Homeostasis de ATP extracelular en eritrocitos: interregulación y consecuencias funcionales

Human erythrocytes (RBCs) release ATP in different stimuli.\nIn vitro, exposure to different pharmacological agents triggers intracellular\nevents that activate ATP release.\nIn this thesis factors controlling the temporal evolution of extracellular ATP\n(ATPe) concentration were analyzed. Cells were exposed to two ATP release\nstimuli: 3V and the peptide mastoparán 7 (MST7). Both stimuli induce increases\nof cAMP, the main second messenger.\nMain results:\nUnder 3V exposure there is an increase of cAMP, which translated into an\nacute, transient release of ATP. When cells were pre-exposed to CBX\n(pannexin 1 inhibitor), ATP release induced by 3V was completely blocked.Thus\nunder 3V stimulation, RBCs exhibit a single ATP conduit mediated by pannexin\n1.\nUnder MST7 exposure, small cAMP increases correlated with a strong ATP\nrelease. CBX induced a partial blockage of ATP release, suggesting the\nexistence of two conduits for ATP release. In addition to cAMP, the potential\nrole of cell volume and cell adhesion on ATPe kinetics was studied.\nIn non-adhered cells, MST7 neither trigger ATP release nor affected cell\nvolume. On the other hand, in cells adhered to coverslips, and exposed to\nMST7, ATPe concentrations strongly increased and a volume increased was\nobserved.Fil: Leal Denis, María Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica; ArgentinaLos eritrocitos humanos (RBC) liberan ATP frente a diferentes estímulos. In vitro, la\nexposición a diferentes agentes farmacológicos desencadena eventos intracelulares\nque activan la liberación de ATP.\nEn esta tesis se analizaron los factores que controlan la evolución temporal de la\nconcentración de ATP extracelular (ATPe). Las células fueron expuestas a dos\nestímulos que inducen liberación de ATP: 3V y mastoparán 7 (MST7). Ambos\nestímulos inducen aumentos de la concentración de cAMP.\nLa exposición a 3V produjo un aumento de cAMP, que se tradujo en una liberación\naguda de ATP. Cuando las células fueron tratadas con CBX (bloqueante de\npanexina 1), la liberación de ATP fue completamente bloqueada concluyendo que la\nsalida de ATP ocurriría sólo a través de la panexina 1.\nLa exposición a MST7 indujo pequeños aumentos de cAMP que llevaron a una gran\nsalida de ATP. El CBX bloqueó parcialmente la liberación de ATP, sugiriendo la\nexistencia de dos vías para la liberación del mismo. Además se estudió el papel del\nvolumen y la adhesión celular en la cinética de ATPe. En las células no adheridas,\nMST7 no indujo respuesta mientras que en células adheridas, las concentraciones\nATPe aumentaron y se observó un aumento de volumen celular

Effects of Erythrocytes Treated with Alpha Hemolysin of E.Coli on Endothelial Cells

Uropathogenic strains of E. coli deliver the toxin alpha-hemolysin (HlyA) to optimize the host environment for the spread of infection. It was reported that at high concentrations, the toxin forms pores in eukaryotic membranes, leading to cell lysis, while lower concentrations might interfere with host-cell-signaling pathways, causing apoptosis. In the present investigation we demonstrate that a relatively low concentration of HlyA induces morphological changes and phosphatidylserine (PS) externalization of human erythrocytes. On the other hand, the unacylated nonhemolytic form of HlyA, ProHlyA induces similar morphological changes but no PS externalization. We performed osmoscan experiments to test the effect of both proteins on erythrocytes structure.Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La PlataInstituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológico

Dynamic regulation of extracellular ATP in Escherichia coli

We studied the kinetics of extracellular ATP (ATPe) in Escherichia coli and their outer membrane vesicles (OMVs) stimulated with amphipatic peptides melittin (MEL) and mas-toparan 7 (MST7). Real-time luminometry was used to measure ATPe kinetics, ATP release, and ATPase activity. The latter was also determined by following [32P]Pi released from [γ-32P]ATP. E. coli was studied alone, co-incubated with Caco-2 cells, or in rat jejunum segments. In E. coli, the addition of [γ-32P]ATP led to the uptake and subsequent hydrolysis of ATPe. Exposure to peptides caused an acute 3-fold (MST7) and 7-fold (MEL) increase in [ATPe]. In OMVs, ATPase activity increased linearly with [ATPe] (0.1-1 mM). Exposure to MST7 and MEL enhanced ATP release by 3-7 fold, with similar kinetics to that of bacteria. In Caco-2 cells, the addition of ATP to the apical domain led to a steep [ATPe] increase to a maximum, with subsequent ATPase activity. The addition of bacterial suspensions led to a 6-7 fold increase in [ATPe], followed by an acute decrease. In perfused jejunum segments, exposure to E. coli increased luminal ATP 2 fold. ATPe regulation of E. coli depends on the balance between ATPase activity and ATP release. This balance can be altered by OMVs, which display their own capacity to regulate ATPe. E. coli can activate ATP release from Caco-2 cells and intestinal segments, a response which in vivo might lead to intestinal release of ATP from the gut lumen.Fil: Alvarez, Cora Lilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Corradi, Gerardo Raul. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Lauri, Natalia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Marginedas Freixa, Irene. Université Paris Diderot - Paris 7; FranciaFil: Leal Denis, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Enrique, Nicolás Jorge. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Maté, Sabina María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata ; ArgentinaFil: Milesi, Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Estudios Inmunológicos y Fisiopatológicos; ArgentinaFil: Ostuni, Mariano Anibal. Université Paris Diderot - Paris 7; FranciaFil: Herlax, Vanesa Silvana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata "Prof. Dr. Rodolfo R. Brenner". Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Médicas. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata ; ArgentinaFil: Schwarzbaum, Pablo Julio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentin

Dynamic regulation of extracellular ATP in <i>Escherichia coli</i>

We studied the kinetics of extracellular ATP (ATPe) in Escherichia coli and their outer membrane vesicles (OMVs) stimulated with amphipatic peptides melittin (MEL) and mas-toparan 7 (MST7). Real-time luminometry was used to measure ATPe kinetics, ATP release, and ATPase activity. The latter was also determined by following [32P]Pi released from [γ-32P]ATP. E. coli was studied alone, co-incubated with Caco-2 cells, or in rat jejunum segments. In E. coli, the addition of [γ-32P]ATP led to the uptake and subsequent hydrolysis of ATPe. Exposure to peptides caused an acute 3-fold (MST7) and 7-fold (MEL) increase in [ATPe]. In OMVs, ATPase activity increased linearly with [ATPe] (0.1-1 mM). Exposure to MST7 and MEL enhanced ATP release by 3-7 fold, with similar kinetics to that of bacteria. In Caco-2 cells, the addition of ATP to the apical domain led to a steep [ATPe] increase to a maximum, with subsequent ATPase activity. The addition of bacterial suspensions led to a 6-7 fold increase in [ATPe], followed by an acute decrease. In perfused jejunum segments, exposure to E. coli increased luminal ATP 2 fold. ATPe regulation of E. coli depends on the balance between ATPase activity and ATP release. This balance can be altered by OMVs, which display their own capacity to regulate ATPe. E. coli can activate ATP release from Caco-2 cells and intestinal segments, a response which in vivo might lead to intestinal release of ATP from the gut lumen.Instituto de Estudios Inmunológicos y FisiopatológicosInstituto de Investigaciones Bioquímicas de La PlataFacultad de Ciencias MédicasConsejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnica

Homeostasis of extracellular ATP in uninfected RBCs from a Plasmodium falciparum culture and derived microparticles

International audienc

Development of an Item Bank to Measure Knowledge in University Students

La medición en el ámbito educativo del rendimiento académico de los estudiantes universitarios es considerada empírica y cuantitativa. De allí que el propósito principal de dichas evaluaciones consiste en el control de los sistemas educativos y la evaluación a partir de criterios objetivos (Long, Wendt, & Dunne, 2011). Este trabajo apunta a desarrollar un banco de ítems para el Test de Conocimiento General compuesto de 20 dominios específicos. Se presentan avances realizados en seis dominios (psicología, biología, historia, literatura, economía y leyes). La muestra estuvo compuesta por 6.794 estudiantes. Se evaluaron 1.526 ítems de distintos dominios. Se realizó un análisis factorial exploratorio no lineal, se obtuvieron los índices de dificultad y discriminación según la teoría clásica de los test y la teoría de respuesta al ítem; también se obtuvieron índices de fiabilidad. El 68% presenta dificultad moderada y 32% un índice de dificultad alto o bajo. Sobre los índices de confiabilidad en la mayoría de los dominios se obtuvieron valores satisfactorios superiores a ,70. Se concluye la necesidad de revisar los ítems que no cumplieron estos criterios y ampliar la muestra. Este instrumento permitirá reducir los errores de clasificación de los alumnos y medir el desempeño académico con una escala de intervalo.Fil: Cupani, Marco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones y Estudio sobre Cultura y Sociedad. Centro de Investigaciones de la Facultad de Psicología - Grupo Vinculado CIPSI; ArgentinaFil: Ghio, Fernanda Belén. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Leal Denis, Maria Florencia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Giraudo, Gimena Mariel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Castro Zamparella, Tatiana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Piumatti, Gisella. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Casalotti, Antonella Belén. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Ramírez, Juan Claudio. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Andrés Arranz, María. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Farías, Analía Norma. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Padilla, Natalia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; ArgentinaFil: Barrionuevo, Leandro. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Psicología; Argentin