Role of assisted reproduction biotechniques in the transmission of bovine viral diarrhea virus

Las biotécnicas de reproducción asistida han adquirido importancia comercial en los últimos años. Asociado a estas técnicas surge el interrogante sobre su rol en la posible transmisión de agentes infecciosos vía semen y ovocitos utilizados como material de partida. La elevada prevalencia y capacidad de causar infecciones reproductivas del virus de la Diarrea Viral Bovina (vDVB) lo ha convertido en un problema potencial en la producción in vitro de embriones. La presente revisión aborda los antecedentes previos sobre la temática y muestra resultados propios sobre las vías de infección del virus de la Diarrea Viral Bovina (vDVB) asociadas a las técnicas de producción in vitro (PIV) y su impacto en la reproducción bovina. Los resultados obtenidos demuestran alteraciones en el desarrollo folicular ovárico asociadas a infecciones persistentes por vDVB. Estas alteraciones fueron reflejadas en la baja eficiencia obtenida en la fecundación in vitro (FIV) como resultado de la interacción temprana entre el virus y la línea germinal del ovario. Por otra parte, se determinó que el vDVB-no citopático (vDVB-ncp) puede atravesar la zona pelúcida de ovocitos bovinos infectados al inicio de la etapa de maduración in vitro (MIV). Este hallazgo pone en evidencia la importancia de controles sanitarios en los sistemas de producción in vitro basados en la comprensión de los riesgos de transmisión del virus a partir de semen y ovocitos. Asimismo, la asociación del vDVB con gametas fue demostrada cuando la FIV se realizó tanto con ovocitos como con semen de animales persistentemente infectados (PI), donde se observó una disminución en las tasas de división y desarrollo de embriones. La información presentada en este artículo de revisión aporta al conocimiento sobre las implicancias de infecciones por vDVB en los sistemas de PIV y su efecto en el desarrollo embrionario, como así también al impacto de la transmisión de la infección en el ganado bovino mediante técnicas de reproducción asistida.Biotechnical of assisted reproduction have become commercially important in recent years. Associated with these techniques the question about his possible role in the transmission of infectious agents via semen and oocytes used as starting material arises. The high prevalence and ability to cause reproductive infections of the bovine viral diarrhea virus (BVDV) has become a potential problem in the in vitro production embryos. This update addresses the previous data on the subject and shows own results on the ways of infection with bovine viral diarrhea (BVDV) associated with in vitro production techniques and their impact on the reproduction bovine. The results demonstrate changes in the ovarian follicular development associated with persistent BVDV infection. These changes were reflected in the low efficiency obtained in the in vitro fertilization as a result of early interaction between the virus and ovarian germ line. Moreover, it was determined that non-cytopathic BVDV can cross the zona pellucida of bovine oocytes infected at the beginning of the stage of in vitro maturation. This finding highlights the importance of to understand fully the risks of transmission of virus via semen and oocytes and appropriate quality assurances are used in in vitro production embryos systems (IVP). Likewise, the association of BVDV was demonstrated with gametes when IVF was performed with both types from animals infected persistent, where a decrease was observed in cleavage rates and embryo development. The information obtained in this review article contributes to knowledge about the implications of BVDV infections in IVP systems and its effect on embryonic development, as well as the impact of the transmission of infection in cattle by breeding techniques assisted.Fil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Kaiser, Germán Gustavo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Laboratorio de Biotecnología de la Reproduccion; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; Argentin

Upregulation of interferon-alpha gene in bovine embryos produced in vitro in response to experimental infection with noncytophatic bovine-viral-diarrhea virus

