Generation of a human control iPSC line with a European mitochondrial haplogroup U background

Human iPSC line N44SV.5 was generated from primary normal human dermal fibroblasts belonging to the European mitochondrial haplogroup U. For this purpose, reprogramming factors Oct3/4, Sox2, Klf4, and cMyc were delivered using a non-integrative methodology that involves the use of Sendai virus.This work was supported by grants from the “Centro de Investigación Biomédica en Red en enfermedades raras” (CIBERER) (grant 13-717/132.05 to RG), the “Instituto de Salud Carlos III” [Fondo de Investigación Sanitaria and Regional Development Fund (ERDF/FEDER) funds PI10/0703 and PI13/00556 to RG and PI15/00484 to MEG], “Comunidad Autónoma de Madrid” (grant number S2010/BMD-2402 to R.G); T.G. receives grant support from the Universidad Autónoma de Madrid, FPI-UAM and F.Z.D. from the Ministerio de Educación, Cultura y Deporte, grant number FPU13/00544. M.E.G. is staff scientist at the “Centro de Investigación Biomédica en Red en Enfermedades Raras” (CIBERER

Generation of a human iPSC line from a patient with Leigh syndrome caused by a mutation in the MT-ATP6 gene

Human iPSC line L749.1 was generated from fibroblasts of a patient with Leigh syndrome associated with a heteroplasmic mutation in the MT-ATP6 gene. Reprogramming factors OCT4, SOX2, CMYC and KLF4 were delivered using retroviruses.This work was supported by grants from the “Centro de Investigación Biomédica en Red en enfermedades raras” (CIBERER) (Grant 13-717/132.05 to RG), the “Instituto de Salud Carlos III” (FIS PI10/0703 and PI13/00556 to RG and PI15/00484 to MEG cofunded by FEDER), “Comunidad Autónoma de Madrid” (grant number S2010/BMD-2402 to R.G); T.G-M. receives grant support from the Universidad Autónoma de Madrid, FPI-UAM and F.Z-D. from the Ministerio de Educación, Cultura y Deporte, grant number FPU13/00544. M.E.G. is senior staff scientist at the “Centro de Investigación Biomédica en Red en Enfermedades Raras” (CIBERER

Generation of a human iPSC line from a patient with a defect of intergenomic communication

Human iPSC line PG64SV.2 was generated from fibroblasts of a patient with a defect of intergenomic communication. This patient harbored a homozygous mutation (c.2243G>C; p.Trp748Ser) in the gene encoding the catalytic subunit of the mitochondrial DNA polymerase gamma gene (POLG). Reprogramming factors Oct3/4, Sox2, Klf4, and cMyc were delivered using a non integrative methodology that involves the use of Sendai virus.This work was supported by grants from the “Centro de Investigación Biomédica en Red en enfermedades raras” (CIBERER) (Grant 13-717/132.05 to RG), the “Instituto de Salud Carlos III” [Fondo de Investigación Sanitaria and Regional development fund (ERDF/FEDER) funds PI10/0703 and PI13/00556 to RG and PI15/00484 to MEG], “Comunidad Autónoma de Madrid” (Grant number S2010/BMD-2402 to RG); TG receives grant support from the Universidad Autónoma de Madrid (FPI-UAM) and FZD from the Ministerio de Educación, Cultura y Deporte (Grant FPU13/00544). MEG is staff scientist at the “Centro de Investigación Biomédica en Red en Enfermedades Raras” (CIBERER

c-Src functionality controls self-renewal and glucose metabolism in MCF7 breast cancer stem cells

