Biotechnological potential of Phospholipase D for Loxosceles antivenom development

Loxoscelism is one of the most important forms of araneism in South America. The Health Authorities from countries with the highest incidence and longer history in registering loxoscelism cases indicate that specific antivenom should be administered during the first hours after the accident, especially in the presence or at risk of the most severe clinical outcome. Current antivenoms are based on immunoglobulins or their fragments, obtained from plasma of hyperimmunized horses. Antivenom has been produced using the same traditional techniques for more than 120 years. Although the whole composition of the spider venom remains unknown, the discovery and biotechnological production of the phospholipase D enzymes represented a milestone for the knowledge of the physiopathology of envenomation and for the introduction of new innovative tools in antivenom production. The fact that this protein is a principal toxin of the venom opens the possibility of replacing the use of whole venom as an immunogen, an attractive alternative considering the laborious techniques and low yields associated with venom extraction. This challenge warrants technological innovation to facilitate production and obtain more effective antidotes. In this review, we compile the reported studies, examining the advances in the expression and application of phospholipase D as a new immunogen and how the new biotechnological tools have introduced some degree of innovation in this field.Fil: Fingermann, Matias. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: de Roodt, Adolfo Rafael. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; ArgentinaFil: Miranda, Maria Victoria. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentin

Antivenenos ofídicos: comparación del desempeño de dos métodos de obtención

El envenenamiento por serpientes venenosas es frecuente en algunas zonas de Argentina, particularmente en las provincias del noreste y noroeste. Según datos del Programa Nacional de Ofidismo, el número de mordeduras es de alrededor de 1.200 anuales; son producidas casi totalmente por víboras del género Bothrops (yarará), en mucho menor número por Crotalus (cascabel) y en una cantidad todavía mucho más escasa por serpientes Micrurus (coral).Fil: Ávila, Lucía. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: de Marco, María Belén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Fingermann, Matias. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Temprano, Guillermo Carlos. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Iácono, Rubén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Dokmetjian, José Christian. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Cascone, Osvaldo. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentin

Fully automated screening of a combinatorial library to avoid false positives: application to tetanus toxoid ligand identification

Peptide ligands are widely used in protein purification by affinity chromatography. Here, we applied a fully automated two-stage library screening method that avoids false positive peptidyl-bead selection and applied it to tetanus toxoid purification. The first library screening was performed using only sulforhodamine (a fluorescent dye), and fluorescent beads were isolated automatically by flow cytometry and discarded. A second screening was then performed with the rest of the library, using the target protein (tetanus toxoid)-rhodamine conjugate. This time, fluorescent beads were isolated, and peptide sequences were identified by matrix-assisted laser desorption/ionization tandem mass spectrometry. Those appearing with greater frequency were synthesized and immobilized on agarose to evaluate a range of chromatographic purification conditions. The affinity matrix PTx1-agarose (Ac-Leu-Arg-Val-Tyr-His-Gly-Gly-Ala-Gly-Lys-agarose) showed the best performance when 20 mM sodium phosphate, 0.05% Tween 20, pH 5.9 as adsorption buffer and 100 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, pH 8.0 as elution buffer were used. A pure tetanus toxoid (Ttx) was loaded on a chromatographic column filled with the PTx1 matrix, and 96% adsorption was achieved, with a Kd of 9.18 ± 0.07 nmol/L and a qm of 1.31 ± 0.029 μmol Ttx/mL matrix. Next, a Clostridium tetani culture supernatant treated with formaldehyde (to obtain the toxoid) was applied as a sample. The sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis analysis showed a band, identified by electrospray ionization mass spectrometry as the Ttx, that appeared only in the elution fraction, where an S-layer protein was also detected.Fil: Martínez Ceron, María Camila. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Avila, Lucía. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Giudicessi, Silvana Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Minoia, Juan Mauricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Fingermann, Matias. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Departamento de Microbiología, Inmunología y Biotecnología. Cátedra de Microbiología Industrial y Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Camperi, Silvia Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Albericio, Fernando. Universidad de Barcelona; EspañaFil: Cascone, Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentin

Variability of the protein composition of argentinian bothrops alternatus venom and its possible relationship with the biological activity

En esta revisión se pone de manifiesto la variabilidad en la composición proteica de los venenos de Bothrops alternatus entre distintas poblaciones de América, inclusive Argentina y entre ejemplares de la misma población, la cual refleja posibles diferencias funcionales. Los perfiles de proteínas de SDS-PAGE uni o bidimensionales del veneno de B.alternatus muestran una variabilidad significativa no sólo entre las diferentes poblaciones sino también entre venenos de individuos de una misma región. Las proteínas contenidas en las principales bandas de geles 1D SDS-PAGE o 2D SDS-PAGE fueron identificadas por espectrometría de masas. La variabilidad en la composición de los venenos se refleja también en diferencias en las actividades biológicas: dosis letal, actividad hemolítica indirecta, actividad coagulante, actividad hemorrágica y actividad proteolítica. Las proteínas identificadas involucran principalmente a fosfolipasas, Factor GPIb-BP, botrocetina, FactorIX/X de coagulación y metalo- y serin-proteinasas. Estos estudios pueden ser importantes para ser considerados en la producción de antivenenos más específicos.Studies on variability in the protein composition of Bothrops alternatus venoms from american regions – including Argentina – were reviewed. The main objective is to explore if such variability is responsible for functional differences. 1 or 2D SDS-PAGE indicate that variability exists not only between different regions but also between specimens of the same region. Proteins contained in the main gel bands of 1D SDS-PAGE or in some spots of 2D SDS-PAGE were identified by mass spectrometry. They involve mainly phospholipases, glycoprotein 1b binding factor, bothrocetin, coagulation factors IX/X, and metallo and serin proteinases. As expected, structural differences are reflected in biological activities such as lethal dosis, indirect haemolytic activity, coagulant activity and proteolytic activity. These studies are important for the production of more specific antivenoms.Fil: Ávila, Lucía. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; ArgentinaFil: Pavan, Carlos Humberto. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Biscoglio, Mirtha Josefa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; ArgentinaFil: Dokmetjian, Jose Christian. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Fingermann, Matias. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Antivenenos ofídicos: comparación del desempeño de dos métodos de obtención

El envenenamiento por serpientes venenosas es frecuente en algunas zonas de Argentina, particularmente en las provincias del noreste y noroeste. Según datos del Programa Nacional de Ofidismo, el número de mordeduras es de alrededor de 1.200 anuales; son producidas casi totalmente por víboras del género Bothrops (yarará), en mucho menor número por Crotalus (cascabel) y en una cantidad todavía mucho más escasa por serpientes Micrurus (coral).Fil: Ávila, Lucía. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: de Marco, María Belén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Fingermann, Matias. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Temprano, Guillermo Carlos. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Iácono, Rubén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaFil: Dokmetjian, José Christian. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud;Fil: Cascone, Osvaldo. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud; . Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentin

Immune Maturation Effects on Viral Neutralization and Avidity of Hyperimmunized Equine Anti-SARS-CoV-2 Sera

Mass-vaccination against COVID-19 is still a distant goal for most low-to-middle income countries. The experience gained through decades producing polyclonal immunotherapeutics (such as antivenoms) in many of those countries is being redirected to develop similar products able to neutralize SARS-CoV-2 infection. In this study we analyzed the biological activity (viral neutralization or NtAb) and immunochemical properties of hyperimmune horses’ sera (HHS) obtained during initial immunization (I) and posterior re-immunization (R) cycles using the RBD domain of the SARS-CoV-2 spike protein as antigen. HHS at the end of the R cycle showed higher NtAb titers when compared to those after the I cycle (35,585 vs. 7000 mean NtAb, respectively). Moreover, this increase paralleled an increase in avidity (95.2% to 65.2% mean avidity units, respectively). The results presented herein are relevant for manufacturers of these therapeutic tools against COVID-19.Fil: Gonzalez Viacava, Myriam Belen. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Varese, Augusto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Mazzitelli, Ignacio Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Lanari, Laura Cecilia. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Avila, Lucía. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Garcia Vampa, Maria Julia. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Geffner, Jorge Raúl. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Dokmetjian, Jose Christian. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: de Roodt, Adolfo Rafael. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Fingermann, Matias. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Rapid and cost-effective process based on insect larvae for scale-up production of SARS-COV-2 spike protein for serological COVID-19 testing

