Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico.

Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação: Mestrado em Biologia Experimental (PGBIOEXP) da Fundação Universidade Federal de Rondônia (UNIR) como requisito final para a obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Prof. Dr. Eduardo Rezende Honda.A malária é uma doença de grande importância epidemiológica em termos de morbidade e mortalidade no mundo. O índice de resistência às drogas antimaláricas vem aumentando gradativamente ao longo das últimas décadas. A descrição de vias metabólicas exclusivas de Plasmodium está abrindo perspectivas para desenvolvimento de novas drogas contra alvos moleculares bem definidos. A via do chiquimato é uma dessas vias metabólicas, e nesta está presente a enzima corismato sintase (CS) que catalisa a transformação de 5- enolpiruvil chiquimato 3-fosfato em corismato, último precursor comum na biossíntese de compostos aromáticos, presentes em bactérias, fungos, plantas, protozoários apicomplexa e ausente em mamíferos. A síntese e otimização do gene da proteína (PfCS) foi necessária para expressão em sistema procarioto. O produto gênico liofilizado foi inserido em vetor de clonagem PUC57 e vetor de expressão pGS21a. O plasmídeo foi transformado em células competentes TOP 10 F’, em seguida realizou-se miniprep e confirmação com enzimas de restrição Ncol e SalI. A retransformação foi realizada em células competentes BL 21 DE3 pLys e a indução foi com IPTG. A expressão foi confirmada por gel de SDSPAGE. A etapa de purificação foi realizada com Kit Qiagen 6x Histidina em coluna de Ni-NTA. A expressão foi obtida na forma de proteína recombinante de fusão com histidina, assumindo a forma de corpúsculos de inclusão, que foram desnaturadas com uréia 8M. Após purificação por coluna de afinidade obtivemos um nível aceitável de pureza. Estamos trabalhando para expressar essa proteína na forma solúvel e também em protocolos de renovelamento. Estudos in vitro englobando teste da atividade e inibição enzimática utilizando extratos vegetais encontrados na região Amazônica poderão identificar novos potenciais de fármacos para o tratamento da malária, inicialmente P. falciparum

Utilização de PCR em tempo real para desenvolvimento de método qualitativo e quantitativo do vírus da hepatite B, em soro de pacientes crônicos no estado de Rondônia

Dissertação de mestrado apresentada ao curso de Biologia Experimental do Núcleo de Saúde da Universidade Federal de Rondônia para obtenção do título de Mestre.Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), dois bilhões de pessoas já foram infectadas pelo vírus da hepatite B (HBV) e destes 400 milhões se tornaram portadores crônicos. A quantificação deste virus é amplamente utilizada para o monitoramento do tratamento antiviral da infecção. Um sistema de quantificação da carga viral do HBV foi desenvolvido, através da metodologia de PCR em tempo real, utilizando o sistema TaqMan. Como alvo um produto de 109 pb correspondente a região pré-core foi clonado e diluido seriadamente para construção da curva padrão. O método foi validado pela comparação dos resultados de quantificação da PCR em tempo real de sete amostras, com os resultados do Centro de Genomas, onde houve uma correlação significativa (r = 0,95) entre os dois métodos. O ensaio mostrou ampla faixa dinâmica linear entre 2x10² e 2×10⁷ cópias/ml. Amostras negativas para HBV foram utilizadas como controle nas reações, indicando a alta especificidade do ensaio. Os coeficientes de variação dos ensaios intra e interexperimental foram de 1% para ambas, os quais indicaram reprodutibilidade notável. O ensaio padronizado é aplicado a todos os genótipos, porém um número maior de amostras devem ser comparadas para melhor validação do método. Esse ensaio pode ser aplicado no monitoramento de pacientes infectados pelo HBV na rotina de diagnostico dos laboratórios e na prática clínica. Além disso, o estudo possibilitou a identificação da distribuição dos genótipos do HBV em 35 amostras de pacientes HBsAg-positivos. Um fragmento de 1306bp que corresponde parcialmente aos genes de superfície e da polimerase foi amplificado purificado e seqüenciado. As seqüências foram alinhadas com seqüências referência obtidas no GenBank usando software Clustal X e, em seguida, editadas com software SE-AL. As análises filogenéticas foram conduzidas pela Cadeia de Markov Monte Carlo (MCMC) usando BEASTv.1.5.3. A distribuição dos subgenótipos foi A1 (37,1%), D3 (22,8%), F2a(20,0%), D4 (17,1%) e D2 (2,8%). Esses resultados representam a primeira caracterização genotípica do HBV no estado de Rondônia e são consistentes com outros estudos no Brasil, mostrando a presença de vários genótipos, refletindo a origem mista da população, envolvendo descendentes de nativos americanos, europeus e africanos

INTERVENÇÃO EDUCATIVA SOBRE TUBERCULOSE PARA AGENTES COMUNITÁRIOS DE SAÚDE EM UNIDADES DA ATENÇÃO PRIMÁRIA À SAÚDE EM UM MUNICÍPIO DA REGIÃO NORTE

Diante da necessidade de propor uma qualificação para transformação e aprimoramento dos Agentes Comunitários de Saúde (ACS), considera-se de fundamental importância a identificação do conhecimento desses atores, que representam um elo entre o serviço e a comunidade, em especial, na atenção à Tuberculose (TB). Assim, o presente estudo teve como objetivo desenvolver uma intervenção educativa sobre TB para ACS, de duas Unidades de Saúde da Família, no município de Porto Velho-RO. Trata-se de um estudo descritivo, com abordagem quantitativa. Os dados foram coletados entre março e abril de 2017, por meio de um questionário estruturado, e a análise através de estatística descritiva. A intervenção foi delineada, a partir das lacunas do conhecimento identificadas e realizada em encontros de quatro horas cada, com os mesmos conteúdos e metodologia. Verificou-se que os ACS possuíam um conhecimento restrito sobre as características gerais da TB, diagnóstico, tratamento, medidas de prevenção e vigilância dos casos. Tais achados permitem refletir sobre a importância dos processos formativos e de qualificações constantes que possibilitem o diálogo com os profissionais sobre o cenário em que suas atribuições são desempenhadas e as dificuldades vivenciadas, visando um planejamento coerente e participativo com os atores envolvidos. Palavras-chave: Tuberculose; Agentes Comunitários de Saúde; Atenção Primária à Saúde

HEPATITIS B IN RONDÔNIA (WESTERN AMAZON REGION, BRAZIL): descriptive analysis and spatial distribution

Background The Amazon is one of the regions who have the highest rates of infection by the hepatitis B virus in the world. Objectives This study aimed to evaluate the epidemiological data and spatial distribution of hepatitis B cases reported between 2002 and 2012 in the Brazilian State of Rondônia. Methods Social and clinical data of these individuals were studied through the Information System for Notifiable Diseases (SINAN), including the following variables: gender, age group, vaccination, contact with a known patient with HBV, exposure to risk factors, source of infection, and clinical status. Results There were 7,132 cases reported in Rondônia, with an average incidence rate of 42/100,000 inhabitants per year. The municipalities with the highest incidence rates were Monte Negro (187.6/100,000 inhabitants) and Ariquemes (157.2/100,000 inhabitants). The 20-39 year-old age group had the highest number of cases (n = 3,834), and 69.9% of patients were likely infected via sexual contact. Regarding the clinical disease status, most of the patients (80.7%) were in the chronic phase. Conclusions There was a recent 402% increase in the diagnosis of hepatitis B, which is likely owing to the improvements in the public diagnostic system. This highlights the need for public policies to prevent and control the disease