Deregulation of Src kinases is associated with cancer. We previously showed that SrcDN conditional expression in MCF7 cells reduces tumorigenesis and causes tumor regression in mice. However, it remained unclear whether SrcDN affected breast cancer stem cell functionality or it reduced tumor mass. Here, we address this question by isolating an enriched population of Breast Cancer Stem Cells (BCSCs) from MCF7 cells with inducible expression of SrcDN. Induction of SrcDN inhibited self-renewal, and stem-cell marker expression (Nanog, Oct3-4, ALDH1, CD44). Quantitative proteomic analyses of mammospheres from MCF7-Tet-On-SrcDN cells (data are available via ProteomeXchange with identifier PXD017789, project DOI: 10.6019/PXD017789) and subsequent GSEA showed that SrcDN expression inhibited glycolysis. Indeed, induction of SrcDN inhibited expression and activity of hexokinase, pyruvate kinase and lactate dehydrogenase, resulting in diminished glucose consumption and lactate production, which restricted Warburg effect. Thus, c-Src functionality is important for breast cancer stem cell maintenance and renewal, and stem cell transcription factor expression, effects linked to glucose metabolism reduction.This work has been supported by grand SAF2016–75991-R (MINECO, AEI/FEDER, UE) to Jorge Martín-Pérez and ISCIII [grand PI 16/00789] to Miguel Ángel Fernández-Moreno. Víctor Mayoral-Varo was supported by the grand SAF2016–75991-R (MINECO, AEI/FEDER, UE). We acknowledge support for publication fee by the CSIC Open Access Publication Support Initiative through its Unit for Information Resources for Research (URICI)

Metformin reduces macrophage HIF1α-dependent proinflammatory signaling to restore brown adipocyte function in vitro

© 2021 The Authors.Therapeutic potential of metformin in obese/diabetic patients has been associated to its ability to combat insulin resistance. However, it remains largely unknown the signaling pathways involved and whether some cell types are particularly relevant for its beneficial effects. M1-activation of macrophages by bacterial lipopolysaccharide (LPS) promotes a paracrine activation of hypoxia-inducible factor-1α (HIF1α) in brown adipocytes which reduces insulin signaling and glucose uptake, as well as β-adrenergic sensitivity. Addition of metformin to M1-polarized macrophages blunted these signs of brown adipocyte dysfunction. At the molecular level, metformin inhibits an inflammatory program executed by HIF1α in macrophages by inducing its degradation through the inhibition of mitochondrial complex I activity, thereby reducing oxygen consumption in a reactive oxygen species (ROS)-independent manner. In obese mice, metformin reduced inflammatory features in brown adipose tissue (BAT) such as macrophage infiltration, proinflammatory signaling and gene expression, and restored the response to cold exposure. In conclusion, the impact of metformin on macrophages by suppressing a HIF1α-dependent proinflammatory program is likely responsible for a secondary beneficial effect on insulin-mediated glucose uptake and β-adrenergic responses in brown adipocytes.This work was funded by grants RTI2018-094052-B-100 (MCIN/AEI/10.13039/501100011033/FEDER) , S2017/BMD-3684 (Comunidad de Madrid, Spain), Fundación Ramón Areces (Spain) and CIBERdem (ISCIII) to A.M.V., grant S2010/BMD-2423 (Comunidad de Madrid, Spain) to M.J.O. and A.M.V., PID2019-106371RB-I00 (MCIN/ AEI /10.13039/501100011033/ FEDER) to J.A and PI16/00789 (ISCIII, Spain) to M.A.F.-M. We also acknowledge all members of AMV's laboratory for helpful discussions. M.F. and B.V were supported by Inserm, CNRS, Université de Paris, and Région Ile-de-France. We also acknowledge the EFSD Albert Reynolds travel grant fellowship to V.F

Generación de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) para el estudio de enfermedades mitocondriales

Resumen del póster presentado al XXXVII Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular, celebrado en Granada del 9 al 12 de septiembre de 2014.Las enfermedades mitocondriales (EM) constituyen un amplio grupo de enfermedades genéticas multisistémicas cuyo nexo de unión es una disfunción en el sistema de fosforilación oxidativa. La falta de modelos experimentales adecuados para el estudio de dichas enfermedades, ha dificultado el avance en el desarrollo de nuevas terapias. En este sentido, la reprogramación de células somáticas a células madre pluripotentes inducidas (iPSC) mediante la expresión ectópica de cuatro factores de transcripción, OCT4, SOX2, KLF4 y c-MYC, ha abierto enormes posibilidades. Por ello, el objetivo general de este trabajo ha consistido en la generación de iPSC a partir de fibroblastos de pacientes con EM para el estudio y tratamiento potencial de las mismas. Para este fin, hemos establecido una colección de fibroblastos procedentes de biopsias de piel de pacientes con EM e individuos sanos. A continuación, se han generado líneas de iPSC a partir de dichos fibroblastos mediante el uso de vectores retrovirales o métodos no integrativos tipo virus Sendai. Así, hemos generado 16 líneas de IPSC portadoras de distintas mutaciones en genes mitocondriales codificados en el DNA mitocondrial o nuclear asociadas a distintas EM: Síndrome de Leigh, atrofia óptica sindrómica y EM producidas por defectos de comunicación intergenómica. Actualmente, estamos realizando la confirmación, molecular y funcional, de la pluripotencia de las líneas generadas, para posteriormente, diferenciarlas y caracterizarlas en los tipos celulares diana. La disponibilidad de iPSC como modelo experimental de las EM nos permitirá mejorar el conocimiento de los mecanismos fisiopatológicos de estas enfermedades y podrá suponer la apertura de nuevas vías para la identificación de tratamientos farmacológicos y de terapia celular.Financiado por CAIB-FSE, ISCIII (PI12/01827) y FEDER-Unión Europea “Una manera de hacer Europa”.Peer reviewe

Generación de células iPS como modelo para el estudio de enfermedades mitocondriales

Resumen del póster presentado a la VIII Reunión Científica Anual del Centro de Investigación Biomédica En Red de Enfermedades Raras, celebrada en San Lorenzo del Escorial (Madrid) los días 12 y 13 de marzo de 2015.Las enfermedades mitocondriales (EM) constituyen un amplio grupo de enfermedades genéticas multisistémicas cuyo nexo de unión es una disfunción en el sistema OXPHOS. La falta de modelos experimentales adecuados para el estudio de las EM, ha ralentizado el descubrimiento de nuevas terapias. En este sentido, la reprogramación de células somáticas a células madre pluripotentes inducidas (iPSCs) mediante la expresión ectópica de cuatro factores de transcripción, OCT4, SOX2, KLF4 y c-MYC, ha abierto enormes posibilidades. El objetivo general de este proyecto consiste en la generación de iPSCs a partir de fibroblastos de pacientes con EM para su estudio y potencial tratamiento. Para ello, hemos establecido una colección de fibroblastos procedentes de biopsias de piel de pacientes con EM e individuos sanos. A continuación, se han generado líneas de iPSCs a partir de dichos fibroblastos mediante el uso de vectores retrovirales o, mediante un método más seguro y eficiente, los virus sendai. Como resultado, contamos con más de diez líneas de IPSCs portadoras de mutaciones asociadas a distintas EM: síndrome de Leigh, atrofia óptica y EM que cursa con deleciones múltiples. Actualmente, hemos confirmado experimentalmente la pluripotencia de todas las líneas generadas y hemos comenzado su caracterización funcional así como la puesta a punto de protocolos para su diferenciación a los tipos celulares afectados. Este estudio permitirá mejorar el conocimiento de los mecanismos fisiopatológicos de las EM y podrá suponer la apertura de nuevas vías para la identificación de tratamientos farmacológicos y de terapia celular para este tipo de patogías.Peer reviewe

Generation of a human control iPSC line with a European mitochondrial haplogroup U background

Human iPSC line N44SV.5 was generated from primary normal human dermal fibroblasts belonging to the European mitochondrial haplogroup U. For this purpose, reprogramming factors Oct3/4, Sox2, Klf4, and cMyc were delivered using a non-integrative methodology that involves the use of Sendai virus.This work was supported by grants from the “Centro de Investigación Biomédica en Red en enfermedades raras” (CIBERER) (grant 13-717/132.05 to RG), the “Instituto de Salud Carlos III” [Fondo de Investigación Sanitaria and Regional Development Fund (ERDF/FEDER) funds PI10/0703 and PI13/00556 to RG and PI15/00484 to MEG], “Comunidad Autónoma de Madrid” (grant number S2010/BMD-2402 to R.G); T.G. receives grant support from the Universidad Autónoma de Madrid, FPI-UAM and F.Z.D. from the Ministerio de Educación, Cultura y Deporte, grant number FPU13/00544. M.E.G. is staff scientist at the “Centro de Investigación Biomédica en Red en Enfermedades Raras” (CIBERER).Peer Reviewe