In-vitro fertilization is a routine livestock-breeding technique widely used around the world. Several studies have reported the interaction of bovine viral-diarrhea virus (BVDV) with gametes and in-vitro-produced (IVP) bovine embryos. Since, gene expression in BVDV-infected IVP bovine embryos is scarcely addressed. The aim of this work was to evaluate the differential expression of genes involved in immune and inflammatory response. Groups of 20–25 embryos on Day 6 (morula stage) were exposed (infected) or not (control) to an NCP-BVDV strain in SOF medium. After 24 h, embryos that reached expanded blastocyst stage were washed. Total RNA of each embryo group was extracted to determine the transcription levels of 9 specific transcripts related with antiviral and inflammatory response by SYBR Green real time quantitative (RT-qPCR). Culture media and an aliquot of the last embryos wash on Day 7 were analyzed by titration and virus isolation, respectively. A conventional PCR confirmed BVDV presence in IVP embryos. A significantly higher expression of interferon-α was observed in blastocysts exposed to NCP-BVDV compared to the controls (p < 0.05). In this study, the upregulation of INFα and TLR7 genes involved in inflammatory and immune response in BVDV-infected IVP bovine embryos is a new finding in this field. This differential expression suggest that embryonic cells could function in a manner like immune cells by recognizing and responding early to interaction with viral pathogens. These results provide new insights into the action of BVDV on the complex molecular pathways controlling bovine early embryonic development.Fil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible. - Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estacion Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible.; ArgentinaFil: Arias, María E.. Universidad de La Frontera. Núcleo Científico y Tecnológico en Recursos Naturales; ChileFil: Kaiser, Germán Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible. - Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estacion Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible.; ArgentinaFil: Mucci, Nicolás Crescencio. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible. - Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estacion Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible.; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo C.. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Agrarias; ArgentinaFil: Felmer Dörner, Ricardo Nicolás. Universidad de La Frontera. Núcleo Científico y Tecnológico en Recursos Naturales; Chil

Identificación y caracterización molecular de virus Orf en mujeres de Sudamérica expuestas laboralmente

Contagious Ecthyma (CE) is a severe exanthematous dermatitis caused by the Orf virus (ORFV) that mainly affects domestic small ruminants such as sheep and goats. It is a worldwide-distributed occupational zoonosis, particularly infecting those in close contact with animals or animal products such as shepherds, farmers and veterinarians, among others. In the present work, we report the first human CE case confirmed in Argentina. A phylogenetic analysis based on four gene sequences of the isolated strain responsible for the disease showed that this isolate grouped with other ORFV sequences that caused reported CE cases in sheep from the same Argentine province. We also sequenced a sample from a Chilean human case reported in 2017, whose phylogenetic analysis showed that it groups together with other Argentine isolates from locations close to the border with Chile.Fil: Peralta, Andrea Verónica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Flores Olivares, Carlos. Universidad Mayor; ChileFil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible. - Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estacion Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible.; ArgentinaFil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible. - Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estacion Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible.; ArgentinaFil: Odriozola, Ernesto Raul. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: Madariaga, Carolina. Universidad Santo Tomás (ust);Fil: Odeón, Anselmo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: König, Guido Alberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario. Instituto de Agrobiotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Canton, German. Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible. - Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estacion Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación Para la Producción Agropecuaria y El Desarrollo Sostenible.; Argentin

Effect of Bovine Viral Diarrhea Virus on the ovarian functionality and in vitro reproductive performance of persistently infected heifers

The aim of this study was to study the effect of Bovine Viral Diarrhea Virus on the reproductive female tract by means of analyzing the ovarian follicular population of persistently infected (PI) heifers, and evaluating the performance of oocytes procured form those heifers in in vitro fertilization procedures. Seven BVDV PI Aberdeen Angus and British crossbred heifers ranging from 18 to 36 months of age were spayed and their ovaries used for viral isolation, microscopic examination, and in vitro fertilization procedures. Bovine Viral Diarrhea Virus was detected from the follicular fluid and sera of all PI heifers. Microscopic examination of the ovaries from PI heifers showed a significant drop in the number of follicles cortical regions, compared with controls. A comparative analysis of the stages of follicular development showed a significant decrease in the number of primordial and tertiary follicles in the cortical regions of ovaries from PI heifers. Viral antigen was detected by immunohistochemistry, and was widely distributed throughout the ovarian tissues. There were differences in the rate of cleavage and embryo development between oocytes obtained from the ovaries of control animals and PI heifers. Furthermore, two developed embryos obtained from oocytes from one of the PI heifers were positive to BVDV, as well as two media from in vitro fertilization (IVF) procedures. The results of this study demonstrate that BVDV PI heifers exhibit alterations in follicular population through of the early interaction between the virus and germ cell line affecting directly the mechanisms involved in the ontogenesis of the ovary.Fil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Kaiser, Germán Gustavo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Laboratorio de Biotecnología de la Reproduccion; ArgentinaFil: Mucci, N.C.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Laboratorio de Biotecnología de la Reproduccion; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Campero, Carlos Manuel. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentin

Genomic evolution of bovine viral diarrhea virus based on complete genome and individual gene analyses

