Identification of Melanoma Inhibitory Activity and Other Differentially Expressed Messenger-Rnas in Human-Melanoma Cell-Lines with Different Metastatic Capacity by Messenger-Rna Differential Display

Contains fulltext : 28552.pdf (publisher's version ) (Open Access

Expression of Tissue-Type Transglutaminase Correlates Positively with Metastatic Properties of Human-Melanoma Cell-Lines

Contains fulltext : 28555.pdf (publisher's version ) (Open Access

Functional analysis of the human calcyclin gene promoter in a panel of human melanoma cell lines

Contains fulltext : 22074___.PDF (publisher's version ) (Open Access

Simultaneous suppression of progression marker genes in the highly malignant human melanoma cell line BLM after transfection with the adenovirus-5 E1A gene

Contains fulltext : 22990___.PDF (publisher's version ) (Open Access

Identification of Melanoma Inhibitory Activity and Other Differentially Expressed Messenger-Rnas in Human-Melanoma Cell-Lines with Different Metastatic Capacity by Messenger-Rna Differential Display

Orientadora : Profª. Drª. Maria Eugênia Duarte NosedaCoorientador : Prof. Dr. Miguel Daniel NosedaCoorientador : Prof. Dr. Rilton Alves de FreitasTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 10/11/2017Inclui referências: fls. 169-177Resumo: O presente trabalho teve como objetivo a obtenção e a caracterização de ulvanas policarboxílicas via oxidação periodato-clorito e avaliação da atividade anticoagulante e propriedades físico-químicas dos polímeros nativos e modificados quimicamente. A macroalga verde Ulva fasciata foi submetida à extração aquosa (80 °C, 4 h) originando as ulvanas nativas F2 (20,6% de sulfato, 0,36 mmol.g-1 de COOH). Análises químicas e espectroscópicas (RMN e FTIR) mostraram que F2 é constituída por díades 4-ligadas de ?-L-ramnose 3-sulfato ligada à unidade de ácido urônico (?-D-glucurônico ou ?-L-idurônico) ou à unidade de ?-D-xilose sulfatada ou não em C-2. F2 foi oxidada com NaIO4 por 24, 48 e 72 horas e sequencialmente com NaClO2 originando as frações C1, C2 e C3, respectivamente (COOH = 1,23-1,81 mmol.g-1). C3 foi fracionada em DEAE-Sephacel originando a fração de maior rendimento C3c (25% de sulfato e 2,10 mmol.g-1 de COOH). As ulvanas nativas e modificadas foram analisadas por HPSEC-RI-LS. Após a modificação química houve redução nos valores de Massa Molar Média Ponderada (Mw) em até 6,9 vezes e diminuição no tamanho dos segmentos rígidos (comprimento de persistência - Lp) em até 2,6 vezes. A avaliação da atividade anticoagulante in vitro através do teste de tempo de tromboplastina parcial ativada (APTT) mostrou que as ulvanas policarboxílicas apresentaram atividade anticoagulante superior em relação a fração nativa na seguinte ordem: C1<C2<C3c<C3. As ulvanas nativas apresentaram uma baixa variação nos tempos de protrombina (PT) e trombina (TT) em relação à salina, sugerindo que as ulvanas policarboxílicas atuam na via intrínseca da cascata de coagulação. Esta atividade foi atribuída a um balanço de cargas negativas (grupo sulfato e carboxila) no qual o polímero adote uma conformação ao acaso em solução. Desse modo, a modificação química das ulvanas via oxidação periodato-clorito originou diferentes ulvanas policarboxílicas com potencial aplicação como novos anticoagulantes. Palavras-chaves: Ulvanas, modificações químicas, oxidação periodato-clorito, atividade anticoagulante.Abstract: The aim of this study was to obtain and polycarboxylic ulvans via periodate-chlorite oxidation. The green seaweed Ulva fasciata was submitted to aqueous extraction (80 °C, 4 h) in order to obtain fraction F2 (20.6% of sulfate groups and 0.36 mmol.g-1 of COOH). Chemical and spectroscopic analysis (13C, 1H and HSQC NMR) showed F2 is built of ?-L-rhamnose 3-sulfate 4-linked to uronic acids (?-D-glucuronic or ?-L-iduronic) or ?-D-xylose sulfated or not at C-2. F2 was oxidized with NaIO4 for 24, 48 and 72 h and then oxidizes with NaClO2 originating fractions C1, C2 and C3 respectively (COOH = 1.23-1.81 mmol.g-1). C3 was fractionated in DEAE-Sephacel giving rise to the major fraction C3c (25% of sulfate and 2.1 mmol.g-1 of COOH). The modified ulvans were analyzed by HPSEC-RI-LS. After chemical modification the Molar Mass (Mw) and the size of rigid segments decreased until 6.9 and 2.6 fold, respectively. The anticoagulant activity of native and polycarboxylic ulvans was evaluated by the in vitro assay of activated prothrombin time (APTT). The chemical modified products presented a higher anticoagulant activity when compared to native ulvan F2 in the following sequence: C1< C2<C3c<C3. The native and polycarboxylic ulvans induced only a slight increase in time clotting in the assay of prothrombin (PT) and thrombin time (TT), suggesting the anticoagulant activity of polycarboxylic ulvans is mainly due to an interaction of these polymers with the coagulation factors from the intrinsic pathway. The activity was attributed to a distribution of negative charges (sulfate and carboxyl groups) in which the polymer adopt a random coil chain conformation in solution. Therefore, chemical modification of ulvans via periodate/chlorite oxidation originated different polycarboxylic ulvans with potential aplications as new anticoagulant drugs. Keyword: ulvans, chemical modification, periodate-chlorite oxidation, anticoagulant activity

nmd, a novel gene differentially expressed in human melanoma cell lines, encodes a new atypical member of the enzyme family of lipases

Item does not contain fulltex