Perfil epidemiológico y clínico de la tuberculosis en niños de la Comunidad Autónoma de Madrid

La tuberculosis (TB) es una de las enfermedades más antiguas de las que se tiene constancia. El término tuberculosis fue empleado por primera vez por JL Schönlein en 1839, basándose en la palabra tubérculo, que previamente había sido designada por R Morton en 1689 para referirse a las lesiones características de la enfermedad. Su agente causal, la bacteria Mycobacterium tuberculosis (MTB) fue descrita por R Koch en 1882. Esta bacteria pertenece al complejo M. tuberculosis complex, junto con M. bovis, M. africanum, M. canetti y M. microti. Estas especies son también responsables de la TB humana, pero tienen menor relevancia desde el punto de vista clínico y sanitario. MTB es un bacilo ácido-alcohol resistente, inmóvil y no esporulado, que mide de 0,8 a 4 micras. Tiene un metabolismo aeróbico estricto, con desarrollo óptimo a 35-37ºC, y su crecimiento depende del oxígeno y del pH circulante. Es muy resistente a las condiciones de frío, congelación y desecación. Por el contrario, es muy sensible al calor, la luz solar y la luz ultravioleta. Su multiplicación es muy lenta, dividiéndose cada 16-20 horas, y tarda de 3 a 6 semanas para crecer en medios selectivos. Este lento crecimiento justifica su clínica inespecífica y lenta instauración. Ante circunstancias adversas, puede entrar en estado de latencia, y permanecer en esas condiciones durante años. MTB posee una pared celular rica en lípidos de alto peso molecular, responsable de varias de sus características biológicas, como la dificultad para ser destruido por los macrófagos o la resistencia a la desecación..

Papel de CEBPD en el desarrollo de resistencias del cáncer de próstata al tratamiento hormonal y su posible regulación por AR-V7

El cáncer de próstata (CP) es la segunda causa de muerte por cáncer en hombres en el mundo occidental. Inicialmente, el desarrollo del CP es dependiente de andrógenos, por lo que, el tratamiento convencional consiste en la ablación androgénica. Aunque se consigue la regresión del tumor, en un alto porcentaje de pacientes progresa hacia formas más agresivas de la enfermedad denominadas cáncer de próstata resistente a la castración (CRPC). Entre los mecanismos por los cuales se desarrolla la resistencia se ha descrito el incremento de la variante de splicing AR-V7 del receptor de andrógenos (AR). Basándonos en estudios previos en los que se definió el perfil de metilación en CRPC, se seleccionó CEBPD por estar silenciado por metilación de su promotor en una línea celular de CRPC (LNCaP abl), mientras que sí se expresa en células de cáncer de próstata sensibles a andrógenos (LNCaP). En este trabajo nos planteamos un doble objetivo: determinar el posible papel de AR-V7 en la regulación de CEBPD en las células LNCaP abl e intentar esclarecer el papel de este gen en el desarrollo de la resistencia de los tumores de próstata a la ablación androgénica. Nuestros resultados indican que AR interacciona con el promotor de CEBPD en células LNCaP, mientras que en células LNCaP abl se unen tanto AR como AR-V7. Por otro lado, se observó que el silenciamiento de CEBPD en células LNCaP induce apoptosis y, sorprendentemente, también aumenta la migración e invasión. A la vista de estos resultados podemos concluir: en primer lugar, que AR-V7 podría estar reprimiendo la expresión de CEBPD en células CRPC mediante el reclutamiento de complejos represores; en segundo lugar, que CEBPD podría desempeñar un papel dual impidiendo la apoptosis, así como la migración e invasión en células de cáncer de próstata sensibles a andrógeno

Realizzazione di seminari a distanza mediante l’uso dello strumento blackboard (lavagna virtuale) (wimbaclassroom del webct) per la conoscenza delle applicazioni e dei progressi scientifici delle colture cellulari in ambito lavorativo

La asignatura de Cultivos Celulares impartida en la Licenciatura de Biología de la Universidad de Sevilla, proporciona a los alumnos información teórica y práctica en esta materia. El gran avance tecnológico de los cultivos celulares aconseja complementar la información. Para ello hemos realizado una actividad formativa que ha permitido a profesionales procedentes de otras universidades o empresas, proporcionar de forma directa y sin desplazarse, conocimientos sobre las técnicas más innovadoras en cultivos celulares. Se han realizado dos conferencias a distancia mediante el uso de la herramienta Wimba Classroom. Se evaluó el grado de comprensión de las conferencias por parte de los alumnos mediante las herramientas tarea y examen de WebCT, así como la posible repercusión en la nota final. Los resultados obtenidos mostraron un incremento en el número de aprobados y de presentados a examen en el grupo experimental con respecto al control, así como un aumento de la nota media obtenida (5,92 frente a 4,01). Los alumnos evaluaron distintos aspectos de la actividad mediante encuestas a través de la plataforma, en las cuales se obtuvo un grado de valoración de la misma muy positivo. Los resultados indican que el uso de Wimba Classroom es adecuado para el objetivo propuesto.Cell Cultures is a subject included in the Biologist Degree at Sevilla University, that provides theoretical and practical information in this area. Due to the quick technological development in this field, we consider that is important to contribute complementary information to students who are cursing this subject. By means of the present project, specialists from biotechnological companies, who directly use and work with cell cultures, have provided lectures about different innovative applications in this area. The conferences have been carried out without the physical presence of the speakers by the use of the Wimba Classroom online tool. The level of understanding of the conferences was tested by means of WebCT evaluation tools, and the possible impact in the final califications got by students was analized. The results show that the the group of students that actively participated in the activity got higher final calification than the group who did not participate (5,92 and 4,01 respectively). Students could evaluate different aspects of the activity by answering a WebCT survey online. The results show that Wimba Classroom is adequate for this purpose and that evaluation of the formative activity by students is quite positive.Il corso Colture Cellulari impartito nel corso di Laurea in Biologia dell’Università di Siviglia, fornisce agli alunni informazioni teoriche e pratiche su questa materia. Il grande progresso tecnologico delle colture cellulari suggerisce di ampliare l’offerta formativa. Per questo motivo abbiamo realizzato un’attività formativa che ha permesso a professionisti provenienti da altre Università o imprese, di fornire in forma diretta e senza bisogno di lezioni in presenza, conoscenze sulle tecniche più innovatrici nella coltivazione cellulare. Sono state realizzate due conferenze a distanza mediante l’uso dello strumento Aula Virtuale. È stato valutato il grado di comprensione delle conferenze da parte degli alunni per mezzo dello strumento compito e esame del WEbCT, così come è stata valutata la possibile ripercussione sul voto finale. I risultati ottenuti mostrano un incremento nel numero dei promossi e di coloro i quali si sono presentati all’esame nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo controllo, così come l’aumento del voto medio ottenuto (5,92 su 4,01). Gli alunni hanno valutato diversi aspetti dell’attività mediante questionari forniti dalla piattaforma, nei quali si è ottenuto un livello di valutazione molto positivo della stessa. I risultati indicano che l’uso dell’Aula Virtuale è adeguato all’obiettivo proposto

Estudio de la regulación de la histona metilasa EZH2 por la proteína tirosina fosfatasa SHP-1 en cáncer de próstata

El cáncer de próstata (CP) es uno de los tumores malignos más frecuentes en varones de países desarrollados. La deprivación androgénica es uno de los tratamientos más efectivos para el cáncer de próstata metastásico; sin embargo, con el tiempo, el tumor progresa a una fase independiente de éstos para la que no existe tratamiento. El estudio de los mecanismos moleculares implicados en esta fase de la enfermedad permitirá el desarrollo de nuevas terapias encaminadas a solventar este problema. En este trabajo estudiamos el papel de SHP-1, una tirosina fosfatasa que actúa como regulador negativo de vías de señalización relacionadas con la progresión tumoral, como posible regulador indirecto de EZH2 y su interacción con el receptor de andrógenos (AR) a través de la vía PI3K/AKT para la activación transcripcional de genes diana de este. En primer lugar, se determinará si existe un complejo proteico formado por SHP-1, AKT, EZH2 Y AR mediante ensayos de captura y unión o “pull down” y co-inmunoprecipitación. Posteriormente, el estudio de esta fosfatasa se realizará mediante su silenciamiento por RNA de interferencia con el objetivo de analizar posibles cambios en la actividad de AKT, EZH2 y AR. Además, se realizarán ensayos de proliferación celular con un inhibidor de EZH2 (GSK126) con el fin de determinar si SHP-1 modula su efecto. La existencia de cambios en la actividad de las proteínas o de la efectividad del inhibidor constituyen un paso previo para investigar las consecuencias funcionales de SHP-1 en la progresión del cáncer de próstat

Caracterización de clones estables de SHP-1 en líneas celulares de cáncer de próstata

El cáncer de próstata (CP) es uno de los problemas sanitarios más relevantes de nuestra sociedad actual. A pesar de disponer de diversos tratamientos para abordarla, el avance de la enfermedad hacia un estadio refractario conocido como cáncer de próstata resistente a la castración (CRPC) hace que hoy en día siga teniendo altos índices de mortalidad. Muchos de los mecanismos moleculares involucrados en su desarrollo están relacionados con cambios en el receptor de andrógenos (AR), que gobierna el desarrollo normal y patológico de la próstata. Entre estos mecanismos encontramos cambios en la expresión y función de coreguladores de AR, así como la activación del receptor por vías independientes de andrógenos. En estos mecanismos participan una serie de proteínas, entre las que encontramos un complejo de señalización conformado por AKT-EZH2-AR. La evidencia científica respalda el papel de EZH2 como activador independiente de AR, función promovida al ser fosforilada por AKT. Debido a la función reguladora que la fosfatasa SHP-1 podría tener sobre AKT, hipotetizamos sobre el papel que esta podría tener sobre el complejo y, por tanto, sobre el avance de la enfermedad hacia CRPC. Para estudiarlo, obtuvimos mediante CRISPR/Cas9 clones estables de distintas líneas celulares de CP con el gen de SHP-1 silenciado para así poder determinar si existían o no diferencias en una serie de parámetros celulares. El silenciamiento promovió diversas modificaciones en el modelo sensible a andrógenos que no se observaron en los modelos de CRPC, entre las que encontramos una menor sensibilidad a GSK126, una disminución del gen regulado por AR, FKBP5, y la adquisición de un fenotipo neuroendocrino. Los datos apoyan la hipótesis de que SHP-1 podría ser un posible regulador de este complejo de señalización, aunque futuros estudios son necesarios para determinar con exactitud de qué manera

Genomic and transcriptomic alterations in Leishmania donovani lines experimentally resistant to antileishmanial drugs

Leishmaniasis is a serious medical issue in many countries around the World, but it remains largely neglected in terms of research investment for developing new control and treatment measures. No vaccines exist for human use, and the chemotherapeutic agents currently used are scanty. Furthermore, for some drugs, resistance and treatment failure are increasing to alarming levels. The aim of this work was to identify genomic and trancriptomic alterations associated with experimental resistance against the common drugs used against VL: trivalent antimony (SbIII, S line), amphotericin B (AmB, A line), miltefosine (MIL, M line) and paromomycin (PMM, P line). A total of 1006 differentially expressed transcripts were identified in the S line, 379 in the A line, 146 in the M line, and 129 in the P line. Also, changes in ploidy of chromosomes and amplification/deletion of particular regions were observed in the resistant lines regarding the parental one. A series of genes were identified as possible drivers of the resistance phenotype and were validated in both promastigotes and amastigotes from Leishmania donovani, Leishmania infantum and Leishmania major species. Remarkably, a deletion of the gene LinJ.36.2510 (coding for 24-sterol methyltransferase, SMT) was found to be associated with AmB-resistance in the A line. In the P line, a dramatic overexpression of the transcripts LinJ.27.T1940 and LinJ.27.T1950 that results from a massive amplification of the collinear genes was suggested as one of the mechanisms of PMM resistance. This conclusion was reinforced after transfection experiments in which significant PMM-resistance was generated in WT parasites over-expressing either gene LinJ.27.1940 (coding for a D-lactate dehydrogenase-like protein, D-LDH) or gene LinJ.27.1950 (coding for an aminotransferase of branched-chain amino acids, BCAT). This work allowed to identify new drivers, like SMT, the deletion of which being associated with resistance to AmB, and the tandem D-LDH-BCAT, the amplification of which being related to PMM resistance.This work was supported by grants (to B.A. and J.M.R.) from Proyecto del Ministerio de Economía, Industria y Competitividad (SAF2013-47556-R and SAF2017-86965-R, co-financed with FEDER funds), and from ISCIII, proyecto " RD16/0027/0008″ Red de Enfermedades Tropicales, Subprograma RETICS del Plan Estatal de I + D + I 2013–2016 y cofinanciado FEDER: Una manera de hacer Europa. The CBMSO receives institutional grants from the Fundación Ramón Areces and from the Fundación Banco Santander. Also, this work was supported by the Spanish Grant Proyecto de Excelencia, Junta de Andalucía, Ref. CTS-7282 (to F.G.

Claudin-3 Loss of Expression Is a Prognostic Marker in Castration-Resistant Prostate Cancer

Castration-resistant prostate cancer (CRPC) development is the foremost concern after treatment of patients with high risk with locally advanced or metastatic prostate cancer. Androgen receptor (AR) is the main driver of CRPC development, through its interaction with epigenetic modifier genes, placing epigenetics modifications in the forefront of CRPC development. Comparing the DNA methylation and expression profile of androgen-sensitive and -refractory prostate cancer cells, we describe the epigenetic silencing of claudin-3 (CLDN3) in AR positive cells resistant to androgen deprivation (LNCaP-abl). CLDN3 silencing was associated with DNA methylation, loss of histone acetylation and H3K27 methylation, and was re-expressed by the combined treatment with the epigenetic modulators Aza and SAHA. From a functional point of view, CLDN3 loss was associated with increased cellular invasion. Immunohistochemical analysis showed decreased CLDN3 expression in samples from CRPC patients. Interestingly, CLDN3 expression was significantly decreased in samples from patients with high total Gleason score (>= 8) and locally advanced tumors. Finally, CLDN3 loss of expression was associated with worse disease-free survival and time to clinical progression. In conclusion, our findings strongly indicate that epigenetic silencing of CLDN3 is a common event in CRPC that could be useful as a molecular marker for the prognosis of prostate cancer patients and to discriminate aggressive from indolent prostate tumors