Efecto del plasma seminal en la conservación de semen en especies de uso zootécnico

El plasma seminal (PS) actúa como un medio de transporte para los espermatozoides a través del tracto reproductivo de la hembra y del macho, regula la osmolaridad del eyaculado a través de los componentes inorgánicos, es fuente de energía para los espermatozoides, brinda protección buffer contra los cambios de pH, protege a los espermatozoides de los efectos deletéreos de las especies reactivas del oxígeno a través de sus enzimas antioxidantes y regula la respuesta inmune del tracto reproductivo de la hembra. Las proteínas del PS han sido asociadas a eventos relacionados con la fertilización como la maduración espermática, la capacitación espermática, la interacción con el oviducto e incluso están implicadas en la interacción con el ovocito. En muchas especies, el PS es rutinariamente diluido o removido durante el proceso de criopreservación de semen; esto puede tener efectos positivos y/o negativos sobre la función espermática y la fertilidad. También el PS ha sido agregado luego del proceso de criopreservación. Los efectos que el PS tiene sobre el espermatozoide criopreservado varían entre especies, entre individuos de una misma especie y entre eyaculados de un mismo individuo. A pesar de un notable avance en el conocimiento de las funciones del PS, todavía existen controversias acerca del preciso rol del PS en la función espermática, en la fertilidad del macho y en el efecto que ejerce éste sobre los espermatozoides criopreservados.Seminal plasma (PS) acts as a transport medium for sperm through the reproductive tract of the female and male, regulates the osmolarity of the ejaculate through the inorganic components, is a source of energy for sperm, provides buffer protection against pH changes, protects sperm from the deleterious effects of reactive oxygen species through their antioxidant enzymes and regulates the female reproductive tract's immune response. PS proteins have been associated with fertilization events such as sperm maturation, sperm capacitation, interaction with the oviduct and are even involved in the interaction with the oocyte. In many species, PS is routinely diluted or removed during the semen cryopreservation process; this can have positive and/or negative effects on sperm function and fertility. The PS has also been added after the cryopreservation process. The effects that PS has on cryopreserved spermatozoa vary between species, between individuals of the same species and between ejaculates of the same individual. Despite a notable advance in the knowledge of the functions of PS, there is still controversy about the precise role of SP in sperm function, male fertility and its effect on cryopreserved spermatozoa.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Presence and distribution of steroid receptors and antigen of cell proliferation in immune cells in endometrium of mare

Alpha estrogen receptors, progesterone receptors, and cell proliferation antigen were studied in\nendometrial immune cells of mares free of endometritis. Endometrial biopsies and blood samples\nwere taken in healthy mares in four moments: at the start of the follicular phase , at 24 hours after\nestrus detection , at 24 hours post-ovulation and on day 7 post- ovulation. Biopsies were stained\nwith hematoxylin-eosin or subjected to immunohistochemistry to determine the presence of RE?,\nRP or PCNA in mononuclear or polymorphonuclear cells. Statistically significant changes were\ndetected at day 7 post-ovulation, compared to other moments. High levels of plasmatic progesterone\nwere associated to a decrease in the total amount of immune cells and a reduction in the number\nof polymorphonuclear for estrogen receptor alpha. It is concluded that high plasma progesterone\nlevels at 7 post-ovulation negatively modulated the number of immune cells and the number of\npolymorphonuclear immunelabeled for estrogen receptor alphaFil: Acuña, S. Universidad de la República. Facultad de Veterinaria. Departamento de Biología Molecular y Celular. Montevideo, UruguayFil: Fumuso, E. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Laboratorio de Clínica y Reproducción Equina. Tandil, ArgentinaSe estudió la distribución endometrial de células inmunes y la presencia en las mismas de receptores de\nestrógenos alfa, de progesterona y de antígeno de proliferación celular en yeguas sin antecedentes de\nendometritis. Se tomaron muestras de sangre y biopsias endometriales en yeguas con endometrio sano\nal inicio de la fase folicular, a las 24 h después, a las 24 h post-ovulación y al día 7 post-ovulación. Las\nbiopsias fueron teñidas con hematoxilina-eosina o sometidas a inmunohistoquímica para determinar\nla presencia de receptores de estrógeno ?, progesterona o antígeno nuclear de proliferación celular en\ncélulas polimorfonucleares o mononucleares. Se detectaron los siguientes cambios estadísticamente\nsignificativos al día 7 pos-ovulación, comparado con los otros días: aumento de la concentración de\nprogesterona plasmática, disminución de la cantidad total de células inmunes y una reducción del\nnúmero de polimorfonucleares inmunomarcados para receptores de estrógenos alfa. Se concluye\nasí que los altos niveles de progesterona plasmática al día 7 pos-ovulación modularon en forma\nnegativa la cantidad de células inmunes y la cantidad de polimorfonucleares inmunomarcados para\nreceptores de estrógeno alfa

Presencia y distribución de receptores esteroides y antígeno de proliferación celular en células del sistema inmune del endometrio equino

Se estudió la distribución endometrial de células inmunes y la presencia en las mismas de receptores de estrógenos alfa, de progesterona y de antígeno de proliferación celular en yeguas sin antecedentes de endometritis. Se tomaron muestras de sangre y biopsias endometriales en yeguas con endometrio sano al inicio de la fase folicular, a las 24 h después, a las 24 h post-ovulación y al día 7 post-ovulación. Las biopsias fueron teñidas con hematoxilina-eosina o sometidas a inmunohistoquímica para determinar la presencia de receptores de estrógeno α, progesterona o antígeno nuclear de proliferación celular en células polimorfonucleares o mononucleares. Se detectaron los siguientes cambios estadísticamente significativos al día 7 pos-ovulación, comparado con los otros días: aumento de la concentración de progesterona plasmática, disminución de la cantidad total de células inmunes y una reducción del número de polimorfonucleares inmunomarcados para receptores de estrógenos alfa. Se concluye así que los altos niveles de progesterona plasmática al día 7 pos-ovulación modularon en forma negativa la cantidad de células inmunes y la cantidad de polimorfonucleares inmunomarcados para receptores de estrógeno alfa.Alpha estrogen receptors, progesterone receptors, and cell proliferation antigen were studied in endometrial immune cells of mares free of endometritis. Endometrial biopsies and blood samples were taken in healthy mares in four moments: at the start of the follicular phase, at 24 hours after estrus detection, at 24 hours post-ovulation and on day 7 post- ovulation. Biopsies were stained with hematoxylin-eosin or subjected to immunohistochemistry to determine the presence of REα, RP or PCNA in mononuclear or polymorphonuclear cells. Statistically significant changes were detected at day 7 post-ovulation, compared to other moments. High levels of plasmatic progesterone were associated to a decrease in the total amount of immune cells and a reduction in the number of polymorphonuclear for estrogen receptor alpha. It is concluded that high plasma progesterone levels at 7 post-ovulation negatively modulated the number of immune cells and the number of polymorphonuclear immunelabeled for estrogen receptor alpha

Hypoosmotic Test Combined with Coomassie Blue Staining in Llama Sperm

La integridad de las membranas plasmática y acrosomal es de gran importancia para determinar la capacidad fertilizante de los espermatozoides. Los objetivos de este trabajo fueron: 1) evaluar la funcionalidad de la membrana plasmática a través del tiempo mediante el test hipoosmótico (HOS) y 2) combinar la técnica de HOS con la tinción de Coomassie Blue (CB) para evaluar simultáneamente la funcionalidad de membrana y la integridad acrosomal en espermatozoides de semen fresco de llama. Se obtuvieron 12 eyaculados de 6 machos mediante electroeyaculación bajo anestesia general. Se realizó el test de endósmosis con y sin fijación en paraformadehído y evaluando a diferentes tiempos de conservación (0 hs sin fijar y 0, 2, 4 y 24 hs fijado). Una alícuota de la muestra fijada se procesó y se tiñó con CB. No se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el porcentaje de espermatozoides con membranas funcionales al comparar la muestra no fijada y las muestras preservadas durante diferentes tiempos en la solución de fijación. Tampoco se observaron diferencias significativas (p>0,05) en el porcentaje de endósmosis en las muestras en las que sólo se realizó HOS y en las que se realizó HOS en combinación con CB. Es posible diferir el momento de la evaluación de la funcionalidad de membrana de los espermatozoides de llama mediante la técnica de HOS de la colecta del semen. La técnica dual (HOS + CB) permite evaluar en forma simultánea la funcionalidad de las membranas e integridad acrosomal en espermatozoides de semen fresco de llama, facilitando el trabajo a campo.To stablish sperm fertilization capacity membrane integrity and functionality are important characteristics to determine. The objectives of the present study were: 1) to evaluate the functionality of the plasma membrane over time by the hypoosmotic test (HOS) and 2) combined the HOS test with Coomassie Blue (CB) staining to simultaneously evaluate the functionality of membrane and acrosomal integrity in raw llama sperm. A total of 12 ejaculates from 6 adult llama males were collected using electroejaculation under general anesthesia. Hypoosmotic swelling test was performed with and without fixation in paraformaldehyde and the samples were evaluated over time (0 h without fixation and 0; 2; 4; and 24 h when fixed). To perform the CB stain one aliquot of the fixed samples was used. No significant differences (p>0.05) were observed in the percentage of sperm with membrane function when comparing fixed samples analyzed over time versus the samples not fixed. Also, no statistical differences (p>0.05) were observed on membrane functionality between the two protocols used; HOS test versus HOS combined with the CB stain. It is possible to differ the moment of the evaluation of the membrane functionality of llama spermatozoa using the HOS technique from the semen collection. The use of the dual technique (HOS + CB) allow the evaluation of sperm membrane function and acrosome status in raw llama semen with only one technique that can be applied on the field.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Pigretti, Carla. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Bertuzzi, Mariana Lucía. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Enrofloxacin-based therapeutic strategy for the prevention of endometritis in susceptible mares

Enrofloxacin (EFX) is often used empirically to prevent uterine infections in mares in order to improve efficiency on Commercial Embryo Transfer Farms. This study investigated the uterine distribution of EFX and its metabolite ciprofloxacin (CFX) in mares and assessed the minimal inhibitory concentrations (MIC) of EFX against various common pathogens as a basis for establishing a rational dosing schedule. Plasma and uterine pharmacokinetic (PK) studies were performed in two groups (n = 5) of healthy mares following intravenous (i.v.) administration of EFX at either 2.5 and at 5 mg/kg bodyweight. Plasma and endometrial tissue samples, taken before for up to 48 h after treatment were analysed by Reverse Phase HPLC. MIC values for wild strains of Gram-negative (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa) and Gram-positive bacteria (β-haemolytic streptococci) ranged from 0.25-2 and 1.5-3.0 μg/mL respectively. In terms of tissue distribution, the sum of the endometrial concentrations of the parent drug (EFX) and its active metabolite (CFX) (in terms of AUC), exceeded those in plasma by 249% and 941% following administration of EFX at 2.5 and 5 mg/kg respectively. After i.v. treatment with EFX at 5 mg/kg, endometrial concentrations of EFX and CFX above the MIC value were detected for 36-48 and 22-43 h posttreatment for Gram-negative and -positive isolates respectively. Concentrations above MIC were maintained for much shorter periods at the lower (2.5 mg/kg) treatment dose. Based on these results, a conventional dose (5 mg/kg) of EFX given prebreeding followed by two further doses at 36-48 h postbreeding are proposed as a rational strategy for using of EFX as a preventative therapy against a variety of common bacterial strains associated with equine endometritis.Fil: González, C. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Fisiopatología. Laboratorio de Farmacología; ArgentinaFil: Moreno, L.. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Fisiopatología. Laboratorio de Farmacología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, E..Fil: García, J..Fil: Rivulgo, M..Fil: Confalonieri, A..Fil: Sparo, M..Fil: Sánchez Bruni, S.

Effect of seminal plasma on the sperm motility patterns and their relationship to the cryopreservation of llama semen

La pregunta que nos hacemos todos los que trabajamos en camélidos sudamericanos (CSA) es “¿Porqué si se insemina con la misma cantidad de espermatozoides motiles/vivos no se preña con semen criopreservado y si con el semen fresco? ”. La criopreservación de gametos permite conservar el material genético de reproductores de alta calidad genética por tiempo ilimitado y además permite transportar este material a lugares distantes de donde se encuentre el reproductor. La criopreservación de semen de camélidos sudamericanos (CSA) no ha tenido el mismo éxito que se ha observado en la especie bovina. Tanto en la llama como en la alpaca, aún se insemine con semen criopreservado el mismo número de espermatozoides vivos y móviles que con semen fresco, se obtienen muy bajos porcentajes de preñez (0 al 26%) (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Huanca et al., 2007; Giuliano et al., 2012a). Como consecuencia de esta situación, no hay campañas masivas de inseminación artificial (IA) con semen criopreservado. Diversos protocolos se han desarrollado con el fin de mejorar los resultados post-descongelado. Con respecto a los crioprotectores penetrantes, el glicerol al 7% (equilibrado a 5 °C) ha sido prácticamente el único crioprotector empleado (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Santiani et al., 2005; Morton et al., 2010). En menor medida se ha probado etilenglicol en alpacas (Santiani et al., 2005; 2013). En nuestro laboratorio, determinamos que el equilibramiento a temperatura ambiente y el uso de dimetilformamida al 7% como crioprotector penetrante, conservó la movilidad, viabilidad e integridad funcional de la membrana plasmática espermática y a su vez conservó la integridad y condensación de la cromatina de los espermatozoides de llama (Carretero et al., 2014). En el mismo trabajo, utilizando glicerol al 7%, observamos que un 87- 100% de los espermatozoides tenían el ADN fragmentado. Hasta la actualidad, la mayoría de los estudios realizados sobre criopreservación de semen de CSA se han centrado en determinar los efectos de diferentes crioprotectores y concentraciones de los mismos, temperaturas de equilibramiento y curvas de congelamiento sobre la viabilidad y la movilidad espermática.Everyone who work with camelids ask themselves “Why the pregnancy rate is higher using fresh semen versus frozen semen?”, This results are obtain even when the same amount of motile and viable spermatozoa are use in the artificial insemination. Gamete cryopreservation preserves the genetic material of males with superior genetic quality for unlimited time and also it allows the transport of this material to distant places where the males are located. Cryopreservation of South American Camelids (SAC) semen, didn’t had the same success that has been observed in cattle. Low pregnancy rates are obtain in llamas and alpacas when they are inseminated with frozen thawed spermatozoa (0 to 26%), even when the same amount of live and motile spermatozoa are inseminated compared to fresh semen used (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Huanca et al., 2007; Giuliano et al., 2012a). Because of these results no massive campaigns of artificial insemination (AI) with frozen/thawed semen are performed. Several protocols have been developed in order to improve outcomes, different cryoprotectants like glycerol 7% had been tested and is [practically the most used in cryopreserved semen (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Santiani et al., 2005; Morton et al., 2010). A small use has been giving to ethylene glycol but is been tested in alpaca semen (Santiani et al., 2005; 2013). In our laboratory, we determine that the equilibration at room temperature using dimethylformamide (7%) as a penetrating cryoprotectant can preserve motility, viability and membrane functional integrity of llama spermatozoa (Carretero et al., 2014). In this same work, we found 87- 100% of sperm with fragmented DNA using glycerol 7% as cryoprotectant. To the present, most studies on cryopreservation of camelids semen have focused on determining the effects of different cryoprotectants and concentrations, temperature equilibration and freezing curves on the viability and motility sperm.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Comparison of washing methods and smear conservation periods for llama sperm acrosome assessment using the Coomassie blue stain

El objetivo de este trabajo fue comparar métodos de lavado y conservación de frotis para evaluar el acrosoma en espermatozoides de llama mediante la tinción con Coomassie Blue (CB), con el propósito de facilitar la técnica e independizar los momentos de la extracción de semen de la evaluación de los acrosomas espermáticos. Se procesaron 12 eyaculados, se probaron dos tipos de lavado de los frotis fijados (con PBS o solución fisiológica, SF) y se evaluaron diferentes temperaturas (5º C y temperatura ambiente) y tiempos (0, 1 y 7 días) de conservación. Se evaluaron los siguientes frotis (cada uno lavado con PBS o con SF): 1) fijados, teñidos y evaluados el mismo día de la extracción; 2) fijados, teñidos y conservados 24 hs a temperatura ambiente y luego evaluados; 3) fijados, conservados a 4º C durante 1 día y luego teñidos y evaluados; 4) fijados, conservados a 4º C durante 7 días y luego teñidos y evaluados. Se evaluaron un total de 8 frotis por eyaculado. No se observaron diferencias significativas en el porcentaje de acrosomas presentes evaluado por CB entre las dos metodologías de lavado de los frotis fijados, ni entre las diferentes temperaturas y los diferentes tiempos de conservación de los frotis. Conclusión: es posible utilizar solución fisiológica para lavar los frotis fijados facilitando la técnica de CB para evaluar la presencia de los acrosomas en espermatozoides de llama. Además, se logró independizar los momentos de la extracción de semen de la evaluación de los acrosomas espermáticos.The objective of this study was to compare washing methods and smear conservation periods for llama sperm acrosome assessment using the Coomassie Blue stain, with the aim of facilitating the technique and to allow the moment of sperm acrosome evaluation become independent of the moment of semen collection. Twelve ejaculates were processed; two types of washing of the smears (with PBS or with physiologic solution, PS) and different temperatures (5 ºC and room temperature) and periods of conservation (0, 1 and 7 days) were assessed. The following smears were evaluated: 1) fixed, stained and evaluated the same day of collection; 2) fixed, stained and conserved for 24 hours at room temperature and then evaluated; 3) fixed, conserved at 4º C for 1 day and then stained and evaluated and 4) fixed, conserved at 4º C for 7 days and then stained and evaluated. A total of 8 smears per ejaculate were evaluated. No significant differences were observed in the percentages of acrosomes present, evaluated by CB, between both types of washing of the fixed smears, nor between the different temperatures and conservation periods of the fixed smears. Conclusions: it is possible to use physiologic solution to wash the fixed smears, thus facilitating the Coomassie Blue technique used to evaluate the presence of llama sperm acrosomes. In addition, it was possible to separate the moment of sperm acrosome evaluation from the semen collection.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gimenez, M. L.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Neild, Debora Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Chaves, M. G.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Cs.veterinarias. Area de Teriogenologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Aspects on anatomical parameters of the ovaries coypu (Myocastor coypus bonariensis) at sexual maturity

The aim of the present study was to determine anatomical parameters of ovaries of coypu in the\nsexual maturity throughout in situ and post extraction analysis. Thirty two virgin and sexually mature\nfemales aged between 6 and 9 months (mean 7 ± 0.84 months) and weighted 4.795 ± 399.6 gr\nwere used. Ovaries were degreased and weighed after their in situ identification with the anatomical\nrelations. The shape and the superficial aspect were registered and their cephalocaudal, dorsoventral\nand lateromedial diameters were recorded. Ovaries volume were determined considering their\ndiameters. Ovaries were located in the sublumbar area, showed ovoidal shape and creamy white\ncolour. The ovarian surface was lobed or with convolutions and protrusions. The average weight\nof the ovaries was 0.12 ± 0.04 g and the average volume was 561.99 ± 144.32 mm3\n. No statistical\ndifferences were detected between the right and left ovary of the same animal. The ovaries were\nsupported by the distal mesovarium. Each ovary was partially surrounded by the oviductal fimbriae\nand by an open or incomplete ovarian bursa which was limited by the distal mesovarium and the\nmesosalpinx. The ovarian bursa closed the cefhalic half of each ovary, showing a large communication\nwith the peritoneal cavity.Fil: Felipe A.E. Universidad del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Ciencias Morfológicas; ArgentinaFil: Fumuso E. Universidad del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Fisiopatología de la Reproducción; ArgentinaFil: Fumuso E. Universidad del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Lombardo D. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Área de Histología y Embriología; ArgentinaEn este trabajo se determinaron los parámetros anatómicos de los ovarios del coipo en la madurez\nsexual mediante su análisis in situ y postextracción. Se trabajó con 36 hembras vírgenes y sexualmente\nmaduras, con edades comprendidas entre los 6 y los 9 meses (media de 7 ± 0.84 meses) y peso\nde 4.795 ± 399.6 gr. Se identificaron las relaciones anatómicas in-situ. Se registraron su forma y\naspecto superficial, se determinaron sus diámetros céfalo-caudal, dorso-ventral y látero-medial y\nse calculó su volumen. Los ovarios, de forma ovoidal y color cremoso blanquecino, se ubicaron\nen el área sublumbar. La superficie ovárica fue ligeramente lobulada o con protrusiones. El peso\nmedio de los ovarios fue de 0.12 ± 0.04 g y el volumen medio fue de 561.99 ± 144.32 mm3\n, no\nobservándose diferencias significativas en esas variables entre los ovarios derecho e izquierdo de un\nmismo animal. Los ovarios se observaron sostenidos por el mesovario distal y rodeados parcialmente\npor las fimbrias oviductales y una bolsa ovárica abierta o incompleta. La misma estuvo delimitada\npor el mesovario distal y el mesosalpinx y encerró la mitad cefálica de cada ovario, presentando una\namplia comunicación con la cavidad peritoneal

Factores relacionados con yeguas receptoras que afectan la eficiencia en la transferencia embrionaria

La declinación de la fertilidad de la yegua ocurre a partir de los 12 a 15 años. La Argentina, junto a Brasil y Estados Unidos, es uno de los 3 países que mas embriones produce por transferencia embrionaria (TE). La selección y el manejo de la yegua receptora es un factor importante que afecta el éxito de los programas de TE. La utilización de yeguas jóvenes como receptoras aseguraría la fertilidad necesaria para recibir el embrión y llevar adelante la gestación. El Laboratorio de Clínica y Reproducción equina de la Facultad de Cs. Veterinarias de la UNICEN fue consultado a finales de la temporada reproductiva por un establecimiento en el cual 23 de las 32 yeguas receptoras (YR), entre 3 y 8 años de edad, permanecieron vacías luego de las TEs. El objetivo de este trabajo fue poner en evidencia los factores más frecuentes que impactaron sobre la fertilidad de YR jóvenes en un programa de TE. Para esto, se realizó un análisis retrospectivo, en el cual se recabaron datos de reseña y anamnesis, datos particulares de cada animal y se evaluaron las planillas utilizadas en el establecimiento durante la temporada de servicios. Se llevó a cabo un análisis general, en el cual se realizó un examen físico, evaluación de la condición corporal (CC) de 1 a 4, y presencia de lesiones o patologías. Luego, se realizó un análisis particular, en el cual se evaluó la conformación vulvar (inclinación, ubicación del piso de la pelvis y cierre), seguido de palpación transrectal y transvaginal, y ecografía. Se registraron los datos del estado del útero y los ovarios, así como también cualquier hallazgo considerado de relevancia. También se tomaron muestras de biopsia endometrial (clasificadas según la escala predictiva de Kenney & Doig), citología y cultivo bacteriano. La condición corporal fue óptima (CC=3) en el 60,9%, mientras que 26,1% se encontraban delgadas (CC=2) y 13% obesas (CC=4). Siete yeguas (30,4%) presentaban lesiones de distinta gravedad, afectando al sistema músculo esquelético, y probablemente provocando dolor. Entre las alteraciones más frecuentemente halladas, se encontraron artritis y artrosis involucrando diversas articulaciones, deformaciones angulares y subluxación sacroilíaca. Las planillas permitieron determinar que los ciclos habían sido regulares. La conformación vulvar varió, entre mala (4 YR; 17,4%), regular (4 YR; 17,4%), buena (10 YR; 43,5%) y muy buena (5 YR; 21,7%). En la palpación transrectal, 2 yeguas presentaron cervix tortuoso y 1 hipoplasia uterina, mientras que a la ecografía 10 de ellas presentaron cierto grado de pneumoútero. En 4 de las yeguas (17,4%) se obtuvo crecimiento bacteriano tras el cultivo de las muestras tomadas, compatibles con Salmonella spp., Staphylococcus y Streptococcus zooepidemicus. A la histopatología, el 40% las biopsias endometriales fueron clasificadas como grado I y el 60% presentaba alteraciones compatibles con la categoría IIA. Dos yeguas de 3 años de edad presentaron baja densidad glandular. Del total de las yeguas, 6 (26,1 %) mostraron una citología positiva de distinta intensidad, desde leve a severa. Tres de ellas presentaron concomitantemente infección bacteriana, mientras que en las 3 restantes la presencia de PMN se debió probablemente a la irritación, conformación vulvar regular y/o presencia de pneumoútero. La sincronización donante-receptora varió notablemente entre las distintas yeguas y, dentro de una misma yegua, en las sucesivas transferencias. La misma fue desde -4 (la receptora ovuló 4 días antes que la donante) a +1 (la receptora ovuló 1 día después que la donante). En cuanto al estado de los embriones, todos aquellos recuperados fueron transferidos, independientemente de su calidad. Este estudio permitió confirmar que varios de los requisitos que una yegua receptora debe cumplir no estaban presentes en los animales involucrados, situación que de algún modo podría corregirse, y así probablemente obtener mejores resultados reproductivos.Fil: Cantatore, Sofia Ernestina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Bruno, Santiago. No especifíca;Fil: Brust, Alina. No especifíca;Fil: Fumuso, Elida Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaV Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción AnimalCiudad Autónoma de Buenos AiresArgentinaInstituto de Investigación y Tecnología en Reproducción AnimalUniversidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinaria

Air-drying llama sperm affects DNA integrity

The objective of this study was to evaluate the effects of air-drying preservation on llama sperm DNA. Semen collections were carried out using electroejaculation under general anesthesia. A total of 16 ejaculates were processed from 4 males (n = 4, r = 4). Each sample was diluted 4:1 in a collagenase solution in TALP media, then incubated and centrifuged at 800 g for 8 min. The pellet was re-suspended to a concentration of 20 million sperm/ml in TALP. Then the samples were placed onto sterile slides forming lines and were left to dry under laminar flow for 15 min. After this, the slides were placed into Falcon centrifuge tubes and kept at 5°C. Sperm characteristics (motility, membrane function, viability and morphology) were evaluated in raw semen and in the air-dried samples kept at 5°C for 30 min. DNA evaluation (integrity and degree of chromatin condensation) was carried out in raw semen and in the air-dried samples after 30 min, 7, 14, 21, 30, and 60 days after preservation. To compare raw semen to the air-dried samples, a Wilcoxon test was used for all sperm characteristics except for DNA, where a paired Student t-test was applied. A split plot design was used to compare chromatin condensation between the different periods of preservation and a Kruskal Wallis test was used to compare DNA integrity. Motility, membrane function, viability and sperm with intact DNA decreased in the air-dried samples (p 0.05). No significant differences were observed in the percentage of sperm with condensed chromatin between the different periods of preservation (p > 0.05). On the other hand, a significant decrease in the percentage of sperm with intact DNA was observed as from day 7 of preservation (p < 0.05). In conclusion the air-drying process has a negative effect on llama sperm DNA, hence the media used will need to be improved to protect DNA and be able to implement this technique in this species.Fil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana Carla. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Neild, Deborah Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin