Interceptação do Wheat mosaic virus (WMoV) no Brasil em sementes de milho provenientes dos Estados Unidos

The objective of this work was to evaluate the phytosanitary aspect of two accessions of maize (Zea mays) seeds from the United States introduced to Brazil, regarding the presence of Wheat mosaic virus (WMoV). Two to three weeks after sowing, symptomatic leaves were tested by Elisa using specific antiserum to WMoV. The reaction was positive, and leaf samples were analyzed by real‑time PCR and amplified PCR products were sequenced. The WMoV isolates had 99 to 100% nucleotide identity with isolates from Australia and the United States. Until now, there is no report of the presence of this virus in Brazil. According to the federal law on plant protection, the plants were burned to avoid the introduction of this exotic pest in the country. The obtained results show WMoV interception in Brazil.O objetivo deste trabalho foi avaliar o aspecto fitossanitário de dois acessos de sementes de milho dos Estados Unidos introduzidas no Brasil, quanto à presença do Wheat mosaic virus (WMoV). Duas a três semanas após a semeadura, folhas sintomáticas foram testadas por Elisa, tendo-se utilizado antissoro específico para WMoV. A reação foi positiva, e as amostras foliares foram analisadas por PCR em tempo real e os produtos de PCR amplificados foram sequenciados. Os isolados de WMoV apresentaram 99 a 100% de identidade nucleotídica com isolados da Austrália e dos Estados Unidos. Até o momento, não há relato da presença desse vírus no Brasil. De acordo com a legislação federal de defesa vegetal, as plantas foram incineradas para evitar a introdução dessa praga exótica no País. Os resultados obtidos mostram a interceptação de WMoV no Brasil

Interceptions of quarantine and absent non‑regulated pests in imported plant material

O objetivo deste trabalho foi avaliar as informações qualitativas e quantitativas sobre as interceptações de pragas ausentes não regulamentadas e quarentenárias em material vegetal importado. As informações sobre interceptações de pragas pelo serviço de quarentena vegetal da Embrapa, no período de 1977 a 2013, foram obtidas em um banco de dados, atas laboratoriais e listas de interceptação publicadas. As interceptações foram analisadas de acordo com regulamentação das pragas, espécie vegetal, parte vegetal importada e origem. O material foi categorizado em sementes botânicas e material de propagação vegetativa. No período do levantamento, foram interceptadas 75 espécies de pragas em 114 eventos de interceptação. Fungos, vírus e ácaros constituem a maior parte das interceptações, e a maioria delas ocorreu em lírio, oliveira, trigo, uva, arroz, batata e maçã. A taxa média anual de infestação/infecção do material vegetal analisado é de 2% dos processos de importação. O material para propagação vegetativa apresentou maior taxa de infestação/infecção por pragas do que as sementes botânicas. Das espécies‑pragas interceptadas, 63% não são regulamentadas como quarentenárias para o Brasil. Esses resultados indicam a necessidade premente de revisão da atual lista de pragas quarentenárias do País.The objective of this work was to evaluate qualitative and quantitative information on interceptions of quarantine and absent non‑regulated pests in imported plant material. Information concerning pest interceptions by Embrapa’s plant quarantine service during the period of 1977–2013 was obtained from a database, laboratory reports, and published lists of intercepted pests. Data interceptions were evaluated according to pest regulations, plant species, imported plant parts, and origin of importation. The plant material was categorized as botanical seeds and plant material for vegetative propagation. In the survey period, 75 pest species were intercepted in 114 interception events. Fungi, viruses, and mites were the most intercepted ones, and most interceptions occurred in lily, olive, wheat, grapes, rice, potato, and apple. The average annual rate of infestation/infection of the evaluated plant material was 2% of the import processes. The material for vegetative propagation had a higher rate of infestation/infection with pests than botanical seeds. Of the intercepted pests species, 63% are not regulated as quarantine pests for Brazil. These results indicate the urgent need to review the current list of quarantine pests in the country

Biological and molecular characterization of begomoviruses in soybean (Glycine max) and Euphorbia heterophylla, and RNA interference-mediated virus resistance in transgenic soybean plants

A caracterização molecular de begomovírus é um aspecto de crucial importância para a compreensão dos mecanismos de variabilidade destes fitopatógenos. A análise dos genomas permite a compreensão da contribuição dos mecanismos de mutação e recombinação para a evolução de novas espécies de geminivírus. No Brasil, poucos relatos de ocorrência de begomovírus na cultura da soja foram registrados até o presente. Amostras de folhas de soja com sintomas claros da infecção por vírus foram obtidas em campo de produção de soja em Santo Antônio de Goiás (GO) e analisadas quanto à presença de begomovírus. Após a confirmação da infecção viral via PCR, os genomas completos foram amplificados a partir das amostras infectadas por meio de RCA (rolling circle- amplification). Os clones obtidos foram seqüenciados e a análise das sequências demonstrou a infecção por três vírus distintos: Bean golden mosaic virus (BGMV), Sida micrantha mosaic virus (SiMMV) e Okra mottle virus (OMoV), este último relatado recentemente em plantas de quiabeiro e, pela primeira vez, em soja. Um isolado de begomovírus detectado em leiteiro (Euphorbia heterophylla), uma planta daninha comumente associada à cultura da soja, também foi clonado e demonstrou-se tratar de um isolado de uma possível nova espécie, o Euphorbia mosaic Peru virus. O carlavírus Cowpea mild mottle virus (CpMMV) é um fitopatógeno de ocorrência relativamente recente na cultura da soja, se apresentando como um possível risco para a cultura nas condições brasileiras. O silenciamento de RNA é um mecanismo natural de defesa de plantas contra vírus que tem sido largamente empregado na geração de plantas transgênicas resistentes. Neste trabalho, o silenciamento de RNA foi direcionado para uma sequência do gene que codifica a proteína capsidial (CP) do CpMMV, a fim de gerar plantas transgênicas de soja resistentes ao vírus. Também foram usadas, em outra construção, sequências dos genes Rep do SiMMV e CP do potyvírus Soybean mosaic virus (SMV) para a geração de plantas transgênicas de soja resistentes aos dois vírus simultaneamente. O vetor pCARLA contém um fragmento de DNA de 493 pares de bases (pb) do gene CP do CpMMV, e foi utilizado para a transformação de embriões de soja pela técnica de bombardeamento. O vetor pGEMPOTY contém um fragmento de 303 pb do gene CP do SMV e um fragmento de 404 pb do gene Rep do SiMMV. Plântulas oriundas do bombardeamento com o vetor pGEMPOTY foram regeneradas em meio seletivo, e aguardam a confirmação da presença do transgene por meio de PCR. Foram obtidas cinco plantas transformantes com o vetor pCARLA, as quais foram desafiadas com o vírus CpMMV. As plantas transformantes, assim como os controles, não demonstraram sintomas visíveis da infecção pelo vírus. A progênie das plantas transformantes oriundas do bombardeamento com o vetor pCARLA será desafiada com o CpMMV a fim de confirmar esses resultados e verificar a herança e expressão do transgene.Molecular characterization of begomoviruses is of fundamental importance to identify the mechanisms of genetic variability of these important plant pathogens. Genome analysis allows for an understanding of mutation and recombination mechanisms which lead to evolution of new viral species. In Brazil, only a few reports of begomovirus infection of soybean have been made to date. Foliar samples of soybean plants with typical symptoms of begomovirus infection were collected in a commercial field at Santo Antônio de Goiás (Goiás state) and analyzed for the presence of a begomovirus. Following confirmation of viral infection by PCR, the entire viral genome was amplified from infected samples by rolling circle amplification, cloned and sequenced. Sequence analysis indicated infection by three distinct begomoviruses: Bean golden mosaic virus (BGMV), Sida micrantha mosaic virus (SiMMV) and Okra mottle virus (OMoV), the latter having been recently described in okra plants in Brazil, and now for the first time in soybean. A begomovirus isolate detected in Euphorbia heterophylla, a common weed in soybean fields, was also cloned and shown to comprise an isolate of the recently described novel species, Euphorbia mosaic Peru virus (EuMPV). The carlavirus Cowpea mild mottle virus (CpMMV) is a plant pathogen of relatively recent occurrence in soybean, representing a potential threat to the crop under Brazilian conditions. RNA silencing is a natural plant defense against viruses which has been widely employed to generate virus- resistant transgenic plants. In this work, RNA silencing was targeted to a sequence of the CpMMV capsid protein (CP) gene in an attempt to generate resistant soybean plants. In another construct, fragments of the SiMMV Rep gene and of the CP gene of the potyvirus Soybean mosaic virus (SMV) were also used in an attempt to generate transgenic soybean plants displaying resistance to both viruses. The pCARLA vector contains a 493 bp fragment of the CpMMV CP gene, and was used to transform soybean embryos by biolistics. The pGEMPOTY vector contains a 303 bp fragment of the SMV CP gene and a 404 bp fragmento of the SiMMV Rep gene. Plants generated from the bombardment with the pGEMPOTY vector were regenerated in selective medium and are currently being tested for the presence of the transgenes. Five transformants were obtained with the pCARLA vector, and were challenged with CpMMV. The transgenic plants did not show any visible symptoms of virus infection. The progeny of the transgenic plants will be challenged with CpMMV to further confirm these results and to verify stable inheritance and expression of the transgene.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic

Interception of ‘Candidatus Phytoplasma solani’ in Brazil in apple tree propagative material imported from France

<div><p>ABSTRACT: Apple plants from France introduced in Brazil for research purposes were subjected to a phytosanitary analysis at the Plant Quarantine Laboratory of Embrapa Genetic Resources and Biotechnology (Cenargen). After grafting onto healthy apple rootstock, some plants showed phytoplasma-infection symptoms. Polymerase Chain Reaction (PCR) tests yielded DNA fragments of the expected size for phytoplasmas. DNA sequencing revealed an identity of the 16S rDNA nucleotide sequence of 98-99% with ‘Candidatus Phytoplasma solani’. This phytoplasma species is responsible for losses in European apple orchards and has not been reported in Brazil. According to the Federal Legislation on Plant Protection, the plants were incinerated to avoid the introduction of this exotic pest in Brazil.</p></div