Avaliação da capacidade adjuvante do cloreto de dimetildioctadecilamônio associado ao hidróxido de alumínio na indução da resposta imune humoral de bovinos vacinados com o vírus da diarréia viral bovina

The humoral immune response of cattle vaccinated with inactivated bovine viral diarrhea virus (BVDV) using the association of dimethyl dioctadecyl ammonium chloride (DDA-chloride) and aluminum hydroxide (vaccine B) as adjuvant, was compared with the same antigenic formulation adsorbed with only aluminum hydroxide (vaccine A). The neutralizing antibodies titers were assessed two weeks after the second vaccine dose. The animals that received vaccine B had better humoral responses than the calves vaccinated with vaccine A. The mean titers of neutralizing antibodies, expressed in Log2, for the calves that received vaccine B was higher to those observed in group vaccinated with vaccine A. These results show that the inclusion of DDA chloride in vaccine formulations adsorbed with aluminum hydroxide determine a better humoral immune response in cattle vaccinated with BVDV inactivated.A resposta imunológica humoral de bovinos vacinados com o vírus da diarréia viral bovina (BVDV) inativado, tendo como adjuvante o cloreto de dimetildioctadecilamônio (DDA cloreto) associado ao hidróxido de alumínio (vacina B), foi comparada com uma vacina contendo o mesmo antígeno adsorvido apenas com hidróxido de alumínio (vacina A). Duas semanas após a segunda dose foi avaliado o título de anticorpos neutralizantes dos animais que receberam as duas preparações de antígenos. Os animais que receberam a vacina B apresentaram melhor resposta imune humoral quando comparados com os animais vacinados com a vacina A. O título médio de anticorpos neutralizantes, expresso em Log2, dos animais que receberam a vacina B foi superior (P<0,05) ao observado no grupo vacinado com a vacina A. Esse resultado demonstra que, em bovinos vacinados com o BVDV inativado, a inclusão do DDA cloreto em formulações de vacinas adsorvidas com hidróxido de alumínio potencializa a resposta imune humoral

OCORRÊNCIA DE Cryptosporidium spp. NA SUINOCULTURA NO MUNICÍPIO DE PALOTINA, REGIÃO OESTE DO PARANÁ.

A criptosporidiose é uma doença de caráter zoonótico causada pelo Cryptosporidium spp., um protozoário unicelular pertencente ao filo Apicomplexa, cosmopolita com grande capacidade de disseminação principalmente por meios hídricos, tem capacidade de se desenvolver na mucosa gástrica de animais vertebrados. Em suínos os sinais clínicos se apresentam principalmente em animais jovens como diarreia não hemorrágica, pelo caráter autolimitante animais adultos podem ser hospedeiros e eliminar os oocistos com as fezes, porém sem desenvolver sinais clínicos pelo desenvolvimento de imunocompetência. A via de transmissão é fecal-oral pela eliminação de oocistos com as fezes do hospedeiro que ao esporularem são aptos a infectar outros indivíduos seja via água ou alimentos contaminados. O ciclo biológico é monoxênico iniciando-se com a ingestão de oocistos esporulados presentes no ambiente, há ruptura do oocisto após o contato com os sais biliares a nível intestinal e assim liberam-se os trofozoítos, em seguida há a invasão dos enterócitos e diferenciação em merozoíto, seguido de um ciclo de auto infecção e uma gametogonia, diferenciando-se em macrogametócitos e microgametócito, a próxima etapa é uma reprodução sexuada com  fecundação e liberação de oocistos não esporulados nas fezes do hospedeiro. Os casos de criptosporidiose estão associadas principalmente a períodos que os animais jovens são submetidos a estresse provocando imunossupressão, é comum se apresentar principalmente após a mudança de manejo, tal qual o desmame, contudo, sendo a criptosporidiose uma doença que tem a mesma apresentação clínica de enterites bacterianas supõe-se que sua ocorrência seja subestimada. Neste trabalho objetivou-se determinar qual a ocorrência do Cryptosporidium spp. em suínos provenientes da suinocultura no município de Palotina, Oeste do Paraná. Foram selecionadas 18 fêmeas gestantes, 12 leitões e 29 fêmeas acompanhadas de leitão em granjas de ciclo completo. As amostras de fezes foram coletadas e acondicionadas individualmente, seguido de análise coproparasitológica de coloração Ziehl-Neelsen modificado conforme Ortolani (2000), onde foram classificadas qualitativamente mediante a observação de oocistos. Entre as categorias analisadas foram diagnosticados positivos 8 fêmeas (44,45%), 4 leitões (33,34%) e 8 fêmeas acompanhada de leitões pré desmame (27,6%). Os resultados demonstram que há circulação ativa do protozoário nos sistemas de criação e que se perpetuam as proles subsequentes. A falta do diagnóstico adequado pode contribuir para a perpetuação do Cryptosporidium spp. nas granjas, uma vez que sinais clínicos entéricos são comumente associados a outros agentes infecciosos e são tratadas como tal pelo uso de antibióticos. Até o momento não há drogas específicas de uso veterinário para o tratamento da infecção pelo protozoário, logo a melhor maneira de controlar o agente é através de técnicas de manejo e boas práticas de criação. O controle da qualidade da água de bebida pelo monitoramento microbiológico ou pelo uso de água tratada, controle de dejetos provenientes da criação, manutenção do bem-estar dos animais para reduzir estresse, e consequentemente a minimizar imunossupressão do plantel são as melhores estratégias para reduzir a ocorrência da criptosporidiose

Bovine herpervirus type 1: infection and diagnosis methods/ <br>Herpesvírus bovino tipo 1: Tópicos sobre a infecção e métodos de diagnóstico

Bovine herpervirus type 1 (BHV-1) is widespread in beef and dairy herds, causing great economic losses in cattle breeding. Infections caused by BHV-1 involving the respiratory, genital, reproductive and nervous systems can determine a wide variety of clinical manifestations wich are common on the other infectious and parasitic diseases. Several methodologies have been developed for laboratory diagnosis of BHV-1. Traditional serological techniques are unable to diferentiate animals exposed to the virus strains in the vaccine from those seropositives by natural exposure to the field strains. Thus the diagnosis can only be conclusive by detecting BHV-1 directly in clinical samples. Virus isolation has the disadvantage of requering viability in the viral particle, which in many situations may reduce the sensitivity and specificity of the technique. The immunoperoxidase and immunofluorescent techniques, although they do not require the infectiousness of the virus, can be seriously compromised if the structural integrity of the viral particle is not maintained. Currently the polymerase chain reaction assay is being universally adopted in the diagnosis of many virus, including BHV-1. This methodology has the advantage of not requiring the viral particle viability while providing high sensitivity and specificity and fast results.<p><p>O herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1) encontra-se amplamente disseminado em rebanhos de corte e leite, determinando grandes prejuízos econômicos à exploração pecuária. A infecção pelo BHV-1 pode comprometer os tratos respiratório, genital, reprodutivo e nervoso e ocasionar uma ampla variedade de manifestações clínicas que são comuns a outras doenças infecto-parasitárias, inviabilizando o diagnóstico clínico conclusivo. Várias metodologias foram desenvolvidas para a realização do diagnóstico laboratorial do BHV-1. Contudo, as técnicas sorológicas tradicionais são incapazes de diferenciar a soroconversão originada pela infecção natural daquela devido à vacinação. Com isto, o diagnóstico conclusivo somente é possível pela identificação do BHV-1 diretamente em amostras clínicas. O isolamento viral em cultivo celular apresenta como desvantagem a necessidade da viabilidade da partícula viral, o que em muitas situações pode ocasionar uma redução na sensibilidade e especificidade da técnica. As técnicas de imunoperoxidase e imunofluorescência, apesar de não exigirem a infecciosidade do vírus, podem ser seriamente comprometidas caso a integridade estrutural da partícula não seja mantida. Atualmente a técnica da reação em cadeia pela polimerase está sendo universalmente adotada no diagnóstico de diversas viroses, inclusive do BHV-1. Esta metodologia apresenta como principais vantagens a não exigência da viabilidade da partícula viral, alta sensibilidade / especificidade e rapidez na obtenção dos resultados

Standardization of a polymerase chain reaction (Semi Nested–PCR) to detect bovine herpesvirus type 1 in aborted fetus and semen from naturally infected cattle

A reação em cadeia pela polimerase (PCR) foi empregada para a detecção parcial do gene da glicoproteína D do herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1) em material biológico proveniente de bovinos naturalmente infectados. Para o aumento da sensibilidade e da especificidade da PCR, foram avaliados diferentes protocolos. Para a extração do DNA, a associação dos métodos fenol/clorofórmio/álcool isoamílico e sílica/tiocianato de guanidina, proporcionou a amplificação do DNA em maior concentração e qualidade. Após a otimização dos primers e condições da reação foi possível detectar, por meio da Semi Nested-PCR (SN-PCR), o genoma da estirpe Los Angeles do BHV-1 em sobrenadante de cultura celular, sem processamento prévio, até o limite de 1 TCID50. Em sêmen artificialmente infectado o limite de detecção do BHV-1 foi de 0,1 TCID50. Quando utilizada em material biológico, proveniente de bovinos naturalmente infectados, a SN-PCR apresentou resultados positivos tanto em fragmentos de órgãos de fetos bovinos abortados quanto em sêmen. Essa técnica revelou-se uma alternativa viável, rápida, sensível e específica para aplicação na rotina de diagnóstico da infecção pelo BHV-1, bem como, para o monitoramento sanitário do sêmen.The glycoprotein D gene of bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) was detected in clinical samples from naturally infected cattle by semi-nested polymerase chain reaction (SN-PCR). Different protocols were tested to increase the sensitivity and specificity of the technique. An association of DNA extraction methods using phenol/chloroform/isoamyl alcohol followed by silica/guanidine isothiocyanate yield greater concentration and quality of amplified DNA. After optimization of primers and reaction conditions, the genome of BHV-1 (Los Angeles strain) was detected by SN-PCR in tissue culture supernatant and artificially infected semen at the 1 and 0.1 TCID50 limit, respectively. When used on clinical specimens from naturally infected cattle, the SN-PCR yield positive results in semen of seropositive bull and in organ fragments of aborted cattle fetus. The SN-PCR was a viable alternative, which was faster, sensitive, specific and less laborious to be used in the routine diagnosis of BHV-1 infection and semen health monitoring

An outbreak of winter dysentery caused by bovine coronavirus in a high-production dairy cattle herd from a tropical country

Bovine coronavirus (BCoV) is a known cause of winter dysentery (WD) in adult cattle. The morbidity of the disease is high, that results in a significant decrease in milk production and consequently, economic losses. In the present study, we report on a classical outbreak of WD that affected a high-production Holstein dairy herd raised in a tropical country. The lactating batch included 154 cows, and 138 (90%) presented diarrhea in a short (nine days) period of time. Three (2%) cows died. The other batches of animals did not become ill. The evolution of the disease in the herd, including the clinical signs and epidemiological features, strongly suggested a WD case. Semi-nested PCR and RFLP confirmed that BCoV was the cause of the infection. Samples tested negative for all other enteric pathogens. This case report highlights the importance of BCoV in WD even in tropical countries such as Brazil.O coronavirus bovino (BCoV) pode causar a diarreia de inverno (WD - Winter Dysentery) ao infectar bovinos adultos, particularmente em regiões de clima temperado ou frio. A morbidade da doença é alta, resultando em queda na produção de leite e, consequentemente, perdas econômicas. No presente estudo, é descrito um surto clássico de WD acometendo um rebanho de bovinos leiteiros da raça Holandesa PB, de alta produção, proveniente do estado do Paraná. O lote afetado era composto por 154 vacas em lactação, sendo que 138 (90%) apresentaram diarreia em um curto (nove dias) período de tempo e 3 (2%) vacas morreram em consequência da diarreia, desidratação e desequilíbrio eletrolítico. As outras categorias de animais do rebanho (bezerras, novilhas e vacas secas) não apresentaram sinal clínico. A evolução da doença clínica, assim como a epidemiologia da infecção sugeriu um quadro clássico de WD. O diagnóstico foi realizado por meio da identificação do BCoV, pela técnica de semi-nested PCR e confirmação por RFLP, em amostra fecal de uma vaca que veio a óbito. A presença de outros patógenos entéricos também foi avaliada e apresentou resultados negativos. O surto de WD descrito na região sul do Brasil alerta para a possibilidade da ocorrência dessa virose também em países situados em regiões de clima tropical