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) genome consists of a single-stranded, positive-sense RNA with high genetic diversity. In the last years, significant progress has been achieved in BVDV knowledge evolution through phylodynamic analysis based on the partial 5′UTR sequences, whereas a few studies have used other genes or the complete coding sequence (CDS). However, no research has evaluated and compared BVDV evolutionary history based on the complete genome (CG), CDS, and individual genes. In this study, phylodynamic analyses were carried out with BVDV-1 (Pestivirus A) and BVDV-2 (Pestivirus B) CG sequences available on the GenBank database and each genomic region: CDS, UTRs, and individual genes. In comparison to the CG, the estimations for both BVDV species varied according to the dataset used, pointing out the importance of considering the analyzed genomic region when concluding. This study may provide new insight into BVDV evolution history while highlighting the need to increase the available BVDV CG sequences to perform more comprehensive phylodynamic studies in the future.Fil: Spetter Lucas, Maximiliano Joaquín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Louge Uriarte, Enrique Leopoldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; ArgentinaFil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentin

Efecto del virus de la diarrea viral bovina sobre la posterior infección del gammaherpesvirus bovino tipo 4 en cultivo primario de células endometriales: modelo in vitro de coinfección viral

El virus de la diarrea viral bovina (DVB) y el gammaherpesvirus bovino 4 (BoHV-4) infectan el útero del ganado siendo responsables de enormes pérdidas económicas. La mayor parte de la patogenia del BoHV-4 en el tracto reproductivo bovino se ha dilucidado mediante la realización de pruebas en cultivos primarios. Por lo tanto, es importante contar con condiciones in vitro óptimas, evitando la presencia de otros patógenos que puedan alterar los resultados. El DVB es uno de los contaminantes virales más frecuentes de los cultivos celulares. Teniendo en cuenta que el biotipo del DVB no citopático (NCP) puede generar ganado infectado persistentemente (PI), siendo la principal fuente de transmisión del virus en rebaños susceptibles, es importante verificar los productos derivados del ganado que están destinados a ser utilizados en laboratorios de investigación. El objetivo de este trabajo fue evaluar cómo la infección natural de células endometriales bovinas (CEB) con una cepa NCP de DVB (CEB + DVB) afecta la replicación de BoHV-4. Se evaluaron CEB libres de DVB y CEB + DVB, presentando ambos cultivos susceptibilidad a la infección con BoHV-4 con un efecto citopático característico. Los datos de RT-PCR mostraron un retraso en la expresión génica del BoHV-4 para el gen temprano IE2 y el gen de la glicoproteína de superficie gB; no habiendo diferencias en la cinética de expresión de las glicoproteínas gH y gL. En cuanto a los títulos virales se observaron diferencias significativas (p <0,05) entre los cultivos celulares en todos los tiempos analizados, siendo siempre más bajos en células CEB + DVB. En el presente estudio, se demostró cómo la infección natural de CEB con una cepa NCP de DVB afecta la expresión génica y la cinética de replicación de BoHV-4. El retraso en la expresión génica en las células CEB + DVB se puede atribuir a alteraciones producidas por el DVB en la célula huésped, lo que generaría la falta de factores celulares necesarios para que BoHV-4 pueda llevar a cabo su ciclo replicativo de forma eficiente. Curiosamente, la comparación de los títulos de BoHV-4 en cultivos celulares mostró que la carga viral en el medio extracelular se ve afectada por una infección previa con DVB. Esta observación podría estar relacionada con la estrategia de las cepas NCP- DVB de evitar la inducción de la muerte celular. Por lo tanto, en caso de infección concomitante, la replicación de BoHV-4 puede verse alterada en células primariamente infectadas con DVB. Este hallazgo destaca la importancia de descartar la infección por DVB en cultivos de células primarias bovinas para evitar interferencias biológicas o malas interpretaciones de los resultados a la hora de realizar estudios in vitro con BoHV-4.Fil: Romeo, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Louge Uriarte, Enrique Leopoldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Delgado, Sabrina Giselle. Universidad Nacional de Mar del Plata; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaVI Jornadas Internacionales: Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción AnimalCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaInstituto de Investigación y Tecnología y Reproducción AnimalUniversidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinaria

Ivermectin antiviral activity against Varicellovirus bovinealpha 1: assessment of intracellular drug accumulation in virus-infected cells

Varicellovirus bovinealpha 1 (formerly bovine alphaherpesvirus type 1, BoAHV-1) is associated with several syndromesin cattle, including respiratory disease and is one of the main agents involved in the bovine respiratory disease complex(BRDC). Its infectious cycle is characterized by latent infections with sporadic virus reactivation and transmission. Althoughthe acute disease can be prevented by the use of vaccines, specifc therapeutic measures are not available. Ivermectin (IVM)is a semi-synthetic avermectin with a broad-spectrum antiparasitic activity, which has previously shown to have potential asan antiviral drug. In this study, IVM antiviral activity against BoAHV-1 was characterized in two cell lines (MDBK [MadinDarby bovine kidney] and BT [bovine turbinate]), including the measurement of intracellular drug accumulation withinvirus-infected cells. IVM antiviral activity was assessed at three diferent drug concentrations (1.25, 2.5 and 5 µM) afterincubation for 24, 48 and 72 h. Slight cytotoxicity was only observed with 5 µM IVM. Even the lowest IVM dose was able toinduce a signifcant reduction in virus titers in both cell lines. These fndings indicate that the antiviral efects of IVM wereevident in our experimental model within the range of concentrations achievable through therapeutic in vivo administration.Consequently, additional in vivo trials are necessary to validate the potential utility of these results in efectively managingBoAHV-1 in infected cattle.Fil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Miró, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Barcos, Oscar. No especifíca;Fil: Lanusse, Carlos Edmundo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Lifschitz, Adrian Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentin

Cinética de transcriptos de genes inmediatos y tardíos del herpes virus bovino tipo 4 (BoHV-4) en cultivos primarios de endometrio bovino

Introducción y Objetivos: La metritis post parto afecta de forma negativa la eficiencia reproductiva en vacas lecheras. Generalmente, los patógenos implicados son Escherichia coli y Trueperella pyogenes, pero la infección viral por herpesvirus (BoHV-4) y el virus de la diarrea viral bovina (vDVB) también son relevantes en la etiología de esta patología. El BoHV-4 es un gammaherpesvirus caracterizado por su baja virulencia y tropismo por las células endometriales. Su replicación exitosa se atribuye a eventos post ingreso a la célula. La activación de manera eficiente del gen Inmediato temprano 2 (IE2) es un desencadenante molecular clave en la replicación del BoHV-4, seguido de la activación de genes tardíos como los que codifican para importantes glicoproteínas (g) de la envoltura (gB, gH y gL). La gB participa en la adhesión a la célula huésped y es indispensable para la replicación lítica del BoHV-4, mientras que la gL es necesaria para el ingreso a la célula diana y forma un heterodímero con gH. Objetivo: Analizar la cinética de expresión de transcriptos de BoHV-4 en cultivo primario de células endometriales bovinas (CPCEB) infectadas naturalmente con vDVB. Materiales y Métodos: Células: CPCEB obtenido por el método de Tebaldi. Dichas células se evaluaron para el vDVB por IFD, confirmándose la presencia del antígeno viral en las mismas (CEB DVB+); no se observó efecto citopático. Asimismo se utilizaron células endometriales bovinas sin infectar (CEB Control). Se prepararon placas de 24 wells con CEB DVB+ y CEB Control. Las células se infectaron con la cepa 07/435 de BoHV-4 a una MOI de 0,5. Luego de distintas horas post infección (p.i.) (6, 8, 12, 24, 30, 48 y 64 hs) se levantaron las células, se extrajo el ARN y se amplificaron los genes que codifican para IE2, gB, gH y gL mediante RT-PCR. Resultados: Se observó el efecto citopático (ECP) característico del BoHV-4 en las CEB Control transcurridas las 30hs p.i., mientras que para las CEB DVB+ el ECP fue evidente luego de 48hs p.i. En lo que respecta a la expresión génica se observaron pequeñas variaciones temporales en su cinética. La expresión del gen temprano IE2 no se detectó luego de 6hs p.i. en ninguno de los cultivos infectados. No se observó variación en la cinética de expresión para la gB en ambos cultivos, siendo el comienzo de la expresión a las 24 hs p.i. al igual que en células MDBK. No obstante en las CEB Control la expresión de los genes que codifican para gH y gL se detectó a partir de 12 y 24 hs p.i. respectivamente, lo cual coincide con un estudio realizado en células MDBK. Sin embargo en las CEB DVB+ la expresión para ambos genes se observó a partir de 30hs p.i. Conclusiones: La infección natural de células endometriales bovinas con el virus de la diarrea viral bovina afectaría de forma temporal la cinética de replicación del BoHV-4, evidenciándose por un retraso en la expresión de los genes tardíos. Los resultados obtenidos en éste estudio demuestran la importancia de utilizar cultivos celulares y suero fetal bovino libre de vDVB para evitar interferencias en estudios in vitro con BoHV-4 en particular y en herpesvirus en general.Fil: Romeo, Florencia. Ministerio de Ciencia. Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Louge Uriarte, Enrique Leopoldo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pereyra, Susana Beatriz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; ArgentinaFil: Spetter Lucas, Maximiliano Joaquín. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Agencia de Extensión Rural Balcarce; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaXV Congreso Argentino de Microbiología; V Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos; V Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos y XIV Congreso Argentino de Microbiología GeneralCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaAsociación Argentina de Microbiologí

