Abstracts

In order to better understand the developmental processes that govern the formation of somatic embryos in oil palm (Elaeis guineensis Jacq.), we investigated the transcription factor genes expressed during embryogenesis in this species. The AP2/EREBP transcription factor family includes the AP2 subgroup, which contains several proteins that play important roles in plant development. We identified and characterized EgAP2-1, which codes for a protein that contains two AP2 domains similar to those of the transcription factor BABYBOOM (BBM) and more generally AINTEGUMENTA-like (AIL) proteins of the AP2 subgroup. In a similar way to related genes from eudicots, ectopic expression of EgAP2-1 in transgenic Arabidopsis plants alters leaf morphology and enhances regeneration capacity. In oil palm, EgAP2-1 transcripts accumulate to the greatest extent in zygotic embryos. This expression pattern was investigated in more detail by in-situ hybridization, revealing that in both zygotic and somatic embryos, EgAP2-1 expression is concentrated in proliferating tissues associated with the early development of leaf primordia, root initials and provascular tissues. (Résumé d'auteur

Etude de la cryoconservation d'apex en vue d'une conservation à long terme de collections de ressources génétiques végétales : compréhension des phénomènes mis en jeu et évaluation de la qualité du matériel régénéré sur le modèle pelargonium

The conservation of the plant genetic resources is a major challenge, biodiversity being a key for the future generation well-being. Being a part of this preservation topic, the main objective of this PhD thesis was to set up a cryopreservation procedure on Pelargonium, a vegetatively propagated ornamental plant. Apex cryopreservation by "droplet-vitrification" was optimised on P. x peltatum ‘Balcon Lilas'. Apices of 28 accessions were successfully cryopreserved with a 40 %average regrowth. The establishment of a cryobank is now possible. However the optimisation of post-cryopreservation survival needed a better knowledge of cryoprotector effects on cells. Studies by microscopy including the RTM (Real Time Microscopy) and the CLSM (Confocal Laser Scanning Microscopy) were realised. They allowed to bring to light, the vitrification solution (PVS2) induced an important and fast shrinkage of cells by acting on cell walls, that the loading solution (LS), besides its role as osmoticum, eased the changes due to PVS2. Studies on in vitro apex culture showed that the regeneration was mostly direct. This result can partially explain that regeneration apices gave true-to-type for both cryopreserved and non cryopreserved plants, except for some chimeral cultivars. Finally, using ELISA tests, we demonstrated that apex cryopreservation could also result in PFBV and PLPV viruses eradication. However immunolocalisations put in evidence cryopreservation allowed only a partial elimination of the two viruses in the apices. As shown by immunolocalisation process the increase of this knowledge should allow a wider use of cryopreservation, giving a complementary possibility so participating in a better management of the conservation plant genetic resources conservation.La conservation des ressources génétiques végétales est un défi majeur, le maintien de la biodiversité étant capital pour répondre aux besoins des générations futures. Ce travail de thèse, s'inscrivant dans cette démarche de conservation, a été réalisé sur Pelargonium, plante ornementale multipliée végétativement. Un procédé de cryoconservation d'apex par « dropletvitrification » a été mis en place avec succès sur P. x peltatum ‘Balcon Lilas'. Avec un taux de régénération moyen de 40 % obtenu sur 28 taxons testés, la constitution d'une cryobanque est maintenant possible. L'optimisation de la survie post-cryoconservation passant par une meilleure connaissance des effets des solutions cryoprotectrices sur les cellules, des études microscopiques faisant appel notamment à la RTM (Real Time Microscopy) et la CLSM (Confocal Laser Scanning Microscopy) ont été pratiquées. Elles ont permis de mettre en évidence, d'une part que la solution de vitrification (PVS2) provoque une contraction importante et rapide des cellules en agissant sur les parois et d'autre part que la solution de charge (LS), outre son rôle d'osmoticum, atténue les altérations dues à PVS2. Les travaux sur la régénération in vitro à partir d'apex ont montré que celle-ci était le plus souvent directe ce qui peut favoriser le maintien de la conformité. Ainsi, une plante obtenue après régénération d'un apex cryoconservé ou non, ne présente pas de modifications phénotypiques sauf chez certains cultivars chimériques. Enfin, des tests ELISA ont montré une augmentation du taux d'assainissement lors d'une régénération après cryoconservation par rapport à une simple culture d'apex pour deux virus (PFBV et PLPV). Cependant les immunolocalisations réalisées ont mis en évidence que les virus étaient toujours présents dans les apex, l'élimination n'étant que partielle. L'augmentation de ces connaissances devrait permettre une utilisation à plus grande échelle de la cryoconservation participant ainsi à une meilleure gestion de la conservation des ressources génétiques par une offre stratégique plus importante

Synthèse et évaluation pharmacologique de naphtoquinones et d'indolequinones à visée antitumorale

Les travaux récents réalisés dans notre laboratoire dans le domaine des anticancéreux nous ont conduit à envisager des pharmacomodulations en série quinonique à structure bicyclique analogues de la démétylasterriquinone L783,281, petite molécule naturelle, découverte après screening, pour ses propriétés anticancéreuses et antidiabétiques. L accès à ces structures a été envisagé à partir des isochromane-1,4-diones via des orthoacétylbenzoates de méthyle en série naphtoquinonique et à partir de dérivés indoliques, produits provenant de la cyclisation réductrice des 2, -dinitrostyrènes en série indolequinonique. Les composés synthétisés ont été évalués sur l inhibition de la protéine kinase cytosolique Src.Recent works in our laboratory in the field of anticancer agents led us to consider pharmacomodulations in quinoid series with bicyclic structure analogues of demetylasterriquinone L-783,281, small natural molecule, discovered by screening, as an anticancer and antidiabetic agent. The access to these structures was envisaged from isochromane-1,4-diones via methyl orthoacetylbenzoates in naphthoquinonic series and from indolic derivatives, products of reductive cyclization of 2, -dinitrostyrenes in indolequinonic series. Our synthesized compounds were evaluated on Src kinase inhibition.NANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

Etude de la cryoconservation d'apex en vue d'une conservation à long terme de collections de ressources génétiques végétales (compréhension des phénomènes mis en jeu et évaluation de la qualité du matériel régénéré sur le modèle pelargonium)

La conservation des ressources génétiques végétales est un défi majeur, le maintien de la biodiversité étant capital pour répondre aux besoins des générations futures. Ce travail de thèse, s'inscrivant dans cette démarche de conservation, a été réalisé sur Pelargonium, plante ornementale multipliée végétativement. Un procédé de cryoconservation d'apex par dropletvitrification a été mis en place avec succès sur P. x peltatum Balcon Lilas'. Avec un taux de régénération moyen de 40 % obtenu sur 28 taxons testés, la constitution d'une cryobanque est maintenant possible. L'optimisation de la survie post-cryoconservation passant par une meilleure connaissance des effets des solutions cryoprotectrices sur les cellules, des études microscopiques faisant appel notamment à la RTM (Real Time Microscopy) et la CLSM (Confocal Laser Scanning Microscopy) ont été pratiquées. Elles ont permis de mettre en évidence, d'une part que la solution de vitrification (PVS2) provoque une contraction importante et rapide des cellules en agissant sur les parois et d'autre part que la solution de charge (LS), outre son rôle d'osmoticum, atténue les altérations dues à PVS2. Les travaux sur la régénération in vitro à partir d'apex ont montré que celle-ci était le plus souvent directe ce qui peut favoriser le maintien de la conformité. Ainsi, une plante obtenue après régénération d'un apex cryoconservé ou non, ne présente pas de modifications phénotypiques sauf chez certains cultivars chimériques. Enfin, des tests ELISA ont montré une augmentation du taux d'assainissement lors d'une régénération après cryoconservation par rapport à une simple culture d'apex pour deux virus (PFBV et PLPV). Cependant les immunolocalisations réalisées ont mis en évidence que les virus étaient toujours présents dans les apex, l'élimination n'étant que partielle. L'augmentation de ces connaissances devrait permettre une utilisation à plus grande échelle de la cryoconservation participant ainsi à une meilleure gestion de la conservation des ressources génétiques par une offre stratégique plus importante.The conservation of the plant genetic resources is a major challenge, biodiversity being a key for the future generation well-being. Being a part of this preservation topic, the main objective of this PhD thesis was to set up a cryopreservation procedure on Pelargonium, a vegetatively propagated ornamental plant. Apex cryopreservation by "droplet-vitrification" was optimised on P. x peltatum Balcon Lilas'. Apices of 28 accessions were successfully cryopreserved with a 40 %average regrowth. The establishment of a cryobank is now possible. However the optimisation of post-cryopreservation survival needed a better knowledge of cryoprotector effects on cells. Studies by microscopy including the RTM (Real Time Microscopy) and the CLSM (Confocal Laser Scanning Microscopy) were realised. They allowed to bring to light, the vitrification solution (PVS2) induced an important and fast shrinkage of cells by acting on cell walls, that the loading solution (LS), besides its role as osmoticum, eased the changes due to PVS2. Studies on in vitro apex culture showed that the regeneration was mostly direct. This result can partially explain that regeneration apices gave true-to-type for both cryopreserved and non cryopreserved plants, except for some chimeral cultivars. Finally, using ELISA tests, we demonstrated that apex cryopreservation could also result in PFBV and PLPV viruses eradication. However immunolocalisations put in evidence cryopreservation allowed only a partial elimination of the two viruses in the apices. As shown by immunolocalisation process the increase of this knowledge should allow a wider use of cryopreservation, giving a complementary possibility so participating in a better management of the conservation plant genetic resources conservation.ANGERS-BU Lettres et Sciences (490072106) / SudocSudocFranceF

Cryopreservation at the 'Institut National d'Horticulture' of Angers: past, present and future

International audienceIn order to guarantee safe, long-term conservation of the National Institute of Horticulture Pelargonium collection, apex cryopreservation studies have been undertaken since 1999. The first results were obtained on apices of P. x peltatum 'Balcon Lilas', using an encapsulation-dehydration process. Various steps of this process (preculture, dehydration, rewarming) were studied in order to simplify and optimize this protocol. A newly determined protocol was tested on 20 genotypes representative of the diversity of our collection. Apex survival was obtained for 19 of them, and variability in cryopreservation tolerance was observed with survival rates between 28% and 84%. Plants for various genotypes were obtained after cryopreservation however some difficulties slowed down the establishment of an efficient and reliable cryogenic protocol. In 2005, studies were undertaken in order to adapt the droplet-vitrification procedure to Pelargonium. A reproducible process was obtained optimizing the duration in the loading solution and in plant vitrification solution 2. This success permitted us to continue studies on the quality of the regenerated plants with regard to their conformity and sanitary statu

Cryopreservation of Pelargonium apices by droplet-vitrification

International audienceThe droplet-vitrification method was adapted to Pelargonium apices by optimizing the duration of the loading solution (LS) as well as the plant vitrification solution 2 (PVS2). The excised apices were dehydrated in two steps (20 min in LS and 15 min in PVS2) and then immersed directly in liquid nitrogen (LN). After thawing and unloading in the recovery solution at room temperature for 15 min, apices were plated onto semi-solid Murashige and Skoog medium. This simple protocol without any pretreatment was successfully applied to eight cultivars with a survival level ranging between 55.6 - 96.2 % and a regrowth level between 9.1% - 70.6%. These results prove the feasibility of the long-term storage of Pelargonium germplasm through cryopreservatio

Evaluation of the catalytic reduction of nitrate for the determination of dissolved organic nitrogen in natural waters

International audienc

Methods for in vitro propagation of Pelargonium x hortorum and others : from meristems to protoplasts

Serie : Methods in Molecular Biology / volume 589 Mention d'édition : 1st editionInternational audienceGeraniums (Pelargonium spp.) are among the most popular bedding and pot plants (25 % of the French domestic market). On one hand, as vegetatively propagated lants, Pelargonium are submitted to pathogen pressure. On the other hand, innovation via interspecific hybridisation faces some difficulties. In this chapter, the two first protocols (from seeds and meristems) explain how in vitro plants free of virus could be obtained. The development of this technique is the long-term preservation of genetic resources via meristem cryopreservation. The third protocol describes propagation of Pelargonium with limited risks of variation. This technique also allows the constitution and the maintenance of a plant-stock from which explants can be taken for other studies. The two last protocols describe plant regenerations from leaf discs and mesophyll protoplasts, used for gene transfer and somatic hybridisation. These protocols were established mainly with Pelargonium x hortorum cultivars, but we propose possible solutions for the other species: P. x peltatum, P. x domesticum, P. capitatum and P. graveolens