Sérodiagnostic de la toxoplasmose (évaluation de trois techniques automatisées et analyse du VIDIA en routine sur 9464 sérums)

Le diagnostic sérologique de la toxoplasmose repose essentiellement sur le dosage des IgG et des IgM anti-toxoplasmiques. L'avidité des IgG permet la datation de l'infection. Le but était de trouver un automate plus rapide et effectuant de plus grandes séries que le VIDAS® tout en gardant la qualité de l'analyse. Nous avons comparé, dans un premier temps, trois techniques automatisées : VIDIA® de bioMérieux, LIAISON® de DiaSorin, EVOLIS® de Bio-Rad. Pour cette étude, 136 sérums provenaient de la sérothèque du laboratoire et 254 étaient des sérums de routine (118 positifs, 136 négatifs en IgG). L'analyse de l'avidité a été effectuée sur 49 de ces sérums. Les calculs de sensibilité, spécificité, valeur prédictive négative et positive ont été réalisés avec chaque technique pour les IgG, les IgM et l'avidité. Dans un deuxième temps, après avoir choisi le VIDIA®, nous avons évalué ses résultats sur 10 mois à partir de 9464 sérums provenant de 4219 patients et des calculs de sensibilité et de spécificité ont été effectués.TOULOUSE3-BU Santé-Centrale (315552105) / SudocSudocFranceF

Test de lyse des toxoplasmes effectué au laboratoire de parasitologie-mycologie du CHU de Limoges (optimisation, standardisation et évaluation en vue de son accréditation)

En matière de sérodiagnostic de la toxoplasmose, le test de lyse des toxoplasmes reste la technique de référence pour sa sensibilité, sa spécificité et sa positivation précoce. Néanmoins, cette méthode manuelle est délicate à mettre en oeuvre, nécessite du matériel biologique potentiellement contaminant et requiert une grande expérience technique. L'ordonnance ministérielle du 13 janvier 2010 réformant la biologie médicale rend obligatoire l'accréditation des laboratoires. Dans ce but, nous avons d'abord identifié tous les paramètres critiques intervenant à chaque étape de sa réalisation, permettant ainsi une amélioration de notre technique. Cette optimisation et son évaluation ont porté sur plusieurs points : la réalisation du test proprement dit, le contrôle de la qualité de la technique et la traçabilité, indispensables à l'accréditation de la méthode. Les modifications apportées à notre technique manuelle ont ainsi permis une meilleure standardisation du test de lyse au sein même de notre laboratoire. La collaboration avecd'autres CHU pratiquant ce test nous permet d'envisager dans l'avenir une standardisation inter-laboratoires de la technique et apporte la possibilité d'un contrôle de qualité externe. Le test de lyse actuellement effectué en France fait appel à des toxoplasmes vivants obtenus par ascite de souris. Cette méthode d'obtention des parasites nécessite néanmoins une infrastructure lourde et coûteuse. La production de toxoplasmes par culture cellulaire semble une alternative séduisante. Plusieurs essais ont été réalisés afin d'adapter la culture des parasites au test de lyse effectué en routine. Si l'utilisation de toxoplasmes issus de culture cellulaire au cours du test donne des premiers résultats encourageants, sa mise en place en routine pose encore d'importants problèmes inhérents à la culture elle-même. D'autres travaux seront nécessaires afin d'adapter la culture in vitro des parasites à la technique de routine du test de lyse.In terms of serodiagnosis of toxoplasmosis, dye test remains the gold standard for sensitivity, specificity and early positivation. However, this manual method is difficult to implement, require biohazardous material and a great technical experience. The ministerial order of January 13, 2010 reform of medical biiology makes mandatory accreditation of laboratories. For this purpose, we first identified all the critical parameters involved in each step of its implementation, thereby improving our technique. This optimization and its evaluation focused on several points : the completion of dye test itself, the quality control of technique and traceability, essential for method's accreditation. Changes to our manual technique have enabled a better standardization of dye test in our laboratory. Collaboration with other University hospitals practicing dye test allows us to consider in future inter-laboratories standardization of technique and brings the possibility of external quality control. Dye test carried out in France currently use live toxoplasma obtained by mouse ascites. This method of obtaining parasites still requires heavy and expensive infrastructure. Production of cell culture derived toxoplasma seems to be an attractive alternative. Several attempts have been realized to adapt cell culture of parasites in dye test performed routinely. If the use of cell culture derived toxoplasma for the dye test gives encouraging first results, its implementation in routine still have significant problems inherant in the culture itself. We need further works to adapt the in vitro culture of parasites in the routine's dye test.BORDEAUX2-BU Santé (330632101) / SudocSudocFranceF

Contribution à la détection de Toxoplasma gondii dans l'environnement et dans des réservoirs animaux

LIMOGES-BU Médecine pharmacie (870852108) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF

APPORT DES MICROSATELLITES DANS LE TYPAGE DES ISOLATS DE TOXOPLASMA GONDII (DES BIOL. MED.)

LIMOGES-BU Médecine pharmacie (870852108) / SudocLYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

Le traitement des helminthoses en France

LIMOGES-BU Médecine pharmacie (870852108) / SudocLYON1-BU Santé (693882101) / SudocSudocFranceF

Application des exigences techniques de la norme NF EN ISO 151189 au secteur de parasitologie directe du C.H.U. de Limoges

LIMOGES-BU Médecine pharmacie (870852108) / SudocSudocFranceF

Sérotypage de Toxoplasma gondii (apport à la connaissance de la biodiversité du parasite)

La toxoplasmose est une maladie causée par le parasite apicomplexe Toxoplasma gondii. La plupart des infections humaines sont asymptomatiques, cependant, de sévères complications peuvent se développer à la suite d une infection congénitale ou chez des patients immunodéprimés. Des foyers de toxoplasmose, dans lesquels des individus immunocompétents développent des infections sévères, ont été décrits dans la littérature. L isolement du parasite associé à ces manifestations cliniques de différentes régions géographiques a révélé la grande diversité génétique de T. gondii. Les méthodes utilisées pour la caractérisation génétique de ce parasite nécessitent l isolement préalable du parasite ou de son ADN. Cette condition réduit les études génétiques aux infections de sujets symptomatiques, dans lesquelles il est possible de recueillir des échantillons biologiques. D autre part, l isolement par bioessais sur souris peut favoriser certaines souches et ne pas permettre la détection d infections mixtes. Le sérotypage est une méthode simple basée sur un essai immunoenzymatique (enzyme-linked immunosorbent assay ELISA) qui utilise des peptides polymorphes dérivés d antigènes de T. gondii. Les sérums, seuls échantillons biologiques nécessaires, peuvent être obtenus de sujets présentant ou non des symptômes et éliminent les disparités associées au génotypage à partir de l isolement du parasite. Le principal objectif de ce travail de thèse est d étudier l applicabilité au sérotypage de nouveaux peptides polymorphes souches-spécifiques. Le séquençage des gènes codant pour trois antigènes (GRA6, GRA7, GRA8) de 52 souches archétypales et non-archétypales a montré que les peptides GRA6 et GRA7 présentent des polymorphismes capables de distinguer les trois lignées clonales et les souches non-archétypales. Le sérotypage de souches connues de souris et d humains infectés a montré que les infections dues à des souches appartenant aux lignées archétypales I, II et III peuvent être sérotypées avec les peptides GRA6II, GRA6I/III et GRA7III. Toutefois, les peptides spécifiques de souches non-archétypales ont une faible spécificité et sensitivité. Cette méthode a également été utilisée pour prévoir le sérotype chez des patients atteints de toxoplasmose aiguë ou chronique dues à des génotypes inconnus d Europe, d Afrique, et d Amérique Latine. En Europe, le sérotype II prédomine, alors qu en Afrique et en Amérique Latine, le sérotype I/III est plus fréquent. Le sérotype II a cependant été retrouvé avec une fréquence non négligeable en Uruguay, dans des zones où l influence sur la circulation des génotypes des relations avec l Europe est possible. Aucune relation n a été établie entre la distribution des sérotypes et la pathologie. Les résultats du sérotypage d animaux domestiques naturellement infectés avec les peptides sélectionnés, suggèrent malgré quelques restrictions, que le sérotypage est une méthode prometteuse pour certaines souches. D autres peptides de différents marqueurs doivent néanmoins être étudiés afin de distinguer les souches archétypales des non-archétypales. Le sérotypage peut devenir un outil intéressant dans des études épidémiologiques, dans la détection d une réinfection avec une souche différente, mais également dans la détection d infections par des souches non-archétypales de T. gondii chez des animaux destinés à la consommation humaine.Toxoplasmosis is caused by the Apicomplexa parasite Toxoplasma gondii. Most infections in humans are asymptomatic. However, severe complications may occur in consequence of a congenital infection or in immunocompromised patients due to an acquired infection. Outbreaks of human toxoplasmosis have been described, where immunocompetent individuals developed severe infections. Isolation of parasite associated with these clinical manifestations from different geographic regions revealed that T. gondii has a high genetic diversity. Most of the methods used for genetic characterization of this parasite, require the previous isolation of the parasite or of the DNA. This limits the genetic studies to infections from which is possible to collect biological samples, usually from symptomatic patients. Besides, isolation by mice bioassay may favour some strains and do not detect mixed infections. Serotyping is a simple typing method that consists of an immunoenzymatic assay (enzyme-linked immunosorbent assay [ELISA]) using synthetic polymorphic peptides derived from T. gondii antigens. The only biological material required is serum samples, which can be collected from both symptomatic and asymptomatic patients and eliminates the biases associated with genotyping based on parasite isolation. The main objective of this study is to explore new polymorphic strain-specific peptides for serotyping. Sequencing of the coding genes for three antigens (GRA6, GRA7 and GRA8) from 52 archetypal and non-archetypal strains showed that GRA6 and GRA7 had polymorphisms that could be used to differentiate the three clonal lineages and non-archetypal strains. Serotyping of infections in mice and humans with known strains showed that infections due to strains belonging to the archetypal lineages I, II and III can be serotyped with the peptides GRA6II, GRA6I/III and GRA7III. However, peptides specific for non-archetypal strains have a poor specificity or sensitivity. This method was also used to predict the serotype of patients with acute and chronic toxoplasmosis due to unknown genotypes from Europe, Africa, and Latin America. In Europe the prevalent serotype is type II, while in Africa and Latin America, serotype GRA6I/III prevails. Serotype II was found in Uruguay with a considerable frequency in areas with possible influence of genotypes until now described in Europe. No relation was established between serotype distribution and pathology. Serotyping of naturally infected domestic animals presented some limitations with the selected peptides. The results suggest that although the actual limitations, serotyping may be a promising method for typing strains. However, other peptides from different markers must be studied in order to discriminate archetypal from non-archetypal strains. In the future, serotyping may be valuable tool in epidemiologic studies, in the detection of a re-infection with a different strain and also in the detection of T. gondii infections by non-archetypal strains in animals for human consumption.LIMOGES-BU Médecine pharmacie (870852108) / SudocSudocFrancePortugalFRP

Kinetics of pro-inflammatory proteins synthesized by infected Hbmec.

<p>A and B: cytokine expression profiles; C and D: chemokine expression profiles; E and F: growth factor and SERPIN E1 expression profiles were determined after 8 h, 14 h, 24 h and 48 h infection by two strains of <i>T. gondii</i> RH (Figure 1A, 1C and 1E) and PRU (Figure 1B, 1D and 1F). A basal expression level for each pro-inflammatory protein <i>T. gondii</i> burden was determined at T₀. Concentrations of immune mediators were calculated using values of corrected pixels obtained from uninfected cells (negative control) subtracted from pixel values of infected cells. <i>T. gondii</i> burdens were evaluated by the percentage of <i>Toxoplasma</i> multiplication, knowing that the parasite burden at T₀ is 100%. The parasite burden scale was multiplied 100 times (Only in Hbmec infected by RH strain). *<i>p</i><0.05, ** <i>p</i><0.01 and *** <i>p</i><0.001.</p

Kinetics of pro-inflammatory proteins synthesized by infected CMH5.

<p>A and B: cytokine expression profiles; C and D: chemokine expression profiles; E and F: growth factor and SERPIN E1 expression profiles were determined after 8 h, 14 h, 24 h and 48 h infection by two strains of <i>T. gondii</i> RH (Figure 2A, 2C and 2E) and PRU (Figure 2B, 2D and 2F). A basal expression level for each pro-inflammatory protein <i>T. gondii</i> burden was determined at T₀. Concentrations of immune mediators were calculated using values of corrected pixels obtained from uninfected cells (negative control) subtracted from pixel values of infected cells. <i>T. gondii</i> burdens were evaluated by the percentage of <i>Toxoplasma</i> multiplication, knowing that the parasite burden at T₀ is 100%. *<i>p</i><0.05, ** <i>p</i><0.01 and *** <i>p</i><0.001.</p

Outbreak of Amazonian Toxoplasmosis: A One Health Investigation in a Remote Amerindian Community

International audienceBackground: Toxoplasma gondii is a parasite of worldwide importance but its burden in indigenous communities remains unclear. In French Guiana, atypical strains of T. gondii originating from a complex rainforest cycle involving wild felids have been linked to severe infections in humans. These cases of Amazonian toxoplasmosis are sporadic and outbreaks are rarely described. We report on the investigation of an outbreak of acute toxoplasmosis in a remote Amerindian village. We discuss the causes and consequences of this emergence.Methods: In May 2017, during the rainy season and following an episode of flooding, four simultaneous cases of acute toxoplasmosis were serologically confirmed in two families living the village. Other non-diagnosed cases were then actively screened by a medical team along with epidemiological investigations. Inhabitants from nine households were tested for T. gondii antibodies and parasite DNA by PCR when appropriate. Samples of water, cat feces and cat rectal swabs, soil, and meat were tested for T. gondii DNA by PCR. Positive PCR samples with sufficient DNA amounts were genotyped using 15 microsatellite markers.Results: Between early May and early July 2017, out of 54 tested inhabitants, 20 cases were serologically confirmed. A fetus infected at gestational week 10 died but other cases were mild. Four patients tested positive for parasite DNA and two identical strains belonging to an atypical genotype could be isolated from unrelated patients. While domestic cats had recently appeared in the vicinity, most families drank water from unsafe sources. Parasite DNA was recovered from one water sample and nine soil samples. Three meat samples tested positive, including wild and industrial meat.Conclusions: The emergence of toxoplasmosis in such a community living in close contact with the Amazon rainforest is probably multifactorial. Sedentary settlements have been built in the last few decades without providing safe water sources, increasing the risk of parasite circulation in cases of dangerous new habits such as cat domestication. Public health actions should be implemented in these communities such as safe water supply, health recommendations, and epidemiological surveillance of acute toxoplasmosis. A “One Health” strategy of research involving medical anthropology, veterinary medicine, and public health needs to be pursued for a better understanding of the transmission routes and the emergence of this zoonosis