Clinical and reproductive consequences of using BVDV contaminated semen in artificial insemination in a beef herd in Argentina

The current report was prompted by an atypical outbreak of mucosal disease that occurred in a beef herd in the southwestern part of Buenos Aires Province, Argentina, where a total of 9/41 (21.9%) yearling bulls died. Blood samples from 73 bulls and 189 heifers were tested for evidence of persistent BVDV infection with Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV). Non-cytopathic BVDV was isolated from 7 (9.6%) 24- to 36-month-old bulls, and 3 (1.6%) 36-month-old heifers. Non-cytopathic BVDV was also detected in the seminal plasma of three of six persistently infected (PI) bulls. Furthermore, a 171 bp genomic fragment of BVDV was consistently detected by nested RT-PCR in one of the two samples of the commercial semen used for artificial insemination, indicating that this semen could be a possible source of infection for the whole herd. To evaluate the possible reproductive consequences of PI heifers and bulls, ovaries and semen were obtained from PI cattle for in vitro assays. The in vitro fertilization of oocytes with semen from PI bulls was associated with decreased cleavage and embryo development rates. Additionally, non-cytopathic BVDV was isolated from the follicular fluid of PI heifers. Genetic typing revealed that all isolates BVDV from the present study had a high percentage of homology and that all of the fragments from the RT-PCR clearly fit with the BVDV 1b cluster. These findings confirm the negative impact that BVDV can have on the reproductive performance of cattle and the importance of applying the proper sanitary controls to minimize the risk of BVDV infection.Fil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; ArgentinaFil: Kaiser, Germán Gustavo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Weber, Natalia Alejandra. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Leunda, Maria Rosa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Pecora, Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; Argentina. Instituto de Virología; ArgentinaFil: Malacari, Dario Amilcar. Instituto de Virología; ArgentinaFil: Morán, Oscar Daniel. Otra; ArgentinaFil: Campero, C. M.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; Argentin

Modulation of Apoptosis by Bovine Gammaherpesvirus 4 Infection in Bovine Endometrial Cells and the Possible Role of LPS in This Process

The prevalent pathogens associated with bovine uterine infections are bacteria that appearto increase the host’s susceptibility to secondary infections with other bacteria or viruses, amongwhich BoGHV4 is the most frequently found. In this work, the study of the pathways of apoptosisinduction was carried out on an experimental model of primary culture of endometrial cells, in orderto know the implication of BoGHV4 and the presence of bacterial LPS in the pathogenesis of thebovine reproductive tract. For this, different staining techniques and molecular analysis by RT-PCRwere used. The results obtained allowed us to conclude that the level of cell death observed in theproposed primary culture is directly related to the time of viral infection and the presence of LPS inBoGHV4 infection. The apoptosis indices in cells infected with BoGHV4 and BoGHV4 + LPS revealeda maximum that correlated with the appearance of cytopathic effects and the maximum viral titersin the model studied. However, morphological, biochemical, and molecular changes were evidentduring both early and late stages of apoptosis. These findings provide information on the factors thatmay influence the pathogenesis of BoGHV4 and help to better understand the mechanisms involvedin virus infection.Fil: Romeo, Florencia. Universidad Nacional de Mar del Plata; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Delgado, Santiago Germán. Universidad Nacional de Mar del Plata; ArgentinaFil: Yavorsky, Marisol Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata; ArgentinaFil: Martinez Cuesta, Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos. Facultad de Ciencias Veterinarias ; ArgentinaFil: Pereyra, Susana Beatriz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Gonzalez Altamiranda, Erika Analia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Louge Uriarte, Enrique Leopoldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentin