A Multiplex real-time PCR for detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae in clinical samples from Brazilian commercial poultry flocks

Mycoplasma gallisepticum (MS) and Mycoplasma synoviae (MS) are important avian pathogens and cause economic losses to the poultry industry. Molecular biology techniques are currently used for a rapid detection of these pathogens and the adoption of control measures of the diseases. The aim of this study was to develop and validate a technique for simultaneous detection of MG and MS by multiplex real time polymerase chain reaction (PCR). The complete assay (Multiplex MGMS) was designed with primers and probes specific for each pathogen and developed to be carried out in a single tube reaction. Vaccines, MG and MS isolates and DNA from other Mycoplasma species were used for the development and validation of the method. Further, 78 pooled clinical samples from different poultry flocks in Brazil were obtained and used to determine the sensitivity and specificity of the technique in comparison to 2 real time PCR assays specific for MG (MG PCR) and MS (MS PCR). The results demonstrated an agreement of 100% (23 positive and 44 negative samples) between Multiplex MGMS and MG PCR in the analysis of 67 samples from MG positive and negative poultry flocks, and an agreement of 96.9% between Multiplex MGMS and MS PCR in the analysis of 64 samples from MS positive and negative poultry flocks. Considering the single amplification tests as the gold standard, the Multiplex MGMS showed 100% of specificity and sensitivity in the MG analysis and 94.7% sensitivity and 100% specificity in the MS analysis. This new assay could be used for rapid analysis of MG and MS in the poultry industry laboratories

DIVERSIDADE GENÉTICA DE MYCOPLASMA SYNOVIAE NO BRASIL

Mycoplasma synoviae (MS) é um agente infeccioso que acomete galinhas e perus, podendo causar doença respiratória crônicae sinovite infecciosa com graus variados de manifestações clínicas. Esta espécie possui diferentes cepas que podem ser caracterizadaspor técnicas de análise genética. O objetivo deste estudo foi analisar a diversidade de um gene específico (vlhA) em amostras de MSde granjas de produção de aves de diferentes locais do Brasil. Amostras de traquéias foram obtidas de aves de 35 lotes de granjaspositivas para MS de diferentes estados do país. DNA total destas amostras foi extraído pela metodologia de sílica e após foi realizadadupla amplificação de uma região variável (284 a 341 pares de bases - pb) da extremidade 5´ do gene vlhA pela técnica dareação em cadeia da polimerase (nested-PCR). As amostras positivas foram sequenciadas e analisadas comparativamente para aconstrução da árvore filogenética e avaliação do tamanho de uma região interna específica (PRR). Os resultados demonstraram aocorrência de 16 diferentes sequências de aminoácidos nas 35 amostras avaliadas e a análise filogenética mostrou a ocorrência de 8diferentes clados. A sequência de aminoácidos da respectiva cadeia polipeptídica também apresentou diversidade entre as amostras.A região variável PRR foi a que apresentou maior polimorfismo e as amostras foram classificadas em 5 tipos previamente caracterizados(A, C, D, E e F) e um novo tipo (G) encontrado em amostras de granjas do estado do Rio Grande do Sul. Estes resultadosdemonstraram que as amostras de MS de granjas de produção avícola do Brasil apresentam diversidade no gene vlhA

DIFERENCIAÇÃO MOLECULAR DE Mycoplasma gallisepticum (MG)

Este trabalho teve como objetivo diferenciar cepas de Mycoplasma gallisepticum isolados deperus, galinhas e pássaros ornamentais através da comparação entre seqüências de genes de antígenosde superfície. Analisou-se 10 cepas de referência, 6 isolados de galinhas, 9 isolados de perus e 5isolados de pássaros ornamentais. Foram escolhidos 3 genes relacionados com antígenos de superfície(citoadesina - MGC1, lipoproteína – LP e a proteína de fase variável - Pvpa) que foram amplificadospela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e posteriormente seqüênciados. A análise dos 3genes permitiu diferenciar todas cepas de referência além de estabelecer um estudo filogenético comos distintos isolados. Os isolados de pássaros ornamentais apresentaram alto grau de identidade nasseqüências analisadas e distinção dos MG isolados de perus e galinhas. Foram encontrados 5 isoladosde perus e 2 de galinhas que apresentaram, respectivamente, seqüências idênticas às cepas vacinais.Há evidências de que estes isolados possam estar relacionados com cepas vacinais, de uso freqüente na avicultura comercial. Os demais isolados não apresentaram identidade entre si ou mesmo com ascepas de referência formando os demais padrões descritos.Palavras chave: Mycoplasma gallisepticum, diferenciação molecular, PCR

Avaliação de sensibilidade de três sistemas para a detecção de Mycoplasma gallisepticum pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)

Foram analisados neste trabalho três sistemas para detecção molecular de Mycoplasma gallisepticum(MG) pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Dois sistemas são baseados em amplificações únicas(genes de proteínas de superfície GapA e mgc2) e um sistema no formato nested-PCR (gene GapA). Asensibilidade analítica foi avaliada pela detecção de diluições seriadas de cepa vacinal e pela análise de 44amostras clínicas provenientes de swabs de galinhas e perus. A nested-PCR apresentou maior sensibilidadeaos sistemas de amplificação única tanto na diluição de vacina quanto nas amostras clínicas.Palavras-chave: Mycoplasma gallisepticum, sensibilidade, PCR

Pode-se considerar a vanilina um agente antigenotóxico?

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Avaliação do potencial bioantimutagênico da vanilina sobre as lesões espontâneas ou induzidas pela mitomicina C em células somáticas de Drosophila melanogaster

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Pode-se considerar a vanilina um agente antigenotóxico?

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Avaliação do potencial antimutagênico da vanilina em células somáticas de drosophila melanogaster

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Avaliação do potencial antimutagênico da vanilina em células somáticas de drosophila melanogaster

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