Régénération par embryogénèse somatique en milieu liquide et transformation génétique par biolistique de bananiers di et triploïdes

Dans le cadre du programme d'amélioration génétique du bananier du CIRAD, un procédé de transformation génétique au moyen d'un canon à hélium, couplé à un système de régénération par embryogénèse somatique, a été développé. Ce travail a été essentiellement effectué sur le génotype `French Sombre', bananier plantain (AAB). Des suspensions cellulaires ont été établies à partir de cals. Par étalement sur un milieu semi-solide, elles évoluent en embryons somatiques. Une étude histocytologique a permis de comprendre le mode d'entretien de la suspension et l'ontogénèse des embryons somatiques. Dix à quarante pour cent d'entre eux sont convertibles en plantules. Des essais de conformité ont été mis en place au Cameroun. Les conditions optimales pour obtenir l'expression transitoire du gène rapporteur gus dans les cellules de bananier ont été déterminées. Six promoteurs ainsi que différents agents de sélection ont été testés. Les premiers essais de transformation stable ont été réalisés avec un plasmide comportant les gènes gus et bar sous le contrôle de la séquence promotrice de l'ubiquitine du maï

Etude de l'incidence de l'atmosphère sur le développement et la maturation des embryons somatiques d'Hevea brasiliensis Muell-Arg

Le faible pourcentage de germination des embryons somatiques d'Hevea brasiliensis formés dans les conditions de culture actuellement utilisés est dû en partie à une maturation insuffisante comparée à celle des embryons zygotiques. L'impact de deux composants de l'atmosphère de culture (éthylène et oxygène) sur l'acquisition par les embryons d'un méristème caulinaire et de réserves lipoprotéiques suffisantes est étudié. L'éthylène bloque le développement des embryons somatiques isolés sur un milieu de maturation. Le KMnO4 (absorbant l'éthylène) et surtout l'AgNO3 (inhibant l'action de l'éthylène) accélèrent le début de la germination sans induire pour autant la formation du méristème caulinaire. Une hypoxie à 9% réalisée pendant la période de développement des embryons somatiques limite la nécrose des cals et double le nombre d'embryons les plus conformes. Une hypoxie à 9% sur les embryons somatiques sur les embryons isolés sur un milieu de maturation est bénéfique : elle oriente le métabolisme vers l'accumulation de réserves protéiques et semble favoriser la mise en place de cellules méristématiques au niveau de l'apex. Mais des hypoxies trop poussées (2% d'oxygène) inhibent la germinatio

La micropropagazione in Francia e nord Europa

International audienceSome of the initial successes in in vitro culture were obtained by French researchers, such as Gautheret and Morel. In the 1960s, commercial micropropagation activities are the focus of research. At the end of the 1980's, almost 20 societies were producing approximately 40 millions of in vitro-cultured plants. The production of in vitro-grown plants in France is now approximately 8-10 million per year. Banana, coffee and strawberry are the most important crops propagated in vitro. Information on commercial micropropagation in Belgium and the Netherlands are presented

Cryopreservation at the 'Institut National d'Horticulture' of Angers: past, present and future

International audienceIn order to guarantee safe, long-term conservation of the National Institute of Horticulture Pelargonium collection, apex cryopreservation studies have been undertaken since 1999. The first results were obtained on apices of P. x peltatum 'Balcon Lilas', using an encapsulation-dehydration process. Various steps of this process (preculture, dehydration, rewarming) were studied in order to simplify and optimize this protocol. A newly determined protocol was tested on 20 genotypes representative of the diversity of our collection. Apex survival was obtained for 19 of them, and variability in cryopreservation tolerance was observed with survival rates between 28% and 84%. Plants for various genotypes were obtained after cryopreservation however some difficulties slowed down the establishment of an efficient and reliable cryogenic protocol. In 2005, studies were undertaken in order to adapt the droplet-vitrification procedure to Pelargonium. A reproducible process was obtained optimizing the duration in the loading solution and in plant vitrification solution 2. This success permitted us to continue studies on the quality of the regenerated plants with regard to their conformity and sanitary statu

Histo-cytological changes in Pelargonium apices during the cryopreservation process: Effect of the osmotic agent chosen for the preculture step

International audienceApex cryopreservation studies were undertaken to guarantee the safe, long-term conservation of a Pelargonium collection. Plant regrowth was obtained with a modified encapsulation-dehydration process. Choosing P. x peltatum 'Balcon Lilas' as a model, the main objective was to determine if sucrose is specific in conferring dehydration tolerance to apices. In the preculture medium sucrose was replaced by glucose, glucose with 3% sucrose, or sorbitol at similar osmolarities. None of the osmotic agents tested produced a level of tolerance to desiccation as high as that of sucrose. A high concentration of glucose was toxic and did not induce a dehydration tolerance. A histo-cytological study was performed on apices precultured with the various osmotic agents. Starch accumulation was only observed in most of the apex cells following sucrose preculture, not with the other osmotica. Other important differences concerned nucleus aspect, nucleolus presence, cell plasmolysis and cytoplasm constitutio

Cryopreservation of Pelargonium apices by droplet-vitrification

International audienceThe droplet-vitrification method was adapted to Pelargonium apices by optimizing the duration of the loading solution (LS) as well as the plant vitrification solution 2 (PVS2). The excised apices were dehydrated in two steps (20 min in LS and 15 min in PVS2) and then immersed directly in liquid nitrogen (LN). After thawing and unloading in the recovery solution at room temperature for 15 min, apices were plated onto semi-solid Murashige and Skoog medium. This simple protocol without any pretreatment was successfully applied to eight cultivars with a survival level ranging between 55.6 - 96.2 % and a regrowth level between 9.1% - 70.6%. These results prove the feasibility of the long-term storage of Pelargonium germplasm through cryopreservatio