), from October 1990 to October 1991. The samples were fixed and preserved in 4 % buffered formaldehyde. Full grown Crassostrea larvae (near metamorphosis) were counted in the whole sample under stereoscopic microscope. ANOVA of transformed (log x+1) oyster larva data was applied. Variability trends in larval abundance in relation to hydrological parameters (temperature, salinity, water transparency and pH) were analyzed through principal component analysis (PCA). Oyster reproduction was typical of tropical areas (continuous throughout the year with peak occurrence). Significant differences in larval abundance were registered during warm and cold periods, the latter showing the lowest values. PCA results indicated highest abundance values associated with warmer, more alkaline and less saline waters. Abundance peak was registered in November and April. Surface and bottom larval abundance were significantly different (ANOVA p<0,03), the highest value being registered near the bottom, especially at the bay entrance. The influence of tidal pattern, light, pheromone and swimming behavior on larval dispersal is discussed. Significant differences in replicate samples are also analyzed. The lack of significant differences in larval abundance between the two sampled sites indicate that larval dispersion occurs at the bay, favouring gene flow in the environment. Higher abundance at the inner section suggest that larval retention is also occurring in the estuary

Ciclo reproductivo del ostión de manglar Crassostrea rhizophorae (Bivalvia: Ostreidae) en la Bahía de Camamu, Bahia, Brasil

El ostión de manglar es un importante recurso pesquero que se distribuye por toda la costa brasileña y una de las especies nativas con mayor potencial para maricultura. Este estudio tuvo como objetivo conocer las características reproductivas del ostión de manglar Crassostrea rhizophorae en el estero del Río Maraú, Bahía de Camamu, Bahia, Brasil. Las muestras fueran recolectadas mensualmente, entre agosto de 2006 y septiembre de 2007, en dos sitios. Las metodologías utilizadas fueron el análisis histológico de las gónadas y el cálculo de rendimiento de carne. La temperatura del agua durante el período de estudio varió de 23.5°C a 30°C y la salinidad osciló entre 15 y 35ups. La altura de los ostiones examinados varió de 27 a 102mm (n=437). Hubo predominancia de hembras en las poblaciones de ambos sitios. Los análisis de estadios gonádicos demostraron que el proceso de reproducción de C. rhizophorae en el estero del Río Maraú es continuo durante el año, sin período de reposo sexual. El rendimiento de carne (R) fue de 8.0% a 17.7% (n=669). Los resultados de este estudio proveen informaciones para la captación de semilla e implantación de la ostricultura en la Bahía de Camamu