Serology testing for COVID-19 is important in evaluating active immune response against SARS-CoV-2, studying the antibody kinetics, and monitoring reinfections with genetic variants and new virus strains, in particular, the duration of antibodies in virus-exposed individuals and vaccine-mediated immunity. In this work, recombinant S protein of SARS-CoV-2 was expressed in Rachiplusia nu, an important agronomic plague. One gram of insect larvae produces an amount of S protein sufficient for 150 determinations in the ELISA method herein developed. We established a rapid production process for SARS-CoV-2 S protein that showed immunoreactivity for anti-SARS-CoV-2 antibodies and was used as a single antigen for developing the ELISA method with high sensitivity (96.2%) and specificity (98.8%). Our findings provide an efficient and cost-effective platform for large-scale S protein production, and the scale-up is linear, thus avoiding the use of complex equipment like bioreactors.Fil: Smith, Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Mc Callum, Gregorio Juan. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Sabljic, Adriana Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Marfía, Juan Ignacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Bombicino, Silvina Sonia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Trabucchi, Aldana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Iacono, Ruben Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Birenbaum, Joaquín Manuel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Vázquez, Susana Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Minoia, Juan Mauricio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: López, María Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Taboga, Oscar Alberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Targovnik, Alexandra Marisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Wolman, Federico Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Fingermann, Matias. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Alonso, Leonardo Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; ArgentinaFil: Valdez, Silvina Noemi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; ArgentinaFil: Miranda, Maria Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentin

Critical aspects on traditional antivenom production processes and their optimization by factorial analysis

Most antivenoms are produced by techniques developed over 50 years ago, with minor modifications. Herein we revise the core of traditional antivenom production processes aiming to optimize key determinants for both consistent antivenom production and the best balance between F(ab')2 quality and recovery. Factorial design analysis revealed that pepsin digestion of 1:3 saline diluted equine plasma for 60 min under pH: 3.20, 37 °C temperature and a 1:15 pepsin to protein ratio conditions, allowed to achieve maximal IgG to F(ab')2 conversion with minimal protein aggregate formation. Further downstream processing by salting out with ammonium sulfate was also studied by factorial analysis. The influence of ammonium sulfate (AS) concentration, temperature (T) and the albumin to total plasma protein ratio plasma (Alb:P) were assayed, revealing that both AS, T and their interaction have a significant impact in F(ab')2 quality and recovery. Taking into account the existing compromise between F(ab')2 monomer recovery and quality two alternative conditions were selected: 14 g/dl AS at 56 °C and, alternatively 16 g/dl AS at 30 °C. Reasonable yields (42%) and product quality (2.5% of aggregates) without significant changes in production cost of traditional methodologies was achieved under the optimized conditions found.Fil: Zurbano, Beatriz Norma. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Tavarone, Maria Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: González Viacava, Belén. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Dokmetjian, Jose Christian. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Cascone, Osvaldo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Nanobiotecnología. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Nanobiotecnología; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; ArgentinaFil: Fingermann, Matias. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Ministerio de Salud de la Nación. Dirección Nacional de Institutos de Investigación. Administración Nacional de Laboratorios e Institutos de Salud "Doctor Carlos G. Malbrán". Instituto Nacional de Producción de Biológicos